MHC抗原加工递呈HLA—DO基因多态性与HCV感染易感性的分子流行病学研究

路滟　林凌云　周铮　谭京广　曹彬　许曦　谢旭　梅树江

【摘要】 目的 探討主要组织相容性复合体（MHC）抗原加工递呈相关基因HLA-DOA和HLA-DOB多态性与丙型肝炎病毒（HCV）易感性的关系。方法 选取994例静脉注射吸毒人群， 均进行检测血清中抗-HCV， 将抗-HCV阴性者493例作为抗-HCV阴性组， 抗-HCV阳性者501例作为抗-HCV阳性组。分析HLA-DOA和HLA-DOB基因SNPs与HCV感染易感性的关系以及环境-基因的交互作用。结果 研究对象中年龄最小12岁， 最大64岁， 抗-HCV阳性组平均年龄（36.0±7.5）岁， 抗-HCV阴性组平均年龄（34.0±7.9）岁；抗-HCV阳性组年龄略高于抗-HCV阴性组， 差异有统计学意义（P<0.01）。两组性别构成比较差异无统计学意义（P=0.155>0.05）；非深圳户籍人口抗-HCV阳性率（51.8%）略高于深圳户籍（40.0%）， 差异有统计学意义（P<0.05）。两组在文化程度上均以初中及以下为主， 但在构成上比较差异有统计学意义（P<0.05）， 抗-HCV阴性组的高中及以上学历构成（24.3%）高于抗-HCV阳性组（17.0%）。抗-HCV阳性组谷丙转氨酶和谷草转氨酶的水平显著高于抗-HCV阴性组（P<0.01）。在吸毒人群中， HLA-DOA rs3128935 T→C和HLA-DOB rs2071469 A→G突变的改变均能显著降低个体感染HCV的风险， 在调整了年龄、性别、户籍和文化程度以后， 携带突变等位基因纯合子的个体发生HCV感染的可能性降低一半， OR值分别为0.32和0.50， P<0.01。结论 HLA-DOA rs3128935和HLA-DOB rs2071469突变的改变均能显著降低吸毒人群感染HCV的风险。

【关键词】 丙型肝炎病毒；遗传多态性；抗原加工递呈；感染结局；中国人群

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.32.001

【Abstract】 Objective To investigate relationship between major histocompatibility complex （MHC） antigen processing machinery related HLA-DOA and HLA-DOB polymorphism and hepatitis C virus （HCV） infection susceptibility. Methods A total of 994 intravenous drug abuse people all received serum anti-HCV detection. 493 cases with negative anti-HCV were taken as negative anti-HCV group， and 501 cases with positive anti-HCV cases as positive anti-HCV group. Analysis was made on relationship between SNPs of HLA-DOA， HLA-DOB and HCV infection susceptibility， and reciprocal action of environment-gene. Results The youngest case aged 12 years old and the eldest case aged 64 years old， with mean age as （36.0±7.5） years old in positive anti-HCV group and （34.0±7.9） years old in negative anti-HCV group. Age in the positive anti-HCV group was slightly higher than the negative anti-HCV group， and the difference had statistical significance （P<0.01）. There was no statistically significant difference of gender composition between the two groups （P=0.155>0.05）. Migrant population without registered Shenzhen residence had higher positive anti-HCV rate （51.8%） than drug abuse population with registered Shenzhen residence （40.0%）， and the difference had statistical significance （P<0.05）. Both groups had main educational level under junior high school， while their difference of composition had statistical significance （P<0.05）. The negative anti-HCV group had higher proportion of educational level above senior high school （24.3%） than the positive anti-HCV group （17.0%）. The positive anti-HCV group had much higher alanine transaminase and aspartate aminotransferase levels than negative anti-HCV group （P<0.05）. Changes of HLA-DOA rs3128935 T→C and HLA-DOB rs2071469 A→G mutation remarkably reduce individual HCV infection risk in drug abuse population. Regulation of age， gender， census register and education level led to half reduced possibility of HCV infection in mutation isoallele homozygote individual， along with OR value as 0.32 and 0.50 （P<0.01）. Conclusion Changes of HLA-DOA rs3128935 and HLA-DOB rs2071469 mutation can remarkably reduce HCV infection risk in drug abuse population.

【Key words】 Hepatitis C virus； Genetic polymorphism； Antigen processing machinery； Infection outcome； Chinese population

丙型肝炎（简称丙肝）是由HCV（hepatitis C virus）感染引起的一种肝脏疾病， 主要经血液传播， 人类对HCV普遍易感。丙肝在普通人群中的感染率约为3.2%， 在吸毒人群中可达18.30%～66.97%， 静脉注射吸毒人群更是高达75%[1， 2]。宿主在HCV感染后不同的临床发展过程， 除了与病毒株的性质相关， 也与宿主自身的遗传背景相关。人类白细胞抗原（human leucocyte antigen， HLA）是人类的主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex， MHC）， 宿主对HCV的细胞免疫反应很大程度上取决于人类HLA基因系统所编码的HLA分子对病毒表位的加工和递呈[3]。因此， HLA基因的多态性改变可能会影响HCV的感染和转归。HLA-DO属于HLAⅡ类基因， DO分子是HLA-DM分子功能的负向调节蛋白， 从而影响外源性抗原的加工递呈过程[4]。本研究运用分子流行病学检测手段进行病例-对照研究， 比较抗-HCV阳性者和抗-HCV阴性者中HLA-DO基因多态性的分布差异， 探讨HLA-DO基因多态性与HCV感染易感性的关系。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取的994例吸毒人员来自于“十一五”和“十二五”国家科技重大专项：“深圳市艾滋病、病毒性肝炎社区综合防治研究”项目建立的吸毒人群队列、深圳市司法局第一强制隔离戒毒所的戒毒人员以及深圳市美沙酮门诊受治者， 本研究采用分子流行病学研究的病例对照设计。所有纳入对象均进行检测血清中抗-HCV， 将抗-HCV阴性者493例作为抗-HCV阴性组， 抗-HCV阳性者501例作为抗-HCV阳性组。采用专门设计的“药物滥用监测调查表”对吸毒人员进行调查， 在知情同意的基础上由专业人员经过培训后对调查对象进行逐项询问填写， 内容包括社会人口学资料、吸毒史等。

1. 2 實验室检测 经知情同意后， 采集研究对象空腹静脉血5 ml， 分离上层血清、中间层白细胞和下层红细胞， 分别置1.5 ml 离心管中， -20℃冷冻保存。抗-HCV检测采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）。诊断试剂由北京万泰生物药业有限公司提供， 均严格按照试剂盒说明书操作与判断结果。检测仪器使用芬兰雷勃Multiskan MK3 中文酶标仪， 洗板机为Bio-Tek 公司ELx50 型号。基用蛋白酶K和酚-氯仿处理白细胞， 提取基因组DNA。采用TaqMan探针方法， 使用ABI Prism?7900HT型荧光定量PCR仪对HLA-DOA、HLA-DOB基因多态位点进行基因分型。

1. 3 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验；影响因素Logistic回归分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 两组研究对象的一般社会人口学特征比较 研究对象中年龄最小12岁， 最大64岁， 抗-HCV阳性组平均年龄（36.0±7.5）岁， 抗-HCV阴性组平均年龄（34.0±7.9）岁；抗-HCV阳性组年龄略高于抗-HCV阴性组， 差异有统计学意义（P<0.01）。两组性别构成比较差异无统计学意义（P=0.155>0.05）；非深圳户籍人口抗-HCV阳性率（51.8%）略高于深圳户籍（40.0%）， 差异有统计学意义（P<0.05）。两组在文化程度上均以初中及以下为主， 但在构成上比较差异有统计学意义（P<0.05）， 抗-HCV阴性组的高中及以上学历构成（24.3%）高于抗-HCV阳性组（17.0%）。抗-HCV阳性组谷丙转氨酶和谷草转氨酶的水平显著高于抗-HCV阴性组（P<0.01）。见表1。

2. 2 HLA-DOA 、HLA-DOB基因多态性与HCV 感染易感性的关联 在吸毒人群中， HLA-DOA rs3128935 T→C和HLA-DOB rs2071469 A→G突变的改变均能显著降低个体感染HCV的风险， 在调整了年龄、性别、户籍和文化程度以后， 携带突变等位基因纯合子的个体发生HCV感染的可能性降低一半， OR值分别为0.32和0.50， P<0.01。见表2。

3 讨论

本研究从HapMap中国人群SNPs数据库中筛选出HLA-DOA基因的rs3128935和HLA-DOB rs2071469两个潜在功能性位点， 采用病例对照研究设计， 探讨HLA-DO基因多态性与吸毒人群HCV感染易感性的关系。结果表明， HLA-DOA rs3128935和HLA-DOB rs2071469位点的改变均能显著降低个体感染HCV的风险， 在调整了年龄、性别、户籍和文化程度以后， 携带突变等位基因纯合子的个体发生HCV感染的可能性降低一半。

目前， 丙型肝炎发病机制和慢性化机理尚未研究清楚。但是诸多研究认为HCV感染后不同的临床结局不仅取决于病毒株的性质， 同时也与宿主对HCV 感染的遗传易感性有关。另外， 很多研究表明宿主对HCV的易感性与人类MHC HLA基因多态性有关， 但以往对于HLA基因多态性的相关研究通常大多是聚焦于HLA Ⅰ类和Ⅱ类经典基因的研究上， 而对于HLA非经典基因多态性与疾病特别是HCV感染易感性的关系研究很少。HLA-DO基因属于HLA非经典基因， 由于其产物在机体免疫应答的抗原递呈过程中起到重要作用[4-7]。因此， 作者推测HLA-DO的多态性很可能与HCV 的易感性有关。

本次研究结果显示， HLA-DOB rs2071469位點的改变与HCV感染易感性显著相关。与携带A等位基因的个体相比， 携带G等位基因的个体， 尤其是吸毒人群， 发生HCV感染的几率下降一半。HLA-DOB rs2071469位点位于5UTR， 其改变对蛋白的表达和活性的影响仍旧需要更多的研究来支持。除此之外， 研究还显示HLA-DOA rs3128935 T→C的改变同样与HCV感染易感性显著相关， 携带C等位基因的吸毒人群与携带T等位基因的吸毒人群相比， 其感染HCV的风险降低。研究发现HLA-DOA rs3128935 T→C的改变能影响HCV感染后的转归。

目前， 关于DO 分子的功能仍不清楚。已知， 在B细胞中， HLA- DO 作为DM分子的分子伴侣， 负性调节外源性抗原内吞途径中HLA- DM分子的作用， 从而负性调节抗原的递呈过程， 减少抗体的产生和免疫复合物的形成[4]。因此， 需要更多功能性的研究来验证本研究的结果。

参考文献

[1] Bao YP， Liu ZM. Systematic review of HIV and HCV infection among drug users in China. International Journal of Std & Aids， 2009， 20（6）：399-405.

[2] Xia X， Luo J， Bai J， et al. Epidemiology of hepatitis C virus infection among injection drug users in China： Systematic review and meta-analysis. Public Health， 2008， 122（10）：990-1003.

[3] Cui Q， Zhang Y， Su J， et al. The association between the genetic polymorphisms of LMP2/LMP7 and the outcomes of HCV infection among drug users. J Biomed Res， 2010， 24（5）：374-380.

[4] Bellemare-Pelletier A， Tremblay J， Beaulieu S， et al. HLA- DO transduced in human monocyte - derived dendritic cells modulates MHCclass Ⅱ antigen processing. J Leukoc Biol， 2005（78）：95-105.

[5] 丁克琴. 抗原加工提呈相关基因HLA-DM多态性与高危人群HCV感染转归的关系. 南京医科大学， 2012.

[6] 王佳佳. HCV基因型分布及HLA-DP基因多态性与高危人群HCV感染转归的关系. 南京医科大学， 2014.

[7] 薛兴欣. 血浆IL-18水平及Toll样受体7基因多态性与高危人群HCV感染转归关系的研究. 南京医科大学， 2015.

[收稿日期：2016-10-16]