CBX7在喉鳞状细胞癌组织中的表达及意义

张行，李巍，季文樾

(中国医科大学附属盛京医院，沈阳110004)

CBX7在喉鳞状细胞癌组织中的表达及意义

张行，李巍，季文樾

(中国医科大学附属盛京医院，沈阳110004)

目的 观察喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中CBX7 mRNA和蛋白的表达，探讨其在LSCC发生发展中的作用。方法 收集手术切除的LSCC组织及对应的癌旁正常黏膜组织60例，采用real-time PCR法检测CBX7 mRNA表达，Western blot法检测CBX7蛋白表达，分析CBX7 mRNA和蛋白表达与LSCC患者临床病理特征的关系。结果 LSCC组织和癌旁正常黏膜组织中CBX7 mRNA的相对表达量分别为6.79±2.36、1.04±0.51，LSCC组织和癌旁正常黏膜组织中CBX7蛋白的相对表达量分别为0.51±0.16、0.15±0.08，LSCC组织中CBX7 mRNA和蛋白的表达均高于癌旁正常黏膜组织(P均<0.01)。临床分期高、合并颈部淋巴结转移、组织分化程度低者CBX7 mRNA和蛋白表达高于临床分期低、无颈部淋巴结转移、组织分化程度高者(P均<0.01)。结论 LSCC组织中CBX7表达升高，CBX7参与了肿瘤形成和转移过程，可能成为LSCC治疗的新靶点和预后评价指标。

喉鳞状细胞癌；喉癌；CBX7蛋白；CBX7 mRNA；细胞增殖

喉鳞状细胞癌(LSCC)是喉恶性肿瘤的主要类型，占所有喉癌患者的95%[1]。目前喉癌的治疗以手术为中心的综合治疗为主，但中晚期喉癌由于复发及转移的原因致死率仍较高，而且使多数患者失去语言功能[2，3]。T3、T4期喉癌5年生存率只达到50%，因此，对于喉癌分子生物学机制的研究十分重要，其对确定喉癌治疗的新靶点也有着重要意义。PcG蛋白家族可以作用于染色体的不同位点，导致染色体变构，从而调控细胞增殖、衰老及肿瘤形成[4]。CBX7蛋白是多梳蛋白家族(PcG)成员[5，6]。最近研究表明，CBX7在肿瘤形成过程中具有重要作用，其主要通过经典的Rb及p53信号通路发挥抑制细胞衰老及延长细胞寿命的作用。Zhang等[7]报道，CbX7在胃癌中发挥着原癌基因的作用。目前关于CBX7在LSCC发病中作用的报道较少。2014年11月～2016年1月，我们通过检测LSCC组织中CBX7 mRNA及其蛋白表达，分析其与LSCC临床病理特征的关系，为CBX7在LSCC的靶向治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2011～2014年在我院行手术切除治疗的60例LSCC患者，均经病理检查确诊，术前未接受放化疗。行部分喉切除术41例，全喉切除术19例。临床分期Ⅱ期26例，Ⅲ期24例，Ⅳ期10例。合并颈部淋巴结转移24例，无颈部淋巴结转36例。取手术切除的癌组织标本作为观察组，19例全喉切除患者距肿瘤边缘2 cm以上的喉旁黏膜组织作为对照组，置液氮中-80 ℃保存。

1.2 CBX7 mRNA检测 采用real-time PCR法。用TRIzol通用型RNA快速提取试剂盒提取组织标本中的总RNA，使用反转录酶进行反转录，2×Ex TaqMix试剂盒进行扩增。以GAPDH作为内参。根据GenBank提供的CBX7序列，应用Primer Premier5.0软件进行引物设计。CBX7引物序列：上游5′-CATGGAGCTGTCAGCCATC-3′，下游5′-CTGTACTT-TGGGGGCCATC-3′。PCR反应条件：95 ℃预变性5 min，95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，40个循环。以2-ΔΔCt表示目的基因相对表达量，>1为表达上调，<1为表达下调。

1.3 CBX7蛋白检测 采用Western blot法。取冻存的组织样本，用RIPA裂解液提取样本总蛋白，分别取相同质量的蛋白样品上样10% SDS-PAGE电泳后转印至PVDF膜。经5%脱脂奶粉室温封闭1.5 h，加入CBX7(1∶1 000)一抗以及GAPDH(1∶1 000)一抗4 ℃孵育过夜。TBST洗膜3次，加入辣根过氧化物酶标记的二抗(1∶1 000)室温孵育1.5 h。TBST洗膜3次，ECL显影。以目的条带与内参CAPDH的OD值的比值表示目的蛋白的相对表达量。

2 结果

2.1 两组CBX7 mRNA和蛋白表达比较 观察组CBX7 mRNA阳性表达率为100%，对照组为65.0%，两组阳性表达率比较，P<0.01。两组CBX7 mRNA相对表达量分别为6.79±2.36、1.04±0.51，CBX7蛋白相对表达量分别为0.51±0.16、0.15±0.08，观察组CBX7 mRNA和蛋白表达均高于对照组(P均<0.01)。

2.2 CBX7 mRNA和蛋白表达与LSCC临床病理特征的关系 见表1。临床分期高、合并颈部淋巴结转移、组织分化程度低者CBX7 mRNA和蛋白表达分别高于临床分期低、无颈部淋巴结转移、组织分化程度高者(P均<0.01)。

表1 CBX7 mRNA及蛋白表达与临床病理参数的关系

3 讨论

CBX7在肿瘤形成过程发挥重要作用，其在胃癌[7]、前列腺癌[8]、膀胱癌[9]、甲状腺癌[10]、大肠癌[11]等恶性肿瘤中均有异常表达。但目前关于CBX7与LSCC关系的报道较少。作为PcG的一员，CBX7具有和家族其他成员相似的功能和分子机制，包括抑制细胞衰老和延长正常细胞寿命，其作用主要通过下调INK4a/ARF肿瘤抑制因子的表达来实现[8，12，13]。CBX7过量表达可导致T细胞淋巴瘤形成，与c-Myc协作产生具有高度侵略性的B细胞淋巴瘤已经在转基因鼠上得以证实[14]。还有研究表明，CBX7过表达可促进小鼠胚胎成纤维细胞的存活[13]。以上研究表明，CBX7作为原癌基因参与了肿瘤的形成过程。然而也有研究显示，CBX7可能具有潜在的肿瘤抑制作用，在一些更有浸润性的胰腺、甲状腺、结直肠肿瘤[10，11，15]中发现CBX7表达下调或缺失。在不同研究中CBX7的两种截然相反的表达水平可能归结于不同的肿瘤类型。CBX7在肿瘤形成过程中的作用和机制也远未明确。其在不同的癌症包括喉癌和病理学类型中的作用需要更深入的研究。

本研究发现，LSCC组织中CBX7 mRNA相对表达量明显高于其相应的癌旁组织，且CBX7的表达与组织分化程度、临床分期、淋巴结转移有关，表现为组织分化程度越低、临床分期越晚、出现淋巴结转移，CBX7表达增高更明显，而与患者年龄、性别无明显关联。因此认为，CBX7在食管鳞癌组织中表达上调，可能引起某种促癌机制活化，导致食管鳞癌发生、发展、侵袭和转移。但其发生机制尚不清楚，有待进一步研究。

综上所述，CBX7在喉癌的形成过程中发挥了原癌基因的作用，对了解喉癌的发生机制和实施预后评价有重要意义。然而，对CBX7的抑制功能及机制也需要更加深入研究，包括明确它作用的直接受体等，进而期待其在CBX7过表达的LSCC及其他恶性肿瘤的免疫治疗领域发挥一定作用。

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季文樾(E-mail: ebhzzy3@sj-hospital.org)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.06.025

R739.6

B

1002-266X(2017)06-0073-03

2016-10-12)