肺腺癌组织中RNA结合蛋白38的表达及意义

尚自强，王洪江，杜同心，王勇涛，冯雪，童莹

(1新疆医科大学附属肿瘤医院，乌鲁木齐830011；2新疆维吾尔自治区肿瘤防治研究所)

肺腺癌组织中RNA结合蛋白38的表达及意义

尚自强1，王洪江1，杜同心1，王勇涛1，冯雪2，童莹1

(1新疆医科大学附属肿瘤医院，乌鲁木齐830011；2新疆维吾尔自治区肿瘤防治研究所)

目的 观察肺腺癌组织中RNA结合蛋白38(RNPC1)mRNA和蛋白的表达，探讨其在肺腺癌发生发展中的作用。方法 取50例肺腺癌患者的癌组织(观察组)和对应的癌旁组织(对照组)。采用RT-PCR法检测两组RNPC1 mRNA相对表达量，Western blot法检测两组RNPC1蛋白相对表达量。结果 观察组RNPC1 mRNA及蛋白的相对表达量分别为0.357±0.170、0.294±0.149；对照组分别为0.271±0.128、0.206±0.099；观察组RNPC1 mRNA及蛋白表达量均高于对照组(P均<0.01)。RNPC1 mRNA表达与肺腺癌患者TNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05)，RNPC1蛋白表达与肺腺癌患者浸润深度、TNM分期有关(P均<0.05)。结论 RNPC1在肺腺癌组织中呈高表达，在肺腺癌的发生发展过程中起重要作用。

肺肿瘤；肺腺癌；RNA结合蛋白38；肿瘤浸润；肿瘤分期

肺癌是目前全世界发病率最高的恶性肿瘤，多数患者发现时已为晚期，丧失了手术治疗机会。目前兴起的分子靶向治疗在手术、放化疗等传统方式之外开辟了新的治疗途径。RNA结合蛋白38(RNPC1)是公认的致癌基因，可通过抑制抑癌基因p53的表达，促进肿瘤发生发展。国外报道，RNPC1在前列腺癌、结直肠癌、淋巴瘤等多种肿瘤组织中呈高表达，但关于其在肺腺癌中的表达情况少见报道。

本研究观察了肺腺癌组织中RNPC1基因及蛋白的表达情况，探讨RNPC1基因在肺腺癌发生发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 随机选取2012年10月～2015年6月新疆医科大学附属肿瘤医院收治的肺腺癌患者50例，男40例、女10例，年龄41～79(64.1±9.6)岁。TNM分期Ⅰ期16例、Ⅱ期16例、Ⅲ期18例，细胞分化程度低分化9例、中分化33例、高分化8例，浸润深度T1～T2期35例、T3～T4期15例，合并淋巴结转移27例。术中取癌组织(观察组)以及远隔癌灶5 cm以上癌旁正常组织(对照组)。标本取材后立即置于液氮中速冻，-80 ℃保存备用。

1.2 RNPC1 mRNA表达检测 采用RT-PCR法。采用Primer5.0软件设计引物，由上海生工生物工程股份有限公司合成。RNPC1上游引物：5′-ACTACCGACGCCTCGCTCAG-3′，下游引物5′-CCCAGATATGCCAGGTTCAC-3′，扩增片段长度约200 bp；内参GAPDH上游引物5′-CGCGGGCTCTCCAGAACATCAT-3′，下游引物5′-CCAGCCCCAGCGTCAAAGGTG-3′，扩增片段长度约301 bp。应用TRIzol法提取组织总RNA，逆转录获得cDNA，以cDNA为模板进行扩增。扩增条件：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性30 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35个循环；72 ℃ 6 min。取扩增产物5 μL、Marker 3 μL，2%琼脂糖凝胶电泳，Imaging Lab凝胶图像处理系统分析目标条带及内参条带的积分光密度值，以目的基因与内参GAPDH积分光密度值的比值作为RNPC1 mRNA的相对表达量。

1.3 RNPC1蛋白表达检测 采用Western blot法。按照试剂盒说明进行蛋白提取及总蛋白浓度测定。按制胶试剂盒制胶，于12%分离胶及5%浓缩胶上电泳，冰浴中转膜。转膜后5%脱脂牛奶室温封闭120 min，加入鼠抗人RNPC1单克隆抗体(1∶200，美国Santa Cruz公司)或内参β-actin(1∶750)置摇床，4 ℃孵育过夜，孵育二抗(1∶7 500)后使用ECL发光试剂盒曝光显影。所得图像采用Imaging Lab图像分析软件进行分析。RNPC1蛋白主要作用由其亚型RNPC1a发挥，故测定RNPC1a蛋白调整体积与同一标本内参蛋白β-actin调整体积的比值作为RNPC1蛋白的相对表达量。

2 结果

2.1 两组RNPC1 mRNA及蛋白表达比较 观察组和对照组RNPC1 mRNA的相对表达量分别为0.357±0.170、0.271±0.128，RNPC1蛋白的相对表达量分别为0.294±0.149、0.206±0.099，观察组RNPC1 mRNA及蛋白表达均高于对照组(P均<0.01)。

2.2 RNPC1 mRNA及蛋白表达与肺腺癌患者临床病理特征的关系 RNPC1 mRNA表达与肺腺癌TNM分期、浸润深度、有无淋巴结转移有关(P均<0.05)，RNPC1蛋白表达与肺腺癌浸润深度、TNM分期有关(P均<0.05)。见表1。

表1 RNPC1 mRNA及蛋白表达与肺腺癌患者临床病理特征的关系

3 讨论

随着分子靶向治疗研究的进展，目前肺癌已有包括EGFR、ALK、KRAS、VEGF基因等分子靶向治疗药物，但这些靶向药物的最佳适用人群尚不能包含全部肺癌患者，且分子靶向治疗药物存在不良反应多、耐受性差、耐药等不足[1]。因此寻找新的基因靶点，将会丰富肺癌临床分子靶向治疗的选择。

抑癌基因p53在保护基因组的完整性和预防癌症的发生过程中起重要作用，p53功能缺失是肿瘤发生发展的重要因素[2]。RNPC1可通过抑制p53的翻译发挥其在肿瘤发生发展过程中的作用。p53基因5′端的非翻译区(UTR)或3′端的UTR为RNPC1抑制p53表达的区域[3]。RNPC1定位于20q13[4]，编码一个RNA结合蛋白，表达为两个亚型，即含有239个氨基酸的RNPC1a和含121个氨基酸的RNPC1b[5]。RNPC1a可阻止真核生物起始因子4E(eIF4E)结合p53 mRNA。它依赖其氨基端结合在p53 mRNA上，同时其羧基端控制区与eIF4E结合，通过这种方式阻止eIF4E与p53 mRNA结合。其结果是p53的翻译起始复合体被破坏，从而降低p53的翻译水平[4，6]，促进肿瘤的发生发展。RNPC1作为公认的致癌基因，其基因位点在多种肿瘤中表达活跃，包括前列腺癌、卵巢癌、结直肠癌、慢性淋巴细胞白血病、食管癌、乳腺癌和胃癌细胞MGC-823[7～13]。本研究结果显示，RNPC1 mRNA及蛋白在肺腺癌组织中呈高表达，其表达水平与患者性别、年龄及肿瘤分化程度无关。RNPC1 mRNA与肿瘤浸润程度、淋巴结转移及临床病理分期关系密切；RNPC1蛋白与肿瘤浸润程度及临床病理分期关系密切。表明RNPC1在肿瘤发生发展中具有重要作用。

综合目前国内外相关报道，绝大多数研究结果提示RNPC1对肿瘤的发生发展主要起促进作用。然而，Xue等[14]在乳腺癌中的研究与本文结论相反，他们发现RNPC1在乳腺癌组织中的表达低于癌旁组织。研究表明，RNPC1可以靶向调节p53、MDM2等多个基因，但对这些靶基因的调节作用不尽相同。一方面，RNPC1可抑制p53的翻译促进肿瘤发生；另一方面，其可通过结合MDM2基因3′端UTR的多个位点抑制MDM2表达，而MDM2基因编码的蛋白p90能与p53基因结合，使p53基因失去正常功能[15]。这或许是RNPC1在不同肿瘤组织中有不同功能的作用基础。

综上所述，RNPC1与肺腺癌关系密切，其高表达提示肺腺癌浸润深度较深，TNM分期较晚。RNPC1可促进肺腺癌的发生发展，可能成为人类肺腺癌分子靶向治疗的一个潜在靶点。

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王洪江(E-mail: whj71210@sina.com)

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1002-266X(2017)06-0045-03

2016-08-15)