浅析4家药企洁净室环境检出菌

2017-05-25李倩顾珉

中国卫生产业 2017年10期

关键词：洁净室革兰氏消毒剂

李倩，顾珉

苏州市药品检验检测研究中心，江苏苏州215000

浅析4家药企洁净室环境检出菌

李倩，顾珉

苏州市药品检验检测研究中心，江苏苏州215000

目的收集4家药企洁净室环境中24株微生物并进行初步鉴定，旨在了解洁净室微生物污染趋势。方法4家药企采用平皿法收集洁净室环境中的微生物，通过Vitek2-compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统鉴定收集到的环境菌并进行分析。结果共检出8种革兰氏阳性球菌、3种革兰氏阳性芽孢杆菌、2种革兰氏阴性杆菌。其中革兰氏阳性菌占检出菌的87.5%，革兰氏阴性菌占检出菌的12.5%、革兰氏阳性球菌占检出菌的75.0%、革兰氏芽孢杆菌占检出菌的12.5%、革兰氏阴性杆菌占检出菌的12.5%。结论4家药企洁净室收集的24株环境微生物主要检出菌类为革兰氏阳性球菌，各洁净室需采取相应的消毒措施对其控制。

Vitek2-compact；洁净室；细菌鉴定

随着新版GMP的实行，药企越来越重视生产车间的环境监测。不仅要控制空气中的悬浮气溶胶粒子，还需监控生产环境中活的微生物。该实验收集4家药企洁净室环境中24株微生物并进行初步鉴定，旨在了解洁净室微生物污染趋势，并采取相应措施对污染微生物进行控制。

1 试验部分

1.1 样本

2016年1月—12月间4家药企洁净室共收集24株环境菌送检，送检样本编号为1#～24#。

1.2 培养基

胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）

1.3 试剂及试验耗材

革兰氏染色试剂、Vitek2-compact配套灭菌生理盐水、一次性接种环、一次性接种棉签、GP（革兰阳性）鉴定卡、GN（革兰阴性）鉴定卡、BCL（芽孢杆菌）鉴定卡

1.4 仪器

生物安全柜（型号：Esco LA2-4A1）、生化培养箱（型号：LRH-50）、麦氏浊度比浊仪、生物显微镜（型号：BX53）、Vitek2-compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统、高压蒸汽灭菌器（型号：MLS-3781L-PC）。

2 试验步骤

2.1 待鉴定菌株分离纯化

将24株送检样本分别划线转种至胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）平板，置32℃培养24 h，得到单菌落。

2.2 革兰氏染色及镜检

从24株样本转种的TSA平板挑取单菌落进行革兰氏染色，将已染色的玻片，放在显微镜下观察，记录所得结果。

2.3 采用Vitek2-compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统鉴定

根据镜检结果，另挑取上述24株样本菌落适量，将革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌用灭菌生理盐水制成比浊度约0.5～0.6之间的菌悬液，将革兰氏阳性芽孢杆菌用灭菌生理盐水制成比浊度约2.0的菌悬液，并选择对应的鉴定卡片将制备的菌悬液放入鉴定仪器样品架上机检测。

3 鉴定结果分析

从表1可以看出，大多数鉴定结果都在90.00%以上，说明检测可信度较好，只有一株菌的鉴定结果为85.00%，说明检测可信度可以接受。24株环境菌中共检出8种革兰氏阳性球菌、3种革兰氏阳性芽孢杆菌、2种革兰氏阴性杆菌。检出频率最高的是沃氏葡萄球菌，其次是藤黄/里拉微球菌。

从图1和图2可以看出革兰氏阳性菌占检出菌的87.50%，革兰氏阴性菌占检出菌的12.50%；革兰氏阳性球菌占检出菌的75.00%、革兰氏芽孢杆菌占检出菌的12.50%、革兰氏阴性杆菌占检出菌的12.50%。

4 对策

从上述菌型分析结果可得出，这4家药企洁净室环境菌检出率最高的是革兰氏阳性球菌，而居其首位的是沃氏葡萄球菌和藤黄/里拉微球菌，这两种菌均为洁净室环境的主要菌群，沃氏葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，主要存在于环境、人与动物的皮肤及粘膜上，显微镜下呈葡萄串状。藤黄/里拉微球菌主要分布在空气、土壤、水、动植物体表。这两种菌极有可能为洁净室人员带入，应做好进出人员的防护，还必须加强洁净室环境灭菌消毒的管理与监控。

表1 24株环境菌Vitek2-compact鉴定结果

4.1 消毒剂消毒

消毒剂分非氧化型和氧化型，非氧化型消毒剂如季铵盐类化合物一般不具备杀灭芽孢的能力，其杀菌谱较窄，对绿脓杆菌等革兰阴性菌作用也较差，对细菌芽孢基本无效[1]。而氧化型消毒剂如过氧乙酸、二氧化氯、次氯酸盐等可在不同程度上杀灭芽孢[2]。有文献报道国外现普遍采用戊二醛喷洒，且加入阳离子表面活性剂（如季铵盐）能明显增强戊二醛对细菌芽孢的灭杀作用[3]。检出革兰氏阳性芽孢杆菌的药企洁净室需引起重视，根据洁净室检出菌选择合理的杀孢子剂。药企洁净室的日常消毒剂的种类必须多余一种，可减少微生物出现耐药性的风险。各药企洁净室需根据消毒剂的杀菌谱、功效等选择合理的洁净室消毒剂。

4.2 空气消毒

4.2.1 紫外线照射法紫外线在波长250～270 um时杀菌作用最强，可杀灭各种微生物包括细菌繁殖体、细菌芽孢、真菌等[4]。但各药企洁净室的紫外灯灯管吊装高度、照射时间、日照射次数、季度检测紫外灯辐射强度、使用的环境温湿度等都必须符合要求。

图1 24株环境菌污染趋势分析图

图2 24株环境菌菌型分析统计图

4.2.2 臭氧消毒法臭氧可杀灭细菌繁殖体、真菌等。在密闭的空间内、无人状态下，采用20 mg/m3浓度的臭氧作用30min，对自然菌的杀灭率达到90.0%以上[5]。

4.2.3 过氧化氢干雾灭菌比传统甲醛熏蒸更有优势，体现在无毒、无色、无味、log4-log6的光谱高效灭菌效果，整体灭菌只需3～4 h，表面空间均无残留，不需清洁处理等。过氧化氢干雾消毒效果优于臭氧消毒，体现在臭氧很难达到杀灭孢子的效果，一般只能杀活菌，而过氧化氢杀菌效力广谱高效，可同时杀灭200种微生物，30 min对黑色枯草芽孢、嗜热脂肪芽孢杆菌的杀灭率稳定[6]。

4.3 化学与物理方法联用消毒

常采用的物理因子有热力、紫外线、微波、超声波、电离辐射。将这些物理因子与化学消毒剂联用，也可使用两种或两种以上化合物组成复方消毒剂，也可获得更好的杀菌效果[7]。