伏生紫堇提取工艺研究

2017-05-18孙树玲胡庆敏谢莉莎

临床医药文献杂志(电子版) 2017年14期

关键词：紫堇阿片生物碱

孙树玲，胡庆敏，谢莉莎，贾丛

（1.石家庄市智同医药科技有限公司，河北石家庄 050035；2.河北爱尔海泰制药有限公司，河北石家庄 050035）

伏生紫堇提取工艺研究

孙树玲1，胡庆敏2，谢莉莎1，贾丛2

（1.石家庄市智同医药科技有限公司，河北石家庄 050035；2.河北爱尔海泰制药有限公司，河北石家庄 050035）

目的选择合适的提取分离纯化方法，对伏生紫堇的有效部位进行提取，并对提取物中总碱、原阿片碱、比枯枯灵含量进行测定。方法确定伏生紫堇有效部位，对提取溶剂进行选择，通过正交实验设计确定提取工艺，并对有效部位的分离和纯化工艺进行研究。结果按照最终确定的提取分离纯化工艺制备三批中试样品，检验结果表明，样品中总生物碱含量大于80%，比枯枯灵含量控制在5%以下。结论中试样品中伏生紫堇总碱含量符合静脉注射剂投料要求，比枯枯灵含量在安全范围内，所筛选的提取分离纯化工艺稳定可行。

伏生紫堇；原阿片碱；比枯枯灵

罂粟科紫堇属伏生紫堇（夏天无）的干燥块茎，广泛分布于我国南方各省，以江西产质量佳，具有通络，活血祛瘀，行气止痛之功效，用于治疗半身不遂、风湿弊痛等[1]。

1 有效部位的选择

夏天无主要成份为[2]：普鲁托品（原阿片碱）、四氢巴马汀、比枯枯灵等。其中比枯枯灵为有毒成分[3-5]，具有兴奋子宫作用，且有异常强烈的致惊厥作用。市售夏天无注射液尽管疗效确切，但其毒性成分含量较高，只能肌注，且刺激性大。脑血管疾病具有发病快、死亡率高等特点，静脉注射能更快达到控制病程的目的。对夏天无有效部位进行提取，降低比枯枯灵含量，可实现临床用药安全、有效。研究发现，高浓度乙醇的洗脱液中生物碱富集，原阿片碱含量高，比枯枯灵含量低，确定有效部位在高浓度乙醇洗脱液中。

2 药材的前处理及依据

药材购自河北安国药材市场（产地江西省），去除夏天无药材中的泥沙，灰土，石粒，粉碎，取粒径在2～3 mm备用。

3 提取工艺的确定

3.1 提取溶剂选择

报道[6-12]，采用乙醇和盐酸两种溶剂对夏天无块茎进行提取，检测结果见表1。

表1 不同提取方法的检测结果

采用磷酸溶液提取有利于生物碱有效成分的溶出，并可降低比枯枯灵含量。夏天无块茎中含有淀粉等遇热易呈糊状的物质，故提取温度不宜太高，预试发现采用室温（25℃）即可。

3.2 提取工艺的确定

采用磷酸溶液提取夏天无，试验采用L9（34）正交试验法，对磷酸溶液的浓度和用量，提取次数及时间进行考察，正交实验因素水平表见表2。

表2 正交实验因素水平表

根据正交表L9（34），设计9次试验，每次试验称取500 g药材粗粉，结果见表3，方差分析结果见表4。

表3 夏天无提取工艺正交实验表及结果

表4 方差分析

由上可知，A、B因素对提取影响较大,最佳提取方案为A2B3C2D3，即采用5倍药材量的1% H3PO4溶液于室温浸提夏天无粗粉2次，每次24小时。

4 有效部位分离工艺

根据夏天无所含生物碱的结构特点，选取6种不同型号的大孔吸附树脂，通过对载样量、非生物碱和毒性成分的去除及有效部位解吸附情况的考察，筛选出适合本工艺的最优大孔吸附树脂。结果表明，DM-301和D-101大孔吸附树脂从有效成分的富集、杂质和毒性成分的去除等方面均较其它树脂好，既能最大限度地降低毒性成分，又能最低限度地避免有效成分的损失，但D-101的载样量小于DM-301树脂，故选择DM-301树脂。

通过研究洗脱流速、提取液上柱浓度和吸附柱径高比，确定分离工艺为：取夏天无提取浓缩液，加至已预处理的DM-301树脂进行吸附，用1N NaOH溶液洗至深色带流出柱后，用蒸馏水洗至中性，用2倍上柱药材量的50%乙醇洗脱，再用0.8倍上柱药材量的90%乙醇（含0.5%磷酸）洗脱，收集洗脱液。

5 有效部位纯化工艺

通过对洗脱液的浓缩、碱沉pH值、脱盐方法、干燥方法等考察，确定纯化工艺为：90%乙醇柱洗脱液浓缩至相对密度为1.15后，滴加1N氢氧化钠溶液，调pH值10左右，加入氯化钠至饱和，静置过夜，过滤，沉淀物用少量饱和食盐水洗，蒸馏水洗至中性，沉淀物置60℃真空干燥，将烘干的沉淀物加入10倍量的无水乙醇加热溶解，回流30 min，过滤，弃去不溶物，合并滤液，减压浓缩至有结晶析出时，60℃真空干燥即得。