实例说明如何做火焰原子吸收分光光度法的方法学确认

丁 敏，王丽平，马兆堂

（1.江苏省泰州医药园区公共平台中心，江苏 泰州 2253002；2.江苏省泰州医药园区新药申报中心，江苏 泰州 225300）

实例说明如何做火焰原子吸收分光光度法的方法学确认

丁 敏1，王丽平1，马兆堂2

（1.江苏省泰州医药园区公共平台中心，江苏 泰州 2253002；2.江苏省泰州医药园区新药申报中心，江苏 泰州 225300）

目的利用火焰原子吸收分光光度法测定碳酸钙中镉的方法学确认的实例，直观解说火焰原子吸收分光光度法的方法学确认的方法。方法采用原子吸收分光光度法的标准加入法（第二法）测定碳酸钙中镉含量，并考察该方法的线性、重复性、准确度（加标回收率）、检出限和定量限。结果该方法在镉含量0.01～0.08 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.9996），重复性RSD值为14.11%，加样回收率为107.50%，方法确认的各项指标均合格。结论通过碳酸钙中镉含量的方法确认，分析了火焰原子吸收分光光度法的方法确认。

原子吸收分光光度法；方法确认；碳酸钙；镉

方法确认实验室通过试验，提供客观有效证据证明特定检测方法满足预期的用途。方法确认应当建立方法的性能特性和使用的限制条件，并识别影响方法性能的因素及影响程度，确定方法所适用的基体，以及方法的正确度和精密度[1]。适用范围为原料及成品（药品）中不需要进行验证的检验方法以及各国药典方法和其他已经验证的法定的标准，通过方法确认来证明检测方法在自己实验室条件下的适用性。

火焰原子吸收分光光度法的方法确认本文按照中国药典四部的通则9101《药品质量标准分析方法验证指导原则》[2]的内容对线性、重复性、准确度（加标回收率）、检出限和定量限进行考察。收载于《中国药典》的碳酸钙[3]，本文采用火焰原子吸收分光光度法测定碳酸钙中镉含量[4]，以该方法的方法确认为实例，详细呈现火焰原子吸收分光光度法的方法确认的方法。

1 实验仪器及耗材

1.1 实验用仪器

电子分析天平METTLER XS105DU；原子吸收光谱仪ICE 3500（热电公司）；Cu空心阴极灯（热电公司）；纯水机Milli-QAdvantage A10（默克密理博）。

1.2 实验用试剂耗材

镉单元素标准溶液1000μg/mL（中国计量科学研究院GBW08612，批号12106）；硝酸（65～68%，国药集团化学试剂有限公司，优级纯，批号20130718）；实验所用容量瓶（国药集团化学试剂有限公司，10%硝酸浸泡24小时，超纯水洗净晾干）；碳酸钙（上海诺成药业股分有限公司）。

2 实验方法

2.1 溶液的制备

2.1.1 线性溶液的制备

用1%硝酸将镉单元素标准溶液稀释成100 μg/mL，放置冰箱冷藏备用。取100 μg/mL镉标准溶液，以1%硝酸为稀释液，制备成含镉量为0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 μg/mL的一系列溶液。

2.1.2 重复性溶液的制备

精密称取碳酸钙样品4.0 g、5.0 g及6.0 g，每个样品设平行样3份分别置于250 mL容量瓶中，以8%硝酸溶液为溶剂溶解稀释至刻度，摇匀后作为供试品溶液。各取50 mL供试品溶液4份，分别置4个同体积的容量瓶中（标号1～4号），除1号容量瓶外，其他容量瓶分别精密加入2 μg/mL的标准镉溶液2、3、4 mL，再用8%硝酸溶液为溶剂稀释至刻度，制备一系列溶液。

2.1.3 准确度溶液的制备

精密称取碳酸钙样品2.5 g，设平行样3份分别置250 mL容量瓶中，加入8%硝酸溶液溶解，再分别加入0.2 μg/mL标准镉溶液3 mL，再分别加入8%硝酸溶液定容至刻度，摇匀后作为准确度供试品溶液。取50 mL供试品溶液4份，分别置4个同体积的容量瓶中，按照2.1.2的方法制备准确度一系列溶液。

2.1.4 检出限和定量限溶液的制备（同2.1.1）

2.2 仪器条件

镉灯：测定波长228.8 nm；开启氘灯校正背景，通带宽0.5 nm；灯电流50%；原子化方式为空气-乙炔气火焰法；测量时间为4.0 s。

3 实验结果及分析

3.1 线性实验

上述按2.1.1方法制备的供试品溶液，按2.2仪器条件测定，以吸光度（A）为纵坐标、浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，软件可得线性回归方程（最小二乘法进行线性回归）：Y=0.43131x+0.0008，r=0.9996。火焰原子吸收分光光度法一般要求相关系数（r）＞0.998，越接近1相关性及线性越好。

3.2 重复性实验

上述按2.1.2方法制备的供试品溶液，按2.2仪器条件测定，重复性结果见下表1。样品中待测定成分含量和精密度RSD可接受范围。见表2。

3.3 准确度实验

上述按2.1.3方法制备的供试品溶液，按2.2仪器条件测定，准确度结果见下表3。样品中待测定分成含量和回收率限度。见表2。

3.4 检出限和定量限

根据3.1的所得线性回归方程，确认该定量方法在0.01～0.08 μg/mL范围内定量可靠。用火焰法连续测定空白溶液11次，求得空白溶液的标准偏差为0.0003。计算得仪器检出限为3SD/0.43131=0.0021μg/mL，仪器定量限为10SD/0.43131=0.0070 μg/mL，按取样量1.0 g，定容体积100 mL计算，方法定量限为0.70 mg/kg。

表1 重复性实验结果

表2 样品中待测定成分含量对应精密度RSD可接受范围和回收率限度

表3 准确度实验结果

4 结 论

本文实例详细说明火焰原子吸收分光光度法测定碳酸钙中镉含量的检测方法的方法确认。该方法镉含量0.01～0.08 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.9996），重复性RSD值为14.11%，加样回收率为107.50%，检出限为0.0021 μg/mL和定量限为0.70 mg/kg，试验结果表明本方法的线性、重复性、准确度（加标回收率）均符合要求，并给出了该方法的线性范围、检出限及定量限，因此该方法适用于碳酸钙中镉含量的测定。

[1] ISO/IEC Guide 99:2007,国际计量学词汇[S].2007,2.45.

[2] 国家药典委员会编.中国药典(2015年四部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015:TZ9101.

[3] 国家药典委员会编.中国药典(2015年二部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015:1500-1501.

[4] 国家药典委员会编.中国药典(2015年四部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015:TZ41.

本文编辑：李 豆

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ISSN.2095-8242.2017.14.2613.02