毛细管电泳测定维C银翘片中维生素C和扑热息痛*

张晖, 薛洪宝

(蚌埠医学院化学教研室，安徽 蚌埠 233030)

毛细管电泳测定维C银翘片中维生素C和扑热息痛*

张晖, 薛洪宝

(蚌埠医学院化学教研室，安徽 蚌埠 233030)

建立了毛细管电泳测定维C银翘片中维生素C和扑热息痛的方法。采用55 cm(40 cm处检测窗口)×75 μm i. d.熔融石英毛细管，选择pH=8.89的30 mmol·L-1Na2HPO4-30 mmol·L-1脱氧胆酸钠混合溶液作为缓冲溶液，分离电压为+20 kV，以二极管阵列检测器进行检测。结果表明维生素C和扑热息痛的测定线性范围都比较宽，回收率均大于97.6%，相对标准偏差均小于3.2%。方法操作简便、快速、样品消耗极少，能够用于维C银翘片中维生素C和扑热息痛的含量测定。

毛细管电泳；维C银翘片；维生素C；扑热息痛

维C银翘片由连翘、维生素C、对乙酰氨基酚等13味中西药和硬脂酸镁等8种辅料制成的复方制剂，其功效是辛凉解表、清热解毒，主要用于治疗流行性感冒引起的发热头痛、咳嗽、口干、咽喉疼痛等。其中，维生素C 又名抗坏血酸，具有增强免疫力、预防感冒等疾病；对乙酰氨基酚是乙酰苯胺类解热镇痛药，临床上常称扑热息痛。

近年来，维C银翘片中维生素C、扑热息痛的测定方法主要有高效液相色谱(HPLC)法[1- 4]、紫外分光光度法[5- 6]、红外光谱法[7-8]、电化学分析法[9]等。本实验采用毛细管电泳(CE)法同时测定维C银翘片中的维生素C和扑热息痛，能够得到准确测定结果的同时，具有样品处理简单、分析时间短、峰形好等诸多优点[10-12]。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

P/ACETMMDQ毛细管电泳系统(二极管阵列检测器)(Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA)，未涂层熔融石英毛细管(河北永年锐沣色谱器件有限公司)；Lab Tech高效液相色谱仪(Lab Tech UV 600型紫外-可见检测器和P600型高压输液泵两台)(北京莱伯泰科仪器有限公司)，Thermo Scientific APS-ZHYPERSIL Dim色谱柱(5 μm, 250 mm×4.6 mm i.d.)，Platisil NH2氨基色谱柱(5 μm, 150 mm×4.6 mm i.d.)；BS224S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；SB25-12DTN超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；pHS-3C酸度计(上海科学仪器有限公司)；0.22 μm水相混合纤维素酯膜(上海半岛实业有限公司净化器材厂)。

NaH2PO4、Na2HPO4、植酸钠、脱氧胆酸钠、NaOH、NCl、H3PO4、冰醋酸、乙醇、维生素C对照品、扑热息痛对照品等试剂均为分析纯；甲醇、乙腈等为色谱纯；维C银翘片A、B购于本市药店；蒸馏水为双蒸水(本实验室提供)。

1.2 维生素C和扑热息痛对照品溶液、维C银翘片样品溶液的制备

用φ=50%乙醇溶液分别配制维生素C和扑热息痛对照品储备溶液，然后再各取适量混合制备维生素C和扑热息痛对照品的混合储备溶液，再逐级稀释得到所需浓度的维生素C和扑热息痛对照品的混合溶液(棕色容量瓶配制，存放于阴凉避光处，最好随用随配)。

分别取不同批次维C银翘片A、B各10 片，除去包衣，研细。各取细粉约0.3g(相当于一片去包衣维C银翘片的质量)，准确称量，分别置于25mL棕色容量瓶中，加入适量φ=50%乙醇，超声40min，冷却，再用φ=50%乙醇定容，摇匀。过滤，各取续滤液1.00mL，分别置于25mL棕色容量瓶中，加φ=50%乙醇至刻度，摇匀，即得维C银翘片样品A、B的待测溶液。

1.3 空白对照溶液的制备

依据处方量和工艺制备不含维生素C和扑热息痛的空白模拟制剂，按照“1.2”配制空白对照溶液。

1.4 电泳条件

在25 ℃下，采用55cm(40cm处检测窗口)×75μmi.d.熔融石英毛细管，选择pH=8.89的30mmol·L-1Na2HPO4-30mmol·L-1脱氧胆酸钠混合溶液作为缓冲溶液，进样压力为0.5psi，进样时间为3.0s，分离电压为+20kV，以二极管阵列检测器进行检测。

每次进样前顺次用0.1mol·L-1NaOH溶液、0.1mol·L-1HCl溶液、甲醇、缓冲溶液冲洗毛细管各2min。

2 结 果

2.1 线性范围和检出限

分别取“1.2”配制的维生素C和扑热息痛对照品的系列溶液，在“1.4”电泳条件下进样分析，电泳图见图1(c)。

图1 维生素C和扑热息痛对照品的电泳图(a) 空白对照溶液;(b) 维C银翘片样品A溶液; (c) 维生素C和扑热息痛对照品溶液 Fig.1 Electrophorograms of (a) blank control solution,(b) Vitamin C Yinqiao Tablet A solution, (c) a standard mixture solution containing Vitamin C and Paracetamol

以两组分峰面积(y)对相应的质量浓度(x, μg·mL-1)进行线性回归，制备标准曲线，得到两者的线性回归方程和相关系数(r)；按照信噪比(S/N)=3时计算它们的检出限,结果见表1。表1说明：在比较宽的浓度范围内，维生素C和扑热息痛两者的峰面积与相应的浓度线性关系良好，具有较高的灵敏度。

表1 维生素C和扑热息痛的定量分析参数Table 1 Equations, correlation coefficients, linear ranges and detection limits (S/N=3)

2.2 回收率试验

在已经定量的样品A溶液中加入适量的维生素C和扑热息痛对照品，用φ=50%乙醇定容，摇匀。按“1.4”电泳条件进样分析，重复6次。维生素C和扑热息痛的回收率(Recovery)、峰面积的相对标准偏差(RSD)见表2。

2.3 精密度试验

按“1.4”电泳条件，对维生素C和扑热息痛对照品溶液进行电泳分析，重复6次。维生素C和扑热息痛峰面积的RSD分别为1.4%、2.5% (n=6)；迁移时间的RSD分别为1.1%、1.5% (n=6)。表明仪器的精密度很好。

2.4 干扰试验

取“1.3”制备的空白对照溶液，按“1.4” 电泳条件进样分析，重复6次(n=6)，电泳图见图1(a)。图1(a)显示：本试验电泳条件下，维C 银翘片中的其它成分对维生素C和扑热息痛的测定无干扰。

2.5 维C银翘片样品溶液测定

分别取“1.2”配制的维C银翘片样品A、B的溶液，按“1.4”电泳条件进样分析测定，重复6次，样品A的电泳图见图1(b)。

依据表1中维生素C和扑热息痛线性回归方程，由电泳峰面积分别计算A、B样品中维生素C和扑热息痛的浓度，结果见表2。

依据2015年版《中华人民共和国药典》[13]中HPLC法分别测定维C银翘片A、B样品溶液中维生素C和扑热息痛，结果见表2。

表2表明，CE与HPLC测定结果基本上一致，相对误差(Er)<4.7%。说明CE法分析数据可靠、准确，能够用于维C银翘片中维生素C和扑热息痛的定量分析。

表2 CE和HPLC法测定结果(n=6)Table 2 CE and HPLC analysis of Vitamin C and Paracetamol (n=6)

3 讨 论

考察了NaH2PO4- Na2HPO4、NaH2PO4-植酸钠、Na2HPO4-脱氧胆酸钠等多种缓冲体系中维生素C和扑热息痛的基线、峰形、迁移时间、分离度等的情况。在Na2HPO4-脱氧胆酸钠缓冲体系中，两组分分离完全、基线稳定、峰形最佳。又进一步考察了Na2HPO4(10～50 mmol·L-1)、脱氧胆酸钠(10～50 mmol·L-1)的浓度，缓冲体系的酸度(pH 8～10)，分离电压(+12～+28 kV)对峰形、迁移时间等的影响。综合考虑各种因素，最终选择pH=8.89的30 mmol·L-1Na2HPO4-30 mmol·L-1脱氧胆酸钠混合溶液为运行缓冲溶液、分离电压为+20 kV作为电泳条件。

缓冲溶液的选择取决于样品分离所需的pH，即使具有相同pH不同的缓冲溶液往往显示出不同的分离能力。分析物在不同pH缓冲溶液里的解离度不同，电泳速率也因之改变，因而呈现不同的分离度和灵敏度。

缓冲溶液的离子强度随浓度升高而增大，导致电渗流变小，其结果分析物的迁移时间将增加；另一方面，电流变强，热效应使分析物蜂形展宽，分离效率反而变低。

分离电压增加时，分析物的迁移速度升高，分析时间减少，然而焦耳热相应升高，致使基线稳定性减小，灵敏度下降；分离电压减小，分离效果变佳，但是分析时间增加，峰形展宽变差。

比较CE和HPLC两种方法的测定结果显示：CE法操作简便、快速、样品消耗极少，测定结果准确、可靠，能够用于维C银翘片中维生素C和扑热息痛的含量测定。

[1] 王金宏, 江培. 维C 银翘片中对乙酰氨基酚含量的测定[J]. 黑龙江医药, 2014, 27(4): 760-762. WANG J H, JIANG P. Determination of acetaminophen in Vitamin C Yinqiao Tablets using HPLC[J]. Heilongjiang Med, 2014, 27(4): 760-762.

[2] 董丽, 孙祥德, 李琴. 高效液相色谱双波长检测法测定维C 银翘片中4种组分的含量[J].色谱, 2010, 28(2): 204-208. DONG L, SUN X D, LI Q. Determination of four components in Vitamin C Yinqiao Tablets using reversed-phase high performance liquid chromatography with dual wave length detection [J]. Chin J Chem, 2010, 28(2): 204-208.

[3] 杨晓，杨钊，李新荣. LC-MS/MS法同时测定维C银翘片中6种成分[J]. 中成药, 2013, 35(10): 2153-2156. YANG X, YANG Z, LI X R. Determination of six constituents in Vitamin C Yinqiao Tablets by LC-MS/MS [J]. Chinese Traditional Patent Medicine, 2013, 35(10): 2153-2156.

[4] 刘佳. 复方感冒灵片中对乙酰氨基酚含量测定方法的改进[J]. 中国医药科学, 2013, 3(21): 59-60. LIU J. Improvement of content determination method of acetaminophen in compound Ganmaoling tablets [J]. China Medicine and Pharmacy, 2013, 3(21): 59-60.

[5] 毕小平, 谢茵, 张太强，等．光化学荧光法测定血浆中对乙酰氨基酚的浓度[J]. 山西医学院学报, 2007, 38(11): 1002-1004. BI X P, XIE Y, ZHANG T Q, et al. Determination of acetaminophen in plasma by photochemical fluorescence method[J].J Shanxi Med Univ, 2007, 38(11): 1002-1004.

[6] 开启余. 紫外分光光度法测定VC银翘片中维生素C含量[J]. 化工技术与开发, 2015, 44(4): 41-43. KAI Q Y. Determination of Vitamin C in VC fructus forsythiae flakes by ultraviolet spectrophotometric Method [J]. Technology & Development of Chemical Industry, 2015, 44(4): 41-43.

[7] 戴传勇, 隆玉杰, 银胜高, 等. 维C银翘片的红外光谱学研究[J]. 广西科学, 2014, 21(3): 275-278. DAI C Y, LONG Y J, YIN S G, et al. Study on infrared spectrum of VC Yinqiao Tablets[J]. Guangxi Sciences, 2014, 21(3): 275-278.

[8] 梁奇峰, 何江, 彭梦侠. 红外光谱内标法测定维C 药片中抗坏血酸的含量[J], 化学试剂，2013, 35(3), 239-242. LIANG Q F, HE J, PENG M X. Determination of ascorbic acid in Vc tablets by internal standard method of FT-IR[J]. Chem Reagents, 2013, 35(3):239-242.

[9] 温金莲, 周清, 龙宁, 等. 吸附伏安法测定药品中对乙酰氨基酚的含量[J]. 广东药学院学报, 2012, 28 (1): 51-53. WEN J L, ZHOU Q, LONG N, et al. Adsorptive voltammetric determination of paracetamol in drugs[J]. J Guangdong Pharm Univ, 2012, 28 (1): 51-53.

[10] COELHO A G, AGUIAR F P C, JESUS D P D. A rapid and simple method for determination of 5-hydroxytryptophan in dietary supplements by capillary electrophoresis[J]. J Braz Chem Soc, 2014, 25(4): 783-787.

[11] MAHAN A E, TEDESCO J, DIONNE K, et al. A method for high-throughput, sensitive analysis of IgG Fc and Fab glycosylation by capillary electrophoresis[J]. J Immunol Methods, 2015, 417: 34-44.

[12] PORTO S K, NOGUEIRA T, BLANES L, et al. Analysis of ecstasy tablets using capillary electrophoresis with capacitively coupled contactless conductivity detection[J]. J Forensic Sci, 2014, 59(6): 1622-1626.

[13] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(2015年版 二部)[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2015: 1570-1572.

Determination of Vitamin C and Paracetamol in Vitamin C Yinqiao Tablets using CE

ZHANGHui,XUEHongbao

(Department of Chemistry, Bengbu Medical College, Bengbu 233030，China)

A novel and sensitive method was established for the determination of Vitamin C and Paracetamol in Vitamin C Yinqiao Tablets using Capillary Electrophoresis (CE) equipped with a photo-diodearray detector. The running buffer solution was 30 mmol·L-1sodium hydrogen phosphate solution containing 30 mmol·L-1sodium deoxycholate (pH=8.89). The capillary column efficient length was 40 cm (i. d. 75 μm) with the separation voltage +20 kV. The result indicated that the peak area of Paracetamol and Vitamin C had a good linear relationship with their concentrations in a certain concentration range. The recoveries of both were more than 97.6% with RSDs less than 3.2%. CE method was simple and rapid in operation, sensitive and reliable in determination results with very little sample consumption, which can be used for the determination of Paracetamol and Vitamin C in Vitamin C Yinqiao Tablets.

capillary electrophoresis (CE); Vitamin C Yinqiao Tablet; Vitamin C; Paracetamo

2016-06-06 基金项目：安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2016A485)；安徽省高校自然科学研究一般项目(KJ2015B037by)；安徽省高校省级优秀青年人才基金重点项目(2013SQRL051ZD)；安徽省高等教育振兴计划重大教学改革研究项目(2015zdjy101)

张晖(1966年生)，男；研究方向：生物分析技术；E-mail：zhanghuicsu688@163.com

薛洪宝(1979年生)，男；研究方向：色谱分析技术；E-mail:hongbaoxueqhd@126.com

10.13471/j.cnki.acta.snus.2017.01.004

O657.8；R971+.1

A

0529-6579(2017)01-0024-04