紫菜属腊叶标本DNA提取方法的研究

摘 要 本文通過优化比较两种标本DNA的提取方法，最终选择改良后的试剂盒法对紫菜属腊叶标本进行DNA提取，并获得满足下一步实验需要的紫菜标本DNA。

关键词 紫菜属 腊叶标本 DNA 提取

中图分类号：G642.0 文献标识码：A

紫菜隶属于红藻门（Rhodophyta） ，原红藻纲（Bangiophyceae） ，红毛菜目（Bangiales），红毛菜科（Bangiaceae），广泛分布在世界各地海域。紫菜腊叶标本是珍贵的历史材料，承载着丰富的物种信息，具有重要的研究价值。近年来随着分子技术的发展，对植物蜡叶标本的研究也上升到分子水平，应用在基础的分类鉴定、物种遗传多样性以及物种的系统进化关系等各个层次的研究中。

从模式标本上进行 DNA 取样，不必担心物种鉴定带来的问题。当然必须杜绝因为DNA取样而造成的标本损坏。随着 DNA 的提取和基因测序技术的发展，可能只需微量 DNA 样品就可实现有效扩增和测序，这将进一步提高模式标本使用的安全性和有效性。

1植物标本DNA提取存在的问题

1.1 DNA的纯度问题和浓度问题

DNA的纯度被认为是腊叶标本提取DNA中的主要问题之一，直接影响到后续的分子操作。对于紫菜属，本研究认为DNA浓度问题是首要问题，在DNA浓度保障的情况下，DNA纯度对后续PCR反应也造成一定影响。

1.2水浴的温度和时间

腊叶标本染色体中与DNA结合的核蛋白不易分离，需要降低水浴温度并延长水浴时间，或加入蛋白酶，才能够让足够多的 DNA游离出来。紫菜属腊叶标本的水浴温度进一步降低为45℃，水浴至1h。

1.3标本的存放时间

一般认为存放时间越久，腊叶标本中DNA降解的越严重；但最近的研究表明其影响要比不同植物类群及不同制作方法造成的影响小得多。

2两种DNA提取方法的优化及比较

在对所提 DNA 进行检测的过程中，采用了 Qubit2.0 定量和普通凝胶电泳检测两种方式，Qubit2.0 定量可以看出 DNA 浓度低，在0.1-2.5ng/€%eL之间，普通的凝胶电泳检测不到 DNA 的存在，选择 PCR 检测。

提取的DNA样品都能用作PCR特异性扩增，样品长期-20摄氏度保存后也可以继续用作PCR特意扩增。

3结论

将两种提取方法进行统一比较可知，两种提取方法都可以得到一定量的标本DNA，也都可以满足后续 PCR的需求，但是试剂盒法还具有纯度比较高，污染少的优势，而且操作简单节省时间。

作者简介：刘春蓉，1991年7月31日，女，山东省潍坊市人，中国海洋大学海洋生命学院 年级硕士三年级，专业：遗传学，研究方向，藻类遗传学。

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