妇幼保健院内乳腺科CA—MRSA感染危险因素分析及耐药基因检测

赖卫明+赵长安+唐玲玲+穆小萍

【摘要】 目的：分析妇幼保健院内获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（CA-MRSA）感染危险因素及耐药基因检测情况。方法：将2014年1月-2016年7月妇幼保健院内CA-MRSA感染的乳腺癌患者560例作为研究对象，分析导致CA-MRSA感染的危险因素，使用聚合酶连反应方法（Polymerase-Chain Reaction，PCR）检测耐药基因。结果：多因素非条件Logistic回归分析显示，基础疾病严重、侵入性操作及长期使用抗菌药物是导致CA-MRSA感染的危险因素（P<0.05）。结论：基础疾病严重、侵入性操作及长期使用抗菌药物是导致CA-MRSA感染的危险因素，CA-MRSA呈多重耐药性。

【关键词】 妇幼保健院； CA-MRSA； 感染危险因素； 耐药基因； 分析

Analysis of Risk Factors of CA-MRSA Infection and Detection of Drug Resistance Genes in Department of Internal Medicine of Maternal and Child Health Care Hospital/LAI Wei-ming，ZHAO Chang-an，TANG Ling-ling，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（12）：128-130

【Abstract】 Objective：To analyze the risk factors of CA-MRSA infection and the detection of drug resistance genes in Maternal and Child Health Care Hospital.Method：560 CA-MRSA infection in breast cancer patients in Maternal and Child Health Care Hospital from January 2014 to July 2016 were selected as objects，the risk factors of CA-MRSA infection were analyzed，and the drug resistance genes were detected by polymerase chain reaction.Result：Multivariate non conditional Logistic regression analysis showed that severe underlying diseases，invasive procedures， and long-term use of antibiotics were risk factors for CA-MRSA infection（P<0.05）.Conclusion：The underlying disease is serious，invasive operation and long-term use of antibiotics is a risk factor for CA-MRSA infection，CA-MRSA showed multiple drug resistance.

【Key words】 Maternal and child health care； CA-MRSA； Infection risk factor； Drug resistance gene； Analysis

First-authors address：Guangdong Province Maternal and Child Health Care Hospital，Guangzhou 511400，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.12.036

本研究將2014年1月-2016年7月妇幼保健院内获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（CA-MRSA）感染的乳腺癌患者560例作为研究对象，现将本次研究的结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将2014年1月-2016年7月妇幼保健院内CA-MRSA感染的乳腺癌患者560例作为研究对象，所有患者均为乳腺癌，年龄最小22岁，最大67岁，平均（46.5±2.6）岁。入选患者在就诊前1周均无系统应用抗生素史，排除先天或后天免疫缺陷疾病的患者，详细记录患者的性别、年龄、住址、临床诊断。

1.2 方法

1.2.1 采集菌株 采集患者发生感染部位的分泌物，使用无菌棉签蘸取，如果患者感染部位有完整的水泡或脓疱，要用无菌注射器抽取疱内液体，将提取得分泌物放在血平皿中[1-2]，在35 ℃的条件下，孵育18～24 h，根据菌落的形态、色素和产生的溶血素识别金黄葡萄球菌，鉴定方法是用梅里埃的VITEK 2 COMPACT GP鉴定卡鉴定[3]。将鉴定后确定为金黄葡萄球菌的菌株经单一菌落转种在血平皿上进行纯培养，在35 ℃的条件下，孵育24 h，然后使用纸片法收集后，在-80 ℃的冰箱内保存备用[4-5]。

1.2.2 MRSA检测 使用GP67药敏卡的苯唑西林（OX）耐药和头孢西丁确证试验阳性。

1.2.3 PCR检测 使用细菌试剂盒提取细菌中的DNA，将0.5～2.0 mL培养液，在低温高速离心机中离心30 s，转速为10 000 r/min，将上清液丢弃，尽可能的吸净上清液，收集菌体[6]。然后加入200 μL缓冲液RB重悬洗涤细胞，同样使用离心机离心30 s，转速10 000 r/min，将上清液丢弃后，振荡细胞或吹打重悬于200 μL缓冲液RB中[7]，进行PCR检测[8-10]。

1.2.4 PCR反应条件 扩增mecA是在94 ℃的条件下预变性3 min，50 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，反复循环35次，最后在72 ℃的时候延伸5 min，在反应结束后，将得出的产物放在4 ℃的条件下保存[11-14]。扩增tetM4、aac（6）/aph（2”）、aph（3）-Ⅲ、ant（4，4”）的基因检测方法相同，都是在93 ℃的条件下预变性2 min，93 ℃变形30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，共35次循环。扩增erm基因反应条件是在93 ℃的条件下预变性2 min，在93 ℃ 1 min，37 ℃ 90 s，72 ℃ 2 min，循环35次[15]。

1.3 观察指标 观察统计患者CA-MRSA感染的危险因素、9种抗菌药物的耐药性。

1.4 统计学处理 本次研究收集的所有数据均采用SPSS 17.0统计学软件进行统计分析，计量资料以平均值±标准差（x±s），采用t检验；单因素和多因素统计分析分别采用 x2检验和Logistic回归模型，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CA-MRSA感染危险因素分析 根据患者感染危险因素，对年龄、婚姻状况、基础性疾病、侵入性操作、抗菌药物使用时间进行单因素Logistic回归分析，结果显示，基础性疾病、侵入性操作、抗菌药物使用时间与感染的发生具有相关性（P<0.05），见表1。根据单因素分析结果，行多因素非条件Logistic回归分析，结果显示，基础疾病严重、侵入性操作和长期使用抗菌药物是导致CA-MRSA感染的危险因素（P<0.05），见表2。

2.2 耐藥基因检测分析 通过PCR检测方法，检测出CA-MRSA菌株304株，对304株菌株进行耐药基因的检查，结果显示，四环类（tetM）耐药菌211株，氨基糖苷类aac（6）/aph（2”）耐药菌54株，红霉素（erm）相关耐药菌24株，氨基糖苷类aph（3）-Ⅲ耐药菌15株，而未检测出ant（4，4”）。

3 讨论

为分析妇幼保健院内CA-MRSA感染危险因素及耐药基因检测情况，本研究将2014年1月-2016年

7月妇幼保健院内CA-MRSA感染的乳腺癌患者560例作为研究对象，分析导致CA-MRSA感染的危险因素，使用聚合酶连反应方法（Polymerase-Chain Reaction，PCR）检测耐药基因，结果显示，根据患者感染危险因素，患者的年龄、婚姻状况、基础性疾病、侵入性操作、抗菌药物使用时间进行单因素Logistic回归分析显示，基础性疾病、侵入性操作、抗菌药物使用时间与感染的发生具有相关性。而根据单因素分析结果，行多因素非条件Logistic回归分析显示，基础疾病严重、侵入性操作和长期使用抗菌药物是导致CA-MRSA感染的危险因素（P<0.05）。分析原因，基础性疾病如呼吸系统疾病、血液疾病、复合外伤等，会使患者存在被感染的风险，而侵袭性操作多为机械通气、静脉置管等方式，再加上患者使用抗菌药物的时间较长，患病后机体免疫功能下降，从而增加了感染机率。而在导致感染发生的形式上，最初的感染是在受损皮肤和软组织上[17]，但在感染后未及时治疗会导致重症肺炎或肺脓肿，严重时会导致患者休克，因此，要对患者的感染情况给予鉴别。

在耐药基因检测上，本研究采用PCR检测方法，检测出CA-MRSA菌株304株，对304株菌株进行耐药基因的检查，结果显示，四环类（tetM）耐药菌211株，氨基糖苷类aac（6）/aph（2”）耐药菌54株，红霉素（erm）相关耐药菌24株，氨基糖苷类aph（3）-Ⅲ耐药菌15株，而未检测出ant（4，4”）。分析原因，耐甲氧西林金黄葡萄球菌能够改变抗生素作用位点，对氨基糖苷类等抗生素产生耐药性[18]。由于mecA基因复合体的结构明确，主要是mecA和mecR1、mecI组成，对耐甲氧西林金黄葡萄球菌耐药性的表达起到控制的作用[15-18]，mecA基因复合体是MRSA的分子标志，只存在葡萄球菌中，相关研究发现，其作为耐甲氧西林金黄葡萄球菌的分子基础，是甲氧西林金黄色葡萄球菌敏感株不具有的，因此是检验耐药甲氧西林金黄葡萄球菌的金标准。

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