正骨白药膏的质量标准研究Δ

陈 丹，李 柯，卢茂芳，李若存

(1.湘潭职业技术学院药学教研室，湖南 湘潭 411102； 2.湖南省中医药研究院中药化学室，湖南 长沙 410013； 3.湖南中医药大学药物化学室，湖南 长沙 410208)

正骨白药膏的质量标准研究Δ

陈 丹1*，李 柯2#，卢茂芳3，李若存2

(1.湘潭职业技术学院药学教研室，湖南 湘潭 411102； 2.湖南省中医药研究院中药化学室，湖南 长沙 410013； 3.湖南中医药大学药物化学室，湖南 长沙 410208)

目的：建立正骨白药膏的质量标准。方法：采用显微鉴别法和化学反应法鉴别制剂中的煅石膏；采用络合滴定法测定煅石膏中硫酸钙含量。结果：显微鉴别和化学鉴别能检测出制剂中的煅石膏；硫酸钙的平均回收率为98.47%，RSD=1.71%(n=6)。结论：本研究方法专属性强、重复性好，能够控制正骨白药膏的质量。

正骨白药膏； 煅石膏； 硫酸钙； 络合滴定法； 含量测定

正骨白药膏是广东省江门市蓬江区白石正骨医院自制新制剂，功能为凉血止血、消肿止痛，用于治疗筋骨损伤红、肿、热、痛者。为了有效的控制其质量，对方中的主要药味煅石膏采用显微鉴别法与化学鉴别法进行了鉴别，采用乙二胺四醋酸(EDTA)络合滴定法对煅石膏中的硫酸钙(CaSO4)进行了含量测定，以控制其质量[1]。

1 材料

1.1 仪器

Olympus-cx31显微镜(日本OLYMPUS公司) 在放大100倍条件下观察CaSO4结晶。

1.2 药品与试剂

正骨白药膏(广东省江门市蓬江区白石正骨医院，批准文号：粵YZJ-2014-0004，批号：20160312、20160318、20160326、20160403)。无水CaSO4购自长沙市汇虹化玻仪器设备有限公司，含量99.5%；其余试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 定性鉴别

2.1.1 显微鉴别：取样品(批号：20160312)3 g，加乙酸乙酯15 ml，超声处理10 min(频率：40 kHz，功率：250 W)，滤过，滤渣挥干溶剂，备用。取滤渣置于显微镜下观察，呈不规则片状结晶无色，有平直纹理，见图1。

图1 正骨白药膏显微鉴别Fig 1 Microscopic identification of zhenggubaiyao ointment

2.1.2 钙盐与硫酸盐的化学鉴别：取上述滤渣0.3 g，加稀盐酸15 ml溶解，滤过。取续滤液1 ml，加水稀释至20 ml，加甲基红指示液2滴，用氨试液中和，再滴加盐酸至恰呈酸性，加草酸铵试液，生成白色沉淀，沉淀不溶于醋酸，但可溶于稀盐酸；再取续滤液，滴加氯化钡试液，生成白色沉淀，沉淀不溶于盐酸及硝酸。

2.2 重金属检查

根据《中华人民共和国药典：四部》(2015年版)“通则0821第二法”，取样品2 g，置于已炽灼至恒质量的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温(25 ℃)，加硫酸1 ml使其湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，加硝酸0.5 ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500～600 ℃下炽灼，使完全灰化，放冷，加盐酸2 ml，置于水浴上蒸干后加水15 ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显微粉红色，再加醋酸盐缓冲液(pH=3.5)2 ml，微热溶解后，移至纳氏比色管中，加水稀释成25 ml，作为甲管；另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH=3.5)2 ml与水15 ml，微热溶解后，移至纳氏比色管中，加标准铅溶液2 ml，再用水稀释成25 ml，作为乙管；在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2 ml，摇匀，放置2 min，同置于白纸上，自上向下透视。重金属含量不得超过百万分之十(10 PPM)，结果见表1。

表1 样品重金属检查结果

2.3 含量测定

2.3.1 滴定试验：取样品约0.25 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加稀盐酸12 ml，加热使溶解，加入乙酸乙酯与乙醇(V∶V=1 ∶1)的混合液10 ml，摇匀，加水100 ml，加入甲基红指示液1滴，滴加氢氧化钾试液至溶液显浅黄色，再继续滴加10 ml，加入钙黄绿素指示剂少量，用乙二胺四醋酸二钠滴定液(浓度为0.05 mol/L)滴定，至溶液的黄绿色荧光消失，并显橙色[2-4]。每1 ml乙二胺四醋酸二钠滴定液相当于6.807 mg的CaSO4。

2.3.2 计算公式：CaSO4(%)=6.807×10-3/(W×V×F)×100%。式中，W为称取样品质量(g)；V为滴定所消耗的乙二胺四醋酸二钠滴定液的体积(ml)；F为乙二胺四醋酸二钠滴定液的校正因子。

2.3.3 空白试验：按照“2.3.1”项下方法进行试验，但不加入样品，测得消耗乙二胺四醋酸二钠滴定液的体积为0 ml，结果表明，所用溶剂对CaSO4的含量测定无影响。

2.3.4 阴性对照试验：按处方比例及制法，以淀粉代替煅石膏制成不含煅石膏的阴性样品，按照“2.3.1”项下方法进行试验，结果显示，消耗乙二胺四醋酸二钠滴定液的体积为0 ml，说明样品中其他组分对测定正骨白药膏中CaSO4的含量没有干扰，该方法专属性良好。

2.3.5 重复性试验：取样品(批号：20160312)6份，每份约0.25 g，精密称定，分别按照“2.3.1”项下方法测定CaSO4的含量。结果显示，CaSO4含量的RSD=0.85%(n=6)，表明该方法重复性好，见表2。

表2 重复性试验结果(n=6)

2.3.6 加样回收率试验：取已知含量样品(批号：20160312，含量63.94%)6份，每份约0.25 g，精密称定，分别加入精密称定的无水CaSO4(含量为99.5%)约0.18 g，按照“2.3.1”项下方法进行试验。结果显示，正骨白药膏中CaSO4的平均回收率为98.47%，RSD=1.71%，见表3。

表3 CaSO4的加样回收率试验(n=6)

2.3.7 含量测定：取不同批号的样品，按照“2.3.1”项下方法进行含量测定，结果见表4。

表4 样品含量测定结果

3 讨论

正骨白药膏是外用制剂，临床用于治疗筋骨损伤所致的红、肿、热、痛，疗效确切。方中的煅石膏为中医临床常用中药，具有较好的活血化瘀、抗炎消肿等功效，能够显著改善急性软组织损伤的肿胀、瘀斑现象，促进软组织的修复与再生，其作用机制可能与抑制白细胞介素1、白细胞介素6等炎性因子及抑制前列腺素E2的生成有关[5-6]。临床应用证明煅石膏制剂有清热解毒，消肿止痛，降低细胞沉率，改善血清中IL-1β、TNF-α水平等作用[7-9]。煅石膏为方中主药，因此，本研究对其进行了定性、定量研究。

煅石膏的鉴别方法包括红外鉴别、化学鉴别等[10-11]。本研究采用显微鉴别法和化学鉴别法。为去除制剂中的基质，采用加乙酸乙酯超声的方法，取其滤渣进行鉴别，结果表明，基质对鉴别无干扰。在煅石膏的显微特征鉴别中发现有少量棒状结晶，可能是粉碎的粒度过细所致。煅石膏的主要成分为CaSO4，常通过测定其中钙离子的含量进行定量鉴别，常用的方法有EDTA滴定法、原子吸收分光光度法、电感离子体-质谱法等。《中华人民共和国药典：一部》(2015年版)“煅石膏”项下规定“含CaSO4不得少于92.0%”，按处方量计算，煅石膏在样品中的用量为66%，考虑煅石膏在制剂工艺中的损耗，故确定样品中CaSO4百分含量≥48%。参照相关文献[12-13]，本研究分别采用三氯甲烷与乙醇混合液、乙酸乙酯与乙醇混合液来溶解样品，结果显示，上述两种混合液均可使样品溶解，但考虑到三氯甲烷的毒性较大，故最终选择乙酸乙酯与乙醇混合液。而空白实验结果表明，乙酸乙酯与乙醇对测定结果无影响。

进行滴定实验时，由于络合滴定反应速度较慢，为使金属离子络合完全，滴定速度不宜太快。而为了实验过程中减小误差，实验中所用的水均为新沸放置至室温(25 ℃)的水，且所配制的乙二胺四醋酸二钠滴定液放置于玻璃瓶中，避免与橡皮塞、橡皮管接触。

由于样品为外敷药，用量较大，故按照《中华人民共和国药典：四部》(2015年版)[14]中的方法进行了重金属检查并规定其限量。

本研究建立的定性鉴别方法与含量测定方法，操作简便，结果准确可靠，可用于正骨白药膏的质量控制。

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Study on Quality Standard of Zhenggubaiyao OintmentΔ

CHEN Dan1, LI Ke2,LU Maofang3,LI Ruocun2

(1.Pharmacy Teaching and Research Section, Xiangtan Vocational and Technical College, Hunan Xiangtan 411102,China; 2.Traditional Chinese Medicine Chemical Room, Hunan Academy of Traditional Chinese Medicine, Hunan Changsha 410013, China; 3.Pharm-aceutical Chemistry Room, Hunan University of Chinese Medicine, Hunan Changsha 410208,China)

OBJECTIVE：To establish the quality standard of Zhenggubaiyao ointment. METHODS: Gypsum ustum of Zhenggubaiyao ointment were identified by microscopic identification and chemical reaction. The content of CaSO4was determined by complex ometric titration. RESULTS: The microscopic identification and chemical reation could check out gypsum ustum of Zhenggubaiyao ointment. The average recovery rate of CaSO4was 98.47%,RSD=1.71%(n=6). CONCLUSIONS: The method has high accuracy and good repeatability, and can be used for the quality control of Zhenggubaiyao ointment.

Zhenggubaiyao ointment; Gypsum ustum; Calcium sulfate; Complexometric titration; Determination of content

湖南省自然科学基金资助项目(No.2016JJ6085)；湖南省中医药研究院资助项目(No.201417)

R927.2

A

1672-2124(2017)04-0457-03

2016-11-15)

*讲师。研究方向：中药制剂。E-mail：yxw0915@163.com

#通信作者：工程师。研究方向：中药制剂与质量标准控制研究。E-mail：17848689@qq.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.04.009