原油降解菌JL21的筛选与降解性能分析

2017-05-10宫勋

石油知识 2017年2期

关键词：琼脂活性剂蓝色

宫勋

(中国石油吉林油田勘探设计院吉林松原 138000)

原油降解菌JL21的筛选与降解性能分析

宫勋

(中国石油吉林油田勘探设计院吉林松原 138000)

菌株JL21与Gordonia amicalis（序列号：KM113029）菌亲缘关系最近，同源性达99%，与构建系统发育树的结果一致。因此，菌株JL21在分类学地位上初步确定为友善戈登氏菌Gordonia amicalis JL21。随着2015年新环保法的公布，石油污染的有效处理已经成为国内外研究的重中之重。微生物处理技术作为既经济高效又环保的方法，受到国内外研究人员的青睐。本文着重探讨了石油降解菌的筛选与降解性能的测定。

原油；降解菌；表面活性剂

1 实验材料和方法

1.1 采样地点及原油来源

分离、筛选、降解实验所用的原油及土壤样品均来自中国石油天然气股份有限公司吉林油田分公司。

1.2 培养基

无机盐培养基（MSM）：Na2HPO4·2H2O 8.5 g、KH2PO4 3.0 g、NaCl 0.5 g、NH4Cl 1.0 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、CaCl2 14.7 mg、CuSO4 0.4 mg、KI 1.0 mg、MnSO4·H2O 4.0 mg、ZnSO4·7H2O 4.0 mg、H3BO3 5.0 mg、Na 2MoO4·2H2O 1.6 mg、FeCl3·6H2O 2.0 mg，蒸馏水1 L。pH7.0-7.2、121 ℃灭菌20 min。

原油降解培养基：在MSM培养基中添加0.5%的灭菌原油。

油平板：将原油溶于石油醚（原油终浓度为10%）中，滤纸剪成直径85 mm，置90 mm培养皿中，加2 mL 10%原油溶液，待石油醚挥发后，121℃高压蒸汽灭菌20 min，取出烘干备用。无机盐培养基灭菌后倾倒平板，将滤纸紧贴在MSM平板上后即成油平板。

富集培养基：蛋白胨 10 g、牛肉膏 5 g、NaCl 5 g、蒸馏水 1 L，pH 7. 0.

血液琼脂培养基：脱纤维绵羊血 50 ml、血液营养琼脂45 g、去离子水 1L。

蓝色凝胶培养基：十六烷基三甲基溴化铵 5 g、血液营养琼脂 45 g、次甲基蓝 0.02 g、去离子水 1L。

1.3 方法

1.3.1 原油降解菌的富集与分离

在含50 mL原油降解培养基的摇瓶中，加入5 mL土壤悬液，在30 ℃下，摇床发酵7 d，取5 mL富集液接到相同的富集培养基中，再发酵7 d，如此连续富集培养3次。

取发酵液梯度稀释106，107，108倍，涂布油平板上，取生长良好的菌株，进行纯化培养后接入摇瓶培养基中进行摇瓶培养验证。最后将纯化后的原油降解菌接种于血液琼脂固体培养基和蓝色凝胶固体培养基表面，对原油降解菌产表面活性剂的性能进行定性分析。

取产生物表面活性剂的高效原油降解菌进行以下的试验。

1.3.2 原油降解菌降解性能的测定

将已分离纯化的原油降解菌株接种于富集培养基中，在30 ℃条件下以180 r·min-1摇床振荡培养，待菌株进入对数后进行降解实验。分别取2.5 mL（OD600=0.5）对数生长期菌液，加入到装有50 mL含油无机盐培养基的250 mL三角瓶中（原油初始浓度为2000 mg·L-1），于30 ℃，180 r·min-1摇床中培养15 d，采用GC-FID气相色谱法测定原油的残余浓度，每组设置3个平行。

1.3.3原油降解菌产表面活性剂特性分析

将已分离纯化的原油降解菌株，以划线方法接种于血液琼脂培养基和蓝色凝胶培养基表面，定性筛选生物表面活性剂产生菌。