中药复方制剂“优净”的急性毒性研究

林明明 刘文利 王尚明 谷 颖 （山东迅达康兽药有限公司 山东 济南 250300）

试验研究

中药复方制剂“优净”的急性毒性研究

林明明 刘文利 王尚明 谷 颖 （山东迅达康兽药有限公司 山东 济南 250300）

为了验证家禽抗病毒中药复方制剂“优净”的安全性，参照《兽药注册资料汇编》中兽药急性毒性试验指导原则的要求，进行小鼠急性毒性试验。结果表明，中药复方制剂“优净”单次灌服给药的LD50＞30000mg/kg，按照毒理学评价标准，LD50＞10000mg/kg即属于无毒性物质，从而表明中药复方制剂“优净”安全无毒。小鼠最大耐受量(MTD)测定结果为39600mg/kg，相当于家禽临床用量的100倍。结论，中药复方制剂“优净”安全无毒。

中药复方制剂 鸡传染性支气管炎 小鼠急性毒性 LD50 MTD。

鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)引起的一种急性高度接触性呼吸道传染病，主要侵害鸡的呼吸、泌尿生殖和消化系统[1～3]。IB是阻碍养鸡业发展的主要病毒性疾病，由于IBV毒株具高度变异和多血清型的特点，给IB的免疫和防治带来了很大困难，免疫失败现象时有发生[4]。目前，临床上用于IB治疗的药物很多，药效也各不相同，有些药物使用后会在动物体中残留[5]。西药虽然见效快但毒副作用大，易产生耐药性。现代药理学研究表明，许多中草药及其多种成分都有很好的抗病毒作用，且具有作用独特，抗病毒谱广、毒副作用小、疗效显著等优点，正日益成为抗病毒新药研究的热点。文献报道，复方中药制剂能增强动物机体的免疫功能，提高机体的抗病力和抵抗力，对防治禽类传染病具有较高疗效[6,7]。中药在对动物机体生理机能进行综合调理、提高机体免疫力、抗病力和抗病毒等方面，具有独到之处，可有效防控和治疗该病[8]。因此，根据中医辨证理论，并以宜降肺气、化痰止咳和提高机体免疫力为治疗原则，选用板蓝根、大青叶、黄连、淫羊藿等清热解毒药物组方，组成新型复方纯中药口服液“优净”，通过对小鼠急性毒性试验，评价其在家禽上的安全性，为该药在防治鸡传染性支气管炎病的临床应用中提供可靠的依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 昆明系清洁级小鼠90只，雌雄各半，体重18～22g，由山东省实验动物中心购入。在通风良好的情况下，饲养在室温20～25℃的鼠笼中，自由饮水及采食，观察5d。

1.1.2 试验药品 板蓝根、大青叶、黄连、淫羊藿购自安国市立建中药材经营有限公司；复方中药制剂“优净”由山东迅达康兽药有限公司研发中心实验室研制。

1.1.3 试验器材 HX302T电子天平(慈溪市天东衡器厂)；12号灌胃针，1ml注射器；小鼠笼；小烧杯，外科器械等。

1.1.4 药液的制备 将板蓝根、大青叶、黄连、淫羊藿4味中药按照筛选的最佳工艺进行提取，比例为1∶2∶1∶1，加水煎煮2次，2h/次，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(70～80℃测)的清膏，冷至40℃时缓缓加入乙醇，充分搅拌，使含醇量为60%，静置12h使沉淀，滤取上清液，遗留沉淀再加60%乙醇适量，充分搅拌，静置12h，滤取上清液，合并2次上清液，回收乙醇至无醇味，浓缩至1ml含1.5g生药，收集浓缩液，滤过，灌装，灭菌，即得，性状为棕褐色液体。

1.2 方法

1.2.1 小鼠口服(灌胃)急性毒性预试验[9]将40只小鼠随机分成5组，每组8只，雌雄各半，给药前禁食12h，各组分别将配好的药液按照1875、3750、7500、15000、30000mg/kg(按原生药材计)灌胃给药，给药剂量以每只不超过0.4ml为标准，以确定试验小鼠的0和100%死亡的剂量的范围。给药后4h内禁食，但不禁水。给药后先观察30min，在给药后的4h再观察1次，以后每天上午、下午各观察1次，连续观察7d。对小鼠全身精神状态观察的主要内容有被毛组织光滑度、眼角膜是否有血丝、红肿现象、小鼠活动是否有异常行为，以及小鼠的神经系统、呼吸系统、消化系统、泌尿生殖系统等[4]，并记录各组小鼠死亡数和存活数。当给药剂量按体质量计大于5000mg /kg时小鼠没有出现死亡，表明LD50大于5000mg/kg，进一步对复方中药制剂“优净”进行最大耐受量的测定。

1.2.2 最大耐受量(MTD)的测定[10]将50只小鼠平均分成5组，每组10只，雌雄各半，试验前禁食12h，一组为空白对照，其他组按照等比间距设置4个剂量组，每组给小鼠灌胃药剂量分别为36000、39600、43560、47916mg/ kg，单次给药体积以每只不超过0.4ml为标准，若超过标准，8h内给药2次(间隔8h)，给药后记录小鼠的精神、饮食、饮水情况，连续观察14d，对死亡的小鼠和观察期满的小鼠进行解剖，观察各组织器官的变化，无小鼠死亡的剂量组为中药组方的最大耐受量。动物在给药前与给药后l周及2周称量小鼠体质量[11]。

2 结果

2.1 小鼠口服(灌胃)急性毒性预试验结果

用灌胃针口服灌入不同剂量复方中药制剂“优净”后，4h内小鼠蜷缩静伏，活动减少。24h后观察，40只小鼠活动、饮水、采食均正常。连续观察7d，无小鼠死亡(见表1)。小鼠全身精神状态、神经系统、运动系统、呼吸系统、胃肠系统等观察未见明显异常(见表2)。根据试验结果及毒性等级评价标准[12,13]，当LD50＞10000mg/kg.bw时，为无毒性物质。本次预实验将口服剂量增加到30000mg/kg，40只小鼠均健活，说明中药复方制剂“优净”无毒。

表1 小鼠口服急性毒性预试验结果 (mg/kg、%)

表2 各组小鼠给药后观察项目及结果

2.2 最大耐受量(MTD)测定结果

（1）小鼠对中药“优净”最大耐受量的测定，各组给药后，与空白对照相比，小鼠在8h内出现不同程度的精神沉郁，蜷伏、活动减少，采食饮水相对于对照组明显减少，尿液呈浅黄色，粪便形状良好。当给药剂量达到43560mg/kg时，24h内小鼠出现个别死亡；47916mg/kg剂量组小鼠给药后24h内被毛松弛，眼微闭嗜睡，呼吸频率加快，呈腹式呼吸，出现个别死亡。各给药组小鼠24h后精神、活动、饮水、采食恢复正常。各剂量组小鼠死亡统计结果见表3。由此可知，小鼠对复方中药制剂“优净”的最大耐受量为39600mg/kg。（2）观察期14d结束后，对死亡的小鼠和观察期满的小鼠进行解剖。观察期满存活的各剂量组小鼠与对照组相比，心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏等器官均无明显病变。针对43560mg/kg、47916mg/kg剂量组死亡小鼠解剖发现，小鼠肝脏、脾脏肿大，被膜紧张、边缘钝圆，尤其以肝脏肿大最为明显，颜色呈暗紫色，质地变软易碎；肠系膜略有充血现象，其他脏器未见明显异常。（3）动物在给药前与给药后第l周及第2周称量小鼠体质量，见表4。由表可知，各给药组小鼠体质量增加与对照组无明显差异(P＞0.05)。说明中药复方制剂“优净”对小鼠体重无明显影响。

表3 小鼠对“优净”MTD试验结果 (mg/kg、%)

表4 小鼠MTD试验前后体重变化表

3 讨论

（1）鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒引起的，该病毒具有变异速度快、血清型复杂、疾病临床差异比较大的特点，同时易引起其他疾病的继发感染。目前市场上药物对鸡传染性支气管炎病的防治并不理想，抗生素控制该病继发感染易产生耐药性，且存在药物残留问题。文献报道，中药含有大量的天然活性成分，能提高机体非特异性免疫功能，增强抗病力和抗应激能力，促进动物生长，与西药相比，具有独特的优势，经过科学配制，对禽病防治起到很大作用[14]。“优净”选用板蓝根、大青叶、黄连、淫羊藿四味中药组成复方中药制剂，通过现代提取工艺制备成口服液，对禽传染性支气管炎病的防治效果明显。（2）通过小鼠口服(灌胃)进行急性毒性试验研究，按照毒理学评价标准[12,13]，当口服给药剂量按体质量计大于10000mg/kg体重时，观察7d，小鼠没有出现死亡，即表明该药安全无毒，而本试验口服剂量增加到30000mg /kg，全部小鼠仍健活，说明复方中药制剂“优净”对小鼠安全、无毒。同时也说明“优净”对小鼠的LD50大于30000mg/kg，进一步进行小鼠最大耐受量试验。（3）小鼠最大耐受量试验结果表明，小鼠对“优净”的最大耐受量为39600mg/kg，相当于家禽临床用量的100倍，并且在各给药剂量下，“优净”对小鼠体重的增长无明显影响。（4）通过小鼠急性毒性试验和最大耐受量试验研究，表明复方中药制剂“优净”安全无毒，客观评价了复方中药制剂“优净”的安全性，为“优净”的研发及在临床上的安全应用提供了参考依据。

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1007-1733(2017)04-0001-03

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