血痛定巴布剂抗炎镇痛作用的药效学研究

侯 君，窦建卫，李 静，刘爱琴，由凤鸣，郑德志，李聃丹，周龙甫，呼永河

血痛定巴布剂抗炎镇痛作用的药效学研究

侯 君1，窦建卫2，李 静1，刘爱琴3，由凤鸣4，郑德志5，李聃丹6，周龙甫1，呼永河1

目的 评价血痛定巴布剂的抗炎镇痛作用。 方法 采用炎症、疼痛动物模型，观察血痛定巴布剂的药效作用。 结果 血痛定巴布剂可显著降低小鼠腹腔毛细血管通透性，可显著降低二甲苯所致耳廓肿胀和小鼠肉芽肿，可显著抑制角叉菜胶所致足趾肿胀；可显著减少醋酸致小鼠扭体次数，对小鼠热刺激所致痛阈值的变化不明显。 结论 血痛定巴布剂具有明显的抗炎作用，无镇痛作用。

血痛定巴布剂；抗炎；镇痛

血痛定巴布剂是课题组针对基层部队外训常见软组织损伤而新研制的一种中药复方制剂，由三七、独一味、大黄、紫草、冰片等中药组成，具有消肿止痛、活血祛瘀和止血之功效，主要用于治疗急性软组织损伤所致的局部肿胀、疼痛，局部瘀斑或伤口出血、渗血等。为验证其有效性，课题组采用小鼠炎症模型和小鼠痛觉模型评价其抗炎、镇痛作用，为临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 血痛定巴布剂（自制，批号：20120701，7 cm×10 cm／贴（10.5 g生药／mL））；空白基质（自制）；阿斯匹林（大同长兴制药有限责任公司生产，国药准字HI4020657，批号：0704004）；醋酸泼尼松片（浙江仙琚制药股份有限公司生产，批号：080901，5 mg／片）；盐酸吗啡注射液（沈阳第一制药厂制造，批号：000303，10支／盒，10 mg／mL／支）；硫化钠（成都市化学试剂厂生产，批号：980923，500 g／瓶）；二甲苯（成都市科龙化工试剂厂，批号：20051103，500 mL／瓶）；依文斯蓝（Sigma试剂，批号：2062425）；CARRAGEENAN（角叉菜）（SIGMA，批号：46H0910，25 g／瓶）；无水乙醚（成都长联化工试剂有限公司，批号：20120409，500 mL／瓶）。

1.2 仪器 MS204S型New classic电子天平（梅特勒—托利多仪器（上海）有限公司）；EB⁃3200D电子天平（日本SHIMADZU）；全波长扫描式多功能读数仪（ThermoFisher scientific）；PV⁃200足跖容积测量仪（成都泰盟科技有限公司）；LDZ4⁃0.8离心机（北京医用离心机厂）；DB210SD电热鼓风恒湿干燥箱（成都天宇试验设备有限公司）。

1.3 实验动物 SPF昆明小鼠，一级，18～22 g，雄性200只，雌性120只；SD大鼠，一级，180～220 g，雄性，60只。许可证号：SCXK（川）2013⁃19号。供应单位：四川省中医药科学院实验动物中心。实验室温度：18～22℃，相对湿度：60%～70%，光照条件：12 h／12 h明暗交替，通风情况：自动定时过滤通风换气，换气频度10～15次／h。

1.4 给药方法及剂量 参照文献［1⁃2］的方法进行。实验开始前24 h做皮肤准备，将各组实验动物背部用8%硫化钠溶液脱毛，小鼠脱毛面积约2 cm×2 cm，大鼠约3 cm×3 cm，操作时动作轻柔，避免皮肤受损，脱毛后以温水洗净去毛区皮肤，24 h后检查去毛区皮肤是否有损伤。涂敷药物前以温水洗净去毛区皮肤。血痛定巴布剂最大载药量为10.5 g生药，按1贴／人即临床剂量约为0.175 g生药／kg。安全性评价结果表明SD大鼠经皮给予血痛定巴布剂的最大耐受剂量（MTD）大于6.3 g生药／只。结合小鼠、大鼠皮肤给药操作实际，剂量设计见表1、表2。

表1 血痛定巴布剂小鼠经皮给药剂量设计表（以20 g体重计）

表2 血痛定巴布剂大鼠经皮给药剂量设计表（以大鼠200 g体重计）

1.5 方法 参照文献［3⁃8］的方法进行。

1.5.1 对小鼠腹腔毛细血管通透性影响的实验 取雄性小鼠60只，按体重随机分为5组，每组12只。血痛定巴布剂高、中、低剂量组分别按141 mg、70.6 mg和35.3 mg生药／只的剂量背部贴敷血痛定巴布剂，每日1次，连续5 d。模型组背部贴敷空白基质巴布剂，每日1次，连续5 d。阿斯匹林组每天灌胃给药1次，连续5 d，0.1 mL／10g，浓度为20 mg／mL。

末次给药前小鼠禁食不禁水20 h，准确称量小鼠空腹体重。阿斯匹林末次给药后1 h，受试药及模型组给药后2 h，尾静脉注射2%依文斯蓝生理盐水溶液0.1mL／10g，腹腔注射0.75%醋酸0.2 mL／只，20 min后，断头处死小鼠，腹腔注射生理盐水5 mL／只，打开腹腔，用巴氏吸管取腹腔洗涤液，1000 rpm离心5 min。取上清，590 nm波长，生理盐水调零，全波长扫描式多功能读数仪测定吸光度。计算各药物组对伊文思兰渗出量的抑制率。

抑制率＝（模型组平均OD值－给药组平均OD值）／模型组平均OD值×100%

1.5.2 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀影响的实验 取雄性小鼠60只，按体重随机分为5组，每组12只。血痛定巴布剂高、中、低剂量组分别按 141 mg、70.6 mg和35.3 mg生药／只的剂量背部贴敷血痛定巴布剂，每日1次，连续5 d。模型组背部贴敷空白基质巴布剂，每日1次，连续5 d。醋酸泼尼松组于实验第5日灌胃给药1次，0.1 mL／10g，浓度为5 mg／mL。

受试药组及模型组末次给药后2 h，醋酸泼尼松组末次给药后1 h。各组小鼠右耳廓两面均匀涂抹二甲苯，每只20 μL，15 min后脱颈椎处死小鼠，沿耳廓边缘剪下左、右两耳，两耳外沿重叠，沿根部修剪，电子天平称重。计算耳肿胀度（右耳片重－左耳片重）和肿胀抑制率。

肿胀抑制率＝（模型组平均肿胀度－给药组平均肿胀度）／模型组平均肿胀度×100%

1.5.3 对角叉菜胶致大鼠足肿胀影响的实验 取雄性大鼠60只，按体重随机分为5组，每组12只。血痛定巴布剂高、中、低剂量组分别按 1.12 g、0.56 g和0.28 g生药／只的剂量背部贴敷血痛定巴布剂，每日1次，连续5 d。模型组背部贴敷空白基质巴布剂，每日1次，连续5 d。醋酸泼尼松组于实验第1日、3日、5日分别灌胃给药1次，1 mL／100g，浓度为5 mg／mL。

末次给药30 min后，大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜溶液0.1 mL／只，足跖容积测量仪测定1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h致炎大鼠肿胀右后足跖容积。按下式计算鼠足跖肿胀率、肿胀抑制率。

足跖肿胀率＝（致炎后足跖容积－致炎前足跖容积）／致炎前足跖容积×100%

肿胀抑制率＝（对照组平均肿胀率－给药组平均肿胀率）／对照组平均肿胀率×100%

1.5.4 对小鼠棉球肉芽肿影响的实验 取雄性小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只。乙醚浅麻醉，在无菌条件下将10 mg干燥高压灭菌棉球植入双侧腋窝皮下，随即缝合皮肤。从手术当日开始，血痛定巴布剂高、中、低剂量组分别按141 mg、70.6 mg和35.3 mg生药／只的剂量背部贴敷血痛定巴布剂，每日1次，连续5 d。模型组背部贴敷空白基质巴布剂，每日1次，连续5 d。氢化可的松组于术后第1、3、5天肌肉注射给药1次，0.1mL／10g，浓度为2 mg／mL。

末次给药后2 h，颈椎脱臼处死小鼠，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，置70℃烤箱12 h后称重，减去原棉球重量即为肉芽肿净重，计算肉芽肿系数及各组抑制率。氢化可的松组肌注给药后45 min后同法操作。

肉芽肿系数＝棉球肉芽肿净重（mg）／体重（10 g）

肉芽肿抑制率＝（对照组肉芽肿平均干重－给药组肉芽肿平均干重）／对照组肉芽肿平均干重×100%

1.5.5 对醋酸致小鼠扭体影响的实验 取小鼠60只，雌雄各半，按体重随机分为5组，每组12只。血痛定巴布剂高、中、低剂量组分别按141 mg、70.6 mg和35.3 mg生药／只的剂量背部贴敷血痛定巴布剂，每日1次，连续5 d。模型组背部贴敷空白基质巴布剂，每日1次，连续5 d。阿斯匹林组每天灌胃给药1次，连续5 d，0.1mL／10g，浓度为20 mg／mL。阿斯匹林组末次给药后1 h，受试药及模型对照组外敷给药后 2 h，腹腔注射 0.75%冰醋酸溶液0.2 mL／只后，立即观察并记录小鼠在20 min内的扭体次数。计算抑制率。

抑制率＝（模型组扭体次数－给药组扭体次数）／模型组扭体次数×100%

1.5.6 对热刺激致小鼠疼痛影响的实验 取雌性小鼠90只，以小鼠舔后足所需时间为痛阈值，（55± 0.5）℃热板法筛选痛阈值5～30 s合格小鼠。取筛选合格的小鼠70只，按痛阈值随机分为5组，每组14只。血痛定巴布剂高、中、低剂量组分别按141 mg、70.6 mg和35.3 mg生药／只的剂量背部贴敷血痛定巴布剂，每日1次，连续5 d。模型组背部贴敷空白基质巴布剂，每日1次，连续5 d。血痛定巴布剂高、中、低各剂量组动物末次给药时间为第一次测定痛阈值前120 min。盐酸吗啡组于第一次测定痛阈值前30 min，腹腔注射1次，0.1mL／10g，浓度为1 mg／mL。全部动物分别共测定3次痛阈值，间隔时间30 min。痛阈值超过60 s者则按60 s计算。

1.6 统计学分析 采用PEMS3.1分析软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差表示。以P＜0.05为差异有统计学意义

2 结 果

2.1 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 与模型组比较，血痛定巴布剂高剂量组腹腔洗液OD值显著降低（P＜0.05），抑制率31.7%；中、低剂量组腹腔洗液OD值降低，无统计学差异；阿斯匹林组腹腔洗液OD值极显著降低（P＜0.01），抑制率35.5%。见表3。

表3 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

2.2 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 与模型组比较，血痛定巴布剂高剂量组耳肿胀度（左右耳重量差）显著减少（P＜0.05），肿胀抑制率为33.3%；中、低剂量组耳肿胀度（左右耳重量差）减少，差异无统计学意义（P＞0.05），肿胀抑制率分别为17.6%、8.2%；醋酸泼尼松组耳肿胀度（左右耳重量差）极显著减少（P＜0.01），肿胀抑制率为68.4%。见表4。

表4 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

2.3 对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响 各组动物1 h、2 h、3 h足跖肿胀率呈上升趋势；4 h、5 h、6 h足跖肿胀率呈下降趋势。与模型组比较，血痛定巴布剂高剂量组2 h、3 h、4 h、5 h足跖肿胀率显著降低（P＜0.05），抑制率分别为19.70%、16.93%、17.39%、23.72%；中剂量组3 h、4 h足跖肿胀率显著降低（P＜0.05），抑制率分别为16.79%、16.32%；低剂量组足跖肿胀率有降低趋势，差异无统计学意义（P＞0.05）；醋酸泼尼松组2 h、3 h、4 h、5 h、6 h足跖肿胀率极显著降低（P＜0.01），抑制率分别为41.28%、 43.01%、60.10%、70.86%、78.16%。见表5、表6。

2.4 对小鼠棉球肉芽肿的影响 与模型组比较，血痛定巴布剂高剂量组肉芽肿净重、肉芽肿系数极显著减少（P＜0.01），肉芽肿抑制率为19.2%；中、低剂量组肉芽肿净重、肉芽肿系数增加，肉芽肿抑制率分别为15.2%、－0.2%；醋酸泼尼松组肉芽肿净重、肉芽肿系数极显著减少（P＜0.01），肉芽肿抑制率为34.9%。见表7。

2.5 对醋酸致小鼠扭体的影响 与模型组比较，血痛定巴布剂高、中剂量组20 min内扭体次数显著减少（P＜0.01、P＜0.05），抑制率分别为 37.5%、29.6%；低剂量组扭体次数减少，差异无统计学意义（P＞0.05），抑制率为18.7%；阿斯匹林组20 min内扭体次数显著减少（P＜0.05），抑制率为61.8%。见表8。

2.6 对热刺激致小鼠疼痛的影响 与模型组比较，血痛定巴布剂高、中、低剂量组3次痛阈值变化均不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）；盐酸吗啡组给药后30 min、60 min、90 min后痛阈值显著增加（P＜0.01）。见表9。

表5 不同时间血痛定巴布剂对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响

表6 不同时间血痛定巴布剂对角叉菜胶致大鼠足肿胀抑制率的影响

表7 血痛定巴布剂对小鼠棉球肉芽肿的影响

表8 血痛定巴布剂对醋酸致小鼠扭体的影响

表9 血痛定巴布剂对热刺激致小鼠疼痛的影响

表9 血痛定巴布剂对热刺激致小鼠疼痛的影响

与模型组比较，∗∗P＜0.01

组别 n 剂量（mg生药／只×d） 基础痛阈值 痛阈值第1次测定 第2次测定 第3次测定模型组 14 等量赋形剂 18.75±3.30 22.13±6.79 22.14±7.19 21.10±5.90高剂量组 14 141×5 18.65±3.40 23.70±7.91 22.39±8.17 20.46±6.05中剂量组 14 70.6×5 18.68±3.62 22.66±6.39 21.07±7.16 20.90±5.78低剂量组 14 35.3×5 18.83±3.53 22.11±6.82 21.23±7.42 20.43±6.67盐酸吗啡组 14 10 mg／kg 18.81±3.36 54.75±8.39∗∗ 48.23±13.71∗∗ 33.08±13.17∗∗

3 讨 论

急性软组织损伤是临床常见病与多发病，属中医“筋伤”范畴。现代医学研究证实：该病主要是受损组织的炎症反应，血管活性物质和组胺等炎性介质释放的增加和酸性产物的积聚，使损伤部位的毛细血管通透性增加，血管张力下降，血流缓慢甚至瘀滞，从而加重炎症病变［9］。目前针对这类疾病，西医尚缺乏特效的治疗方法，而中医外治方法多，且安全有效，在临床上广为应用［10］。血痛定巴布剂由三七、独一味、大黄、紫草、冰片等中药组成，具有消肿止痛、活血祛瘀和止血的功能。通过本次药理试验结果表明，在抗炎作用方面，血痛定巴布剂可显著降低小鼠腹腔毛细血管通透性，可显著降低二甲苯所致耳廓肿胀，可显著降低棉球肉芽肿净重、肉芽肿系数，可显著抑制角叉菜胶所致足趾肿胀；可显著减少醋酸致小鼠扭体次数，对小鼠热刺激所致痛阈值的变化不明显。以上结果表明，血痛定巴布剂对急性非特异性炎症有较强的抗炎作用，对炎症后期的组织增殖也有一定的抑制作用，对小鼠无明显的镇痛作用。

血痛定巴布剂的给药方式为局部给药，直接贴于患处。抗炎作用虽不及西药组，但具有给药剂量准确，血药浓度稳定，吸收面积小，作用迅速持久、安全、舒适、方便等优点［11⁃12］，对外训受到软组织挫伤的战士取得了良好的临床疗效，在临床实践中倍受患者欢迎，具有广阔的发展前景。

［1］ 李 亨，许学猛，陈 能，等.自热式痹痛巴布剂的药效学研究［J］.中药新药与临床药理，2014，25（4）：442⁃445.

［2］ 李驰荣，张尊祥，蔡晓红，等.散瘀止痛巴布膏对大鼠试验性炎症和疼痛药效学研究［J］.东南国防医药，2008，10（5）：349⁃351.

［3］ 卫生部药政局.中药新药临床前研究指导原则汇编［M］.北京：人民卫生出版社.

［4］ 陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社.

［5］ 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学［M］.3版.北京：人民卫生出版社.

［6］ 余玖霞，陆兔林，毛春芹，等.中药硇砂不同品种抗炎作用及急性毒性实验研究［J］.南京中医药大学学报，2012，28（1）：77⁃79.

［7］ 张乐之，孟德胜，温宝书，等.祛瘀宁痛贴治疗急性软组织损伤的实验研究［J］.中国中医骨伤科杂志，2004，12（1）：35⁃37.

［8］ 周国林，姚全胜，潘玉英.一种动物软组织损伤的实验方法［J］.中国药理学通报，1991，7（5）：396⁃398.

［9］ 邵先舫，刘志军，熊 辉，等.中医药外治急性软组织损伤实验研究现况及进展［J］.中医药导报，2011，17（2）：98⁃100.

［10］ 袁建迪，朱少兵，沈 彦，等.中医外治急性软组织损伤的临床研究进展［J］.中医外治杂志，2008，17（1）：41⁃43.

［11］ 贾 伟，高文远，王 涛，等.中药巴布剂的研究现状［J］.中国中药杂志，2003，28（1）：7⁃10.

［12］ 万东桂.痛块消巴布剂治疗癌性疼痛的临床研究［D］.北京：北京中医药大学，2003：57⁃58.

Anti⁃inflammatory and analgesic effect of Xuetongding cataplasm

HOU Jun1，DOU Jian⁃wei2，LI Jing1，LIU Ai⁃qin3，YOU Feng⁃ming4，ZHENG De⁃zhi5，LI Dan⁃dan6，ZHOU Long⁃fu1，HU Yong⁃he1

（1.Department of Pharmacy，General Hospital of Chengdu Military Region，Chengdu610083，Sichuan，China；2.School of Pharmacy，Xi'an Jiaotong University，Xi'an710061，Shaanxi，China；3.Department of Ophthalmology，the452th Hospital of PLA，Chengdu610021，Sichuan，China；4.Department of Endocrinology，Attached Hospital of Chengdu University of TCM，Chengdu610075，Sichuan，China；5. Department of Cadiovascular Surgery，General Hospital of Jinan Military Region，Jinan250031，Shandong，China；6.Drug of Clinical Basement，XinQiao Hospital of the3rd Military Medical University，Chongqing400037，China）

Objective To evaluate the anti⁃inflammatory and analgesic effects of Xuetongding cataplasm. Methods Animal models of inflammation and ache were adopted，and pharmacodynamic actions of Xuetongding cataplasm were observed. Results Xuetongding cataplasm lowered the capillaries permeability distinctly and inhibited xylol⁃induced mouse ear inflammation and cotton ball⁃induced mouse granuloma.Xuetongding cataplasm could conspicuously restrain rat foot metatarsus tumid treated by carrag⁃eenan，and decreased the twist⁃reaction stimulated by acetic acid.Thermal stimulation did not change pain threshold significantly. Conclusion Xuetongding cataplasm has obvious anti⁃inflammatory effects，and no analgesic effects.

Xuetongding cataplasm；Anti⁃inflammatory；Analgesic effect

R285

A

1672⁃271X（2017）01⁃0008⁃05

10.3969／j.issn.1672⁃271X.2017.01.003

2016⁃06⁃14；

2016⁃12⁃05）

（本文编辑：叶华珍； 英文编辑：王建东）

国家科技重大专项课题（2014ZX09J14107⁃03B）

1.610083 成都，成都军区总医院药剂科；2.710061 西安，西安交通大学药学院；3.610021成都，解放军第452医院眼科；4.610075 成都，成都中医药大学附属医院内分泌科；5.250031济南，济南军区总医院心外科；6.400037 重庆，第三军医大学新桥医院临床药理基地

呼永河，E⁃mail：djw＠mail.xjtu.edu.cn

侯 君，窦建卫，李 静，等.血痛定巴布剂抗炎镇痛作用的药效学研究［J］.东南国防医药，2017，19（1）：8⁃12.