HPLC法测定补元合肾酒中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量

卢瀚思　辜勇军　黄娟++龚琳慧++白俊毅

【摘 要】 目的：建立补元合肾酒中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量测定方法。 方法：采用高效液相法对制剂中的人参皂苷Rg1、Re、Rb1进行含量测定。 结果：人参皂苷Rg1、Re、Rb1进样量分别在39.16～1174.8ng、18.774～563.22ng、36.768～1103.04ng范围内与峰面积呈现良好的线性关系（r>0.999）；平均回收率分别为99.84%，99.31%，99.76%，RSD为1.08%，1.96%，1.37%。 结论：样品处理方法合理，方法学考察符合定量要求，结果准确，可用于补元合肾酒中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量检测。

【关键词】 补元合肾酒 人参皂苷Rg1 人参皂苷Re 人参皂苷Rb1 HPLC

Study on Quality Standard of Buyuanheshen Vinum

ABSTRACT Objective： To establish a method for the determination of ginsenoside Rg

1，Re，Rb1 in Buyuanheshen Vinum. Methods： The contents of ginsenoside Rg1， Re Rb1 in Buyuanheshen Vinum were determined by HPLC. Results： The content of ginsenoside Rg1， Re， Rb1 showed good liner relationships with respective peak area within the range of 39.16～1174.8ng， 18.774～563.22ng and 36.768～1103.04ng （ r>0.999） ， respectively； and the average recovery were 99.84%， 99.31% and 99.76%， RSD were 1.08%， 1.96%， 1.37%. Conclusion The quantitative method was simple， specific， accurate and reliable， which has good reproducibility and the ability of effectively controling the quality of compound Buyuanheshen Vinum.

KEY WORDS Buyuanheshen Vinum； Ginsenoside Rg1； Ginsenoside Re； Ginsenoside Rb1； TLC； HPLC； Quality standard

補元合肾酒传承于成都肛肠专科医院“济川养生驻颜不老方”，该方始于我国已逝著名中医肛肠病学专家、成都肛肠专科医院创始人黄济川先生的养生驻颜法，经过多年临床应用验证与研究改进。该制剂处方由红参、巴戟天、肉苁蓉等8味中草药组成，具有填精补髓、益阴扶阳、强筋壮骨、除皱消斑、增强免疫、增强活力之功效，可用于肾虚导致的各类疾病的治疗。

经处方进行分析，红参为该方中君药，主要活性成分为人参皂苷Rg1、Re、Rb1。为了控制本制剂的质量，选择人参皂苷Rg1、Re、Rb1作为含量测定的指标成分。本文在参考了《中国药典》及有关文献[1，2]的基础上，建立了补元合肾酒中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量测定

方法。

1 仪器与试药

补元合肾酒为自制（批号：151201、151202、151203）。人参皂苷Re对照品（批号：110754-201525，含量：92.3%），人参皂苷Rb1对照品（批号：110704-201424，含量：93.7%），人参皂苷Rg1对照品（批号：110703-201530，含量：91.7%），以上对照品均购自中国食品药品检定研究院。Waters e2695 高效液相色谱仪；色谱柱InertSustain C18（25cm×4.6mm，5μm）；BT125D电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；AUW120电子天平（日本岛津）；旋转蒸发器（上海申顺生物科技）；纯水机（密理博（上海）贸易有限公司）。乙腈、甲醇为色谱纯；水为自制超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：InertSustain C18（25cm×4.6mm，5μm）；流动相A：水；流动相B：乙腈；检测波长203nm；流速1.0mL·min-1，进样量：20μL；柱温：30℃，按下表1进行梯度洗脱。在此条件下其他成分对人参皂苷Rg1、Re、Rb1的测定无干扰，人参皂苷Rg1与人参皂苷Re分离度为2.35，满足色谱检测要求。对照品、供试品及阴性对照色谱图见图1。

2.2 对照品溶液制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品置10mL量瓶中，加甲醇制成每毫升约含1.5mg人参皂苷Rg1的对照品储备液；精密称取人参皂苷Re对照品置10mL量瓶中，加甲醇制成每毫升约含0.5mg人参皂苷Re的对照品储备液；精密称取人参皂苷Rb1对照品置10mL量瓶中，加甲醇制成每毫升约含1.5mg人参皂苷Rb1的对照品储备液；分别精密移取上述储备液各1mL置同一10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得到每毫升约含0.15mg人参皂苷Rg1、0.05mg人参皂苷Re、0.15mg人参皂苷Rb1的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密吸取药酒25mL至圆底烧瓶中，45℃旋蒸至无醇味后转移至分液漏斗中，圆底烧瓶用5mL纯化水洗涤2次，洗涤液合并至分液漏斗中。用乙醚萃取3次，每次10mL，弃去乙醚层；水层用水饱和的正丁醇萃取3次，每次10mL，合并正丁醇层；用氨试液洗涤正丁醇层5次，每次5mL，弃去水层；取正丁醇层，60℃旋蒸至干，残渣用甲醇溶解于5mL量瓶中，定容，摇匀，经孔径0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4 标准曲线绘制 分别精密吸取人参皂苷对照品Rg1、Re、Rb1储备液各0.1mL，0.2mL，0.5mL，1mL，1.5mL，2.0mL，3.0mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，吸取上述溶液及人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品储备液，各进样20μL。以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制工作曲线，建立回归方程，见表2。

2.5 仪器精密度 吸取“2.3.2”项下中配制的混合对照品溶液20μL，以HPLC含量测定方法重复进样6次，测定峰面积，结果人参皂苷Rg1、Re、Rb1的峰面积RSD值分别为0.82%、1.58%、0.97%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一批次（批号：151201）样品6份，室温下放置，分别于0、2、4、8、12、24h按HPLC含量测定方法进行测定，结果人参皂苷Rg1、Re、Rb1峰面积的RSD分别为0.78%、1.63%、1.12%，表明供试品溶液各组分在24h内稳定。

2.7 重复性试验 取同一批药酒样品6份，分别按供试品溶液制备方法操作制备样品，以HPLC含量测定方法测定峰面积积分值，计算人参皂苷Rg1的RSD为1.52%；人参皂苷Re 的RSD为1.71%；人参皂苷Rb1的RSD为1.65%。

2.8 加样回收率试验 精密吸取已知含量的同一批样品9份，每份12.5mL，分别加入一定量的对照品，按供试品溶液制备项下操作，每一个浓度制备3份样品，按色谱条件测定各样品含量，计算回收率。人参皂苷Rg1、Re、Rb1平均回收率分别为99.84%，99.31%，99.76%，RSD为1.08%，1.96%，1.37%。

2.9 样品含量测定 取3批样品（批号：151201、151202、151203），分别按含量测定方法进行测定，结果见表3。

3 讨论

补元合肾酒为复方制剂，含有的成分复杂，严重干扰供试品的含量检测。我们对人参皂苷成分常用的萃取、大孔吸附树脂、C18小柱层析等提纯方法[3]进行了考察，其中以萃取处理方法提纯效果较好且操作简便。我们进一步对萃取溶剂量和萃取次数进行了筛选，优选出了最佳的样品处理方法。

在流动相梯度条件筛选过程中，分别尝试了多种液相色谱条件[4，5，6]，其中《中华人民共和国药典》2015年版一部红参含量检测色谱方法的主峰分离度与峰型最佳，符合要求，适用于同时测定补元合肾酒中人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。

综上所述，本方法操作简单，测定结果准确，灵敏度高，重现性好，方法学研究系统适应性实验符合规定，可用于补元合肾酒的定量分析方法。

参考文献

[1]高杨， 陈林伟， 陈丹妮，等. HPLC法测定气血双补酒中人参皂苷Rg_1、Re和Rb_1的含量[J]. 中华中医药学刊， 2015（09）：2095-2097.

[2] 侯桂兰， 林能明， 方罗，等. 红参组方的注射剂中人参皂甙Rg1、Re、Rb1的含量测定[J]. 中国中医药科技， 2007， 14（6）：433-434.

[3] 孙彩华， 付迎， 蒋毅超. 高效液相色谱法对生脉胶囊中人参皂苷Rg1和Re的含量测定[J]. 中国醫药导报， 2016， 13（01）：9-12.

[4]国家药典委员会. 中华人民共和国药典2015年版（一部）[M]. 中国医药科技出版社， 2015：153-154.

[5]苑雅萍， 李云涛， 郭佳超. HPLC测定参芪颗粒中人参皂苷Rg1，Re，Rb1的含量[J]. 中国实验方剂学杂志， 2010， 16（16）：74-75.

[6]任睿， 贾宜军， 金红宇. HPLC测定益气复脉口服液中红参的含量[J]. 现代食品与药品杂志， 2006， 16（4）：8-11.

第一作者

卢瀚思（1988-），男，硕士在读，研究方向：药剂学；

通讯作者

白俊毅（1984-），男，博士在读，中药师，研究方向：中药新制剂开发与应用