大果山楂黄酮提取的方法研究

2017-04-15陈兵兵梁昌祥吴桂容

现代养生·下半月 2017年3期

关键词：贺州大果山楂

陈兵兵梁昌祥吴桂容

贺州学院食品与生物工程学院广西壮族自治区贺州市 542899

大果山楂黄酮提取的方法研究

陈兵兵梁昌祥吴桂容

贺州学院食品与生物工程学院广西壮族自治区贺州市 542899

据调查，在成熟的大果山楂果实里面，含有十分丰富的黄酮类物质。其有着天然无毒与多种生物活性等优点。在大果山楂黄酮的提取方面，不同的方法对结果有着较大影响。通过乙醇回流法与超声法对大果山楂黄酮提取结果的对比分析，得到最有效的提取工艺及各类参数。结果显示，超声法是提取大果山楂中黄酮的最佳方法，其具有操作简单与纯度高的优势。

大果山楂；黄酮；提取

1 引言

大果山楂在植物当中，被划归为蔷薇科的一类。适应我国南北种植。山楂是我国原有和特有的栽培果树，其果实营养丰富，食用与药用价值都很高，已被国家卫生部确定为药食两用食品。在2015年版的《中国药典》中，再一次将大果山楂收录。它有着消食健胃与活血化瘀的良好疗效，临床常用于消化不良与产后腹痛等症状的缓解。其主要功能除了消食健胃与活血化瘀，还包括腹痛腹胀、肠胃不顺、经闭、心腹疼痛以及高血脂症等症状的治疗[1]。近些年来，大果山楂在临床上，也广泛被用于治疗高血压、冠心病以及高脂血症等一系列的心血管疾病，并取得了良好的疗效。其药理研究中也显示，大果山楂中的关键成分即黄酮。

相关的统计显示，2016年全国大果山楂种植面积突破600万亩，总产量突破60万吨。但是大果山楂的食用与药用量仅占到总产量的一成。怎样改善大果山楂的利用率，是大果山楂加工业与医药领域发展面临的重点问题。提取大果山楂中的黄酮，同时对剩余物进行有效利用，是解决该问题的科学手段[2]。

本文通过乙醇回流提取法与超声法这两类不同的方法，研究了这两种不同方法对大果山楂黄酮提取效率的结果。借助于比色法测定提取的黄酮含量，最后得出大果山楂黄酮提取的最佳方法与工艺条件[3]。

2 原料与方法

2.1 材料与试剂

大果山楂：选择成熟度良好均匀，外观圆润，没有病虫害的广西贺州地区的大果山植实施黄酮提取实验分析。

试剂：主要包括福林酚、无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、亚硝酸钠、氢氧化钠、无水碳酸钠、葡萄糖、盐酸、锌粉、醋酸铅、三氯化铁、芦丁标准品等等。

2.2 实验方法

2.2.1 材料的预处理

大果山楂进行采摘后，对其清洗，再预冷并分级别筛选。归类后，盛放在聚乙稀薄膜保鲜袋中。将袋口进行折叠，放在冰箱，以2-4℃进行冷藏。

2.2.2 选用仪器及设备

表1：提取温度因素

表2：料液比因素

表3：提取时间因素

表4：超声波频率因素

表5：超声波作用时间因素

表6：物料比因素

紫外分光光度计，由上海天翔光学仪器有限公司生产。索氏提取器，由上海争巧科学仪器有限公司生产。DWF-100植物粉碎机，由青州市新航机械设备有限公司生产。DT5-1离心机，由北京时代北利离心机有限公司生产。YP100电子天平，由上海四蓝仪器设备股份有限公司生产。

2.2.3 提取液的制备方法

用电子天平称取5g已经粉碎去核的大果山楂，放置平底烧瓶内。依据一定的料液比加入配制的提取溶剂，在预先设定的提取温度与时间下，展开水浴回流提取实验。对提取液进行真空抽滤，进行前后两次提取后，进行合并。滤液在50℃以下工况，通过旋转蒸发器浓缩至小于25mL，倒入100mL容量瓶中，再借助于提取剂定容至指定刻度[4]。

2.2.4 标准曲线的制作方法

依次精密吸取芦丁对照液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml，即含有芦丁0、150、300、450、600、750μg，倒入12.5ml比色管内。加入30%的乙醇，直到其容量达到5ml。再加入5%浓度的亚硝酸钠溶液0.30ml，经过摇匀后放置5分钟。接着再添加10%浓度的硝酸铝溶液0.3ml，同样经过摇匀后放置6分钟。接着加入1.0mol/LNaOH的溶液2.00ml，通过30%的乙醇定容至指定刻度，进行摇匀处理，再放置15分钟，通过空白管调零[5]。摇匀后，借助于1cm的比色杯，在510nm波长处对吸光度进行测定，总计3次，算出其平均值，再进行回归处理。得到标准曲线的回归方程与相关系数，即Y=7.19×10-4X-3.31×10-2，得出 r=0.9879。得到芦丁含量（μg）和吸光度的标准曲线。

2.3 结果与分析

2.3.1 乙醇回流提取法

（1）提取条件。首先将大果山楂粉碎过20目筛，在105℃环境下干燥2小时，取出粉末1g，放置在回流提取器内。回流提取前后共计3次，再对提取液进行合并，回收乙醇，得到大果山楂黄酮提取液。将容量定至100ml，测出其吸光度。

依次改变提取温度、料液比以及提取时间等参数，进行对比分析。

（2）提取温度。实验过程中，温度高低，反映了分子无规则运动的剧烈状况如何。通过对比分析得知，伴随着温度的提升，黄酮在乙醇溶液里面的溶解度也得到了增加，由此提取率逐渐提高。但是假如温度过高，那么杂质也会大量溶出，使提取效率受到一定的影响。见表1。

（3）料液比。从实验中得知，伴随着料液比的增加，提取率也相应增加。但是如果料液比，即质量与体积的比值大于1:9时，那么提取率的增速放缓。这时再增加液料比时，那么提取率的变化不明显。黄酮的提取此时充分。见表2。

（4）提取时间。由表3可见，在其它条件均相同的基础上，延长提取时间，但黄酮的提取率并非始终增高。2小时后，提取率还有着下降的状况。这也许是黄酮提取物受到了氧化的影响。所以将实验的时间安排在2小时比较适宜。

2.3.2 超声提取法

（1）超声波频率。由表4可见，随着超声波频率的增大，提取作用得到增强，提取率也随之增加。但也不是始终在增加。当超声波频率超过40kHz时，提取率出现了下降趋势。

（2）超声波作用时间。由表5可见，伴随着超声波作用时间的不断增加，黄酮提取率也呈现出正态分布的特征。一旦时间超过15分钟，提取率发生了下降的现象。由于超声波作用时间增加，黄酮提取物也将受到氧化的影响。其最佳时间是15分钟。

（3）物料比。通过对比分析，得知物料比对黄酮提取含量的影响，见表6所示。

通常从理论上来说，料液比越大，那么提取率也就相应越大。如果料液比超过40，那么提取率将变得稳定，即相应的溶剂已经把有效的成分溶解出去。