防治鸭传染性浆膜炎中药组方的筛选及应用

黄庆大

(广西钦州农业学校，广西钦州 535000)

防治鸭传染性浆膜炎中药组方的筛选及应用

黄庆大

(广西钦州农业学校，广西钦州 535000)

目的：研究防治鸭传染性浆膜炎的最佳组方。方法：按照鸭传染性浆膜炎的防治原理，筛选11种能够健脾、杀菌与解毒的中药，测定各中药和组方的抑菌圈直径，然后对各组方经淋巴细胞转化与攻毒试验判断治愈率最优异的组方，分析血清生化指标情况。结果：各中药的抑菌圈直径由大到小依次是黄连、诃子、黄芩、丹参、陈皮、大黄、金银花、黄檗、蒲公英，其中黄连的抑菌圈直径最高；在各中药组方的抑菌圈直径由大到小依次是Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和Ⅲ。Ⅳ组的死亡率比阳性对照组明显减少（P＜0.01），比Ⅱ组明显减少（P＜0.05）；Ⅳ组的治愈率比阳性对照组明显增加（P＜0.01），比Ⅱ组明显增加（P＜0.05），Ⅳ组的保护率比阳性对照组与Ⅱ组明显增加（P＜0.01）。阳性对照组的血清总胆固醇含量比Ⅳ组和健康对照组的明显增加（P＜0.01），Ⅳ组、阳性对照组和健康对照组的血清总蛋白与谷丙转氨酶均没有统计学的差异（P＞0.05）。结论：组方 Ⅳ的防治效率最优异，服用中药组方Ⅳ组可明显减少鸭血清中的总胆固醇含量，可在养殖业中推行。

鸭传染性浆膜炎 中药防治 抑菌

鸭传染性浆膜炎是一种因鸭感染鸭疫里默氏杆菌导致的传染性疾病[1]，该病对鸭养殖业的危害严重，能够导致鸭形体瘦弱、发育异常、残鸭，甚至导致大量死亡[2]。鸭疫里默氏杆菌的种类多样，耐药性较高，传统的疫苗和抑菌西药的防治方法的效果较差[3]，因此需要研究安全性和有效性均较高的中药防治方法。本研究探讨各类中药对鸭传染性浆膜炎的抑菌作用，以便于为临床防治奠定依据。

1 材料和方法

1.1 材料和仪器

本研究的动物是北京鸭，鸭饲料来自于钦州市漓源粮油饲料有限公司，各类中药来自于亳州市长生中药饮片有限公司，培养基包含胰酶大豆琼脂与肉汤两种。试剂包含胎牛血清（来自于江苏恩莫阿赛生物技术有限公司），淋巴细胞分离液（来自于上海易佰聚经贸有限公司），双抗，噻唑蓝，细胞板（96 孔，来自于上海艾研生物科技有限公司），试剂盒来自于南京建成公司。

研究仪器包含生化分析仪、牛津杯、倒置显微镜、酶标仪、细胞培养箱与细胞计数仪等。

1.2 方法

1.2.1 组方和制备药液

按照各种中药的抑菌与配伍情况组方如下，Ⅰ是黄檗、黄连、人参和黄芩，Ⅱ是黄芪、黄连、黄芩、蒲公英和黄檗，Ⅲ 是金银花、黄芩和黄檗，Ⅳ是诃子、黄连、丹参、大蒜和黄芩。中药磨粉并过177 µm筛后各称10g，将二十份的温水浸泡药粉十分钟，然后对药液加热煮沸并浓缩，再用六层纱布进行过滤，重复3次合并药液，离心浓缩直到药液的浓度是 1 g/mL，灭菌后备用。

1.2.2 试验方法

牛津杯中放入1×108cfu/mL的菌液与1 g/ml的各药液 100µl，然后将无菌生理盐水作对照组。全部牛津杯转至烛缸并在培养箱中温度37℃培养36h，记录并比较抑菌圈的直径。自20日龄的鸭子的脚掌静脉采集十毫升血液离心搜集淋巴细胞。将5×106/ml淋巴细胞50 µl注入细胞板，然后分别注入浓度是 5 、2.5 、1.25 、0.625 、0.313 mg/ml的Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ组方，每个浓度有六个平行样，将淋巴细胞50 µL与培养基作为对照组。培养后每孔加噻唑蓝20µl培养。培养结束后，加酸性 SDS后混合均匀再培养两小时，使用酶联免疫分析仪检测各组的 OD 570，计算刺激指数=研究组OD 570 /对照组OD 570。在14 日龄实施攻毒试验，首先用3×104CFU/ 只菌量攻毒，再选取0.5 g/ml的组方 Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ每只每次服用1.25ml，2次/d，服用五日，将单用菌的鸭子作为阳性对照组，将健康鸭子作为健康对照组。在停止用药后三天，每组抽选十只并自脚掌进行静脉采血，分别检测其总胆固醇、谷丙转氨酶与血清总蛋白的含量。

1.3 统计学分析

全部研究数据都应统计学软件SPSS22.0整理和分析，用（平均值±标准差）的形式表示，实施单因素方差分析，以P＜0.05表示比较差异显著。

2 结果

2.1 各组中药的抑菌情况

各中药的抑菌圈直径由大到小依次是黄连、诃子、黄芩、丹参、陈皮、大黄、金银花、黄檗、蒲公英，其中黄连的抑菌圈直径最高，依次为34.0mm、33.0mm、25.0mm、23.0mm、22.0mm、21.0mm、17.0mm 、16.0mm、16.0mm；在各中药组方的抑菌圈直径由大到小依次是Ⅰ（36.0mm）、Ⅱ（31.0 mm）、Ⅳ（27.0 mm）和Ⅲ（21.0 mm）。

2.2 各组方的淋巴细胞转化试验情况

各组方的淋巴细胞转化试验刺激指数最高是组方 Ⅱ，其次是Ⅰ，各组方的刺激指数最高的药液浓度是 1.250 mg/ml，详见表1。

表1 各组方的淋巴细胞转化试验情况

2.3 攻毒试验与血生化指标情况

Ⅳ组的死亡率比阳性对照组明显减少（P＜0.01），比Ⅱ组明显减少（P＜0.05）；Ⅱ 组和阳性对照组的死亡率没有统计学的差异（P＞0.05）。Ⅳ组的治愈率比阳性对照组明显增加（P＜0.01），比Ⅱ组明显增加（P＜0.05），而Ⅱ 组和阳性对照组的治愈率没有统计学的差异（P＞0.05）。Ⅳ组的保护率比阳性对照组与Ⅱ组明显增加（P＜0.01），Ⅱ 组和阳性对照组的保护率没有统计学的差异（P＞0.05），详见表 2。

表2 各组的攻毒试验情况/%

阳性对照组的血清总胆固醇含量比Ⅳ组和健康对照组的明显增加（P＜0.01），Ⅳ组、阳性对照组和健康对照组的血清总蛋白与谷丙转氨酶均没有统计学的差异（P＞0.05），详见表 3。

表3 各组的血生化指标情况

3 讨论

鸭疫里默氏杆菌属于是一种革兰氏阴性菌，而清热解毒的中药能够抑菌，在本研究中，各中药的抑菌圈直径由大到小依次是黄连、诃子、黄芩、丹参、陈皮、大黄、金银花、黄檗、蒲公英，其中黄连的抑菌圈直径最高，这同容庭的研究相符，可为后期组方奠定基础。

黄芩中的黄芩苷可促使机体形成一氧化氮，增强巨噬细胞的免疫作用，从而发挥其抑菌功效。

在本研究结果中，在各中药组方的抑菌圈直径由大到小依次是Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和Ⅲ，可知组方的合理配伍会增加抑菌效果，这同臧莹安的研究相符，分析原因可能是共煎增加有效物质的溶解率，并使各成分之间协同发挥作用，促使在增强机体免疫能力的基础上祛邪抑菌作用能够更好地发挥。在本研究中，各组方都可刺激淋巴细胞发生转化，分析原因是中药成分促使 T 淋巴细胞的体积与细胞液含量增多。在本研究中，Ⅳ组、阳性对照组和健康对照组的血清谷丙转氨酶没有统计学的差异（P＞0.05），分析原因为虽然患病鸭的肝脏细胞被破坏，但是随着机体的细胞不断自我修复，谷丙转氨酶可达到正常数值，而服用中药组方Ⅳ可在一定程度上减少谷丙转氨酶水平，其中的丹参可增强肝脏细胞核酸的复制，减少过氧化作用，抑制细胞的坏死。在本研究中，阳性对照组的血清总胆固醇含量比Ⅳ组和健康对照组的明显增加（P＜0.01），分析原因可能为患病后机体的肝脏细胞的功能与结构的损伤非常严重，肝脏细胞坏死，而因为细胞中脂肪成分降解为胆固醇引起的，而组方Ⅳ中的大蒜与丹参可增强肝脏细胞的产生，防止细胞中的过氧化物质破坏细胞膜，增强细胞的修复作用。

在本研究中，Ⅳ组的死亡率比阳性对照组明显减少（P＜0.01），比Ⅱ组明显减少（P＜0.05）；Ⅳ组的治愈率比阳性对照组明显增加（P＜0.01），比Ⅱ组明显增加（P＜0.05），Ⅳ组的保护率比阳性对照组与Ⅱ组明显增加（P＜0.01），可知组方 Ⅳ的防治效率最优异，分析原因可能同各成分的协调作用导致的，但是具体的作用机制需要进一步研究。本文虽研究各组方的抑菌作用和治愈情况，然而没有分析应用中药治疗的经济性，各组样本量较少，还需进一步研究。

综上所述，组方Ⅳ对鸭传染性浆膜炎的防治效率优异，服用中药组方Ⅳ还可明显减少鸭血清中的总胆固醇含量，可在养殖业中推广。

[1] 柯楠，康雷，朱燕，等.重庆市近郊鸭传染性浆膜炎病病原分离鉴定及防治[J].西南农业学报，2013，26（5）：2103-2107.

[2] 陈海峰，陈晓兰，蒋春茂，等.江苏省部分地区鸭疫里默氏杆菌病病例调查[J].江苏农业科学，2013，41（9）：195-196.

[3] 陆兴明.鸭传染性浆膜炎防治[J].农技服务，2014，31（7）：172.