液相色谱—质谱法检测油菜子、植株和土壤中三唑醇的残留

刘军++程云斌++刘骞++沈菁

摘要：建立液相色谱-质谱法检测油菜子、植株和土壤中三唑醇残留量的方法。油菜子和植株经乙腈提取，经Carbon/NH2柱净化，实现样品的制备；土壤则经乙腈提取浓缩后直接检测。在岛津VP-ODS色谱柱上，以乙腈+0.1%甲酸水为流动相，梯度洗脱，采用电喷雾正离子（ESI+）sim扫描离子模式，以m/z 296为定量检测离子。结果表明，三唑醇保留时间在11.9 min左右。在0.02～2.00 mg/L的浓度范围内呈良好的线性关系，其相关系数为0.999 7。在油菜子、植株、土壤中添加0.02、0.20、2.0 mg/kg 3个浓度的三唑醇标样，其回收率为71%～110%，相对标准偏差（n=5）均小于10%，最低检出量（S/N=10）为1.7×10-9 g。该方法准确度和精密度均能满足检测要求。

关键词：三唑醇；残留；液相色谱-质谱；油菜子；土壤

中图分类号：O657.63 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）22-5934-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.22.051

Determination of Triadimenol Residue in Rapeseed，Plants and Soil by LC-MS

LIU Jun，CHENG Yun-bin，LIU Qian，SHEN Jing

（Agricultural Quality Standards and Inspection Technology Research Institute， Hubei Academy of Agricultural Science，Wuhan 430064，China）

Abstract：A method for determination of triadimenol residue in rapeseed，plants and soil was established by LC-MS. Triadimenol residue was extracted from sample with acetonitrile，cleaned up by ProElut CARB/NH2 SPE to achieve sample preparation，and separatesd on the Shimadzu VP-ODS column，using a mixture of acetonitrile and 0.1% formic acid solution as mobile phase. Determination was made by using ESI and under the mode of SIM. Quectionantitative detection of ions at m/z 296，the retention time of pyraclostrobin was about 11.9 min. Linearity were held in the ranges of 0.02～2.00 mg/L with the correlation coefficient for 0.999 7. The average recoveries of triadimenol in rapeseed，plants and soil at the spiked amounts of 0.02～2.00 mg/kg were 71%～110%，and the relative standard deviation was lower than 10%. The limit of detectable amount（S/N=10） was 1.7×10-9 g. The accuracy and precision of this method can meet the determinate requirements.

Key words： triadimenol； residue； LC-MS； rapeseed； soil

三唑醇（Triadimenol），又名百坦，屬于高效、广谱的三唑类杀菌剂。目前，关于三唑醇的检测方法有黄超群等[1]用液相色谱-串联质谱法同时测定蔬菜中7种三唑醇类杀菌剂的残留量；沈伟健等[2]采用固相分散萃取与气相色谱-负化学离子源质谱联用法测定食品中三唑醇的残留量；徐颖洁[3]采用SPE-GC-μECD测定蔬菜中6种三唑类农药的残留量；分子印记法[4，5]以及大豆植株[6]、玉米植株[7]、大豆[8]、玉米[9]、香蕉[10，11]、烟叶[12]、小麦[13]、土壤[14]、水[15，16]、酒精饮料[17-19]等介质中的残留均有研究，但未有在油菜子中残留检测的报道。本研究检测方法是为了解三唑醇在防治油菜作物菌核病后，油菜子、植株和土壤中三唑醇的残留量水平，其针对性更强。

1 材料与方法

1.1 仪器及试剂

LC-20AD型液相色谱仪（日本岛津公司），配有LC-MS 2010 EV型质谱检测器和电喷雾电离源，自动进样器，LC-MS工作站。

三唑醇（98%，江苏剑牌农化有限公司），甲醇、乙腈（色谱纯，美国Baker公司），甲酸（99.0%，美国Acros Organics公司），氯化钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），超纯水用Barnstead超纯水机制备，其他试剂均为分析纯。

1.2 样品前处理

油菜子：准确称取磨碎的油菜子样品5.0 g，先加10 mL纯水充分浸润，再加入30 mL乙腈，摇匀超声15 min，加入5.0 g NaCl 摇匀后超声5 min， 3 500 r/min离心5 min。移取上清液12 mL于100 mL烧杯中，水浴70 ℃蒸发近干，加入2 mL乙腈/甲苯（3/1，V∶V，下同）待净化。

油菜植株：准确称取搅碎的油菜植株样品10.0 g，加入30 mL 乙腈，14 000 r/min匀质2 min，加入5.0 g NaCl再14 000 r/min匀质1 min，3 500 r/min离心5 min。移取上清液6 mL于100 mL烧杯中，水浴70 ℃蒸发近干，加入2 mL乙腈/甲苯（3/1）待净化。

土壤：準确称取晾干磨碎的土壤样品5.0 g，加入10 mL纯水充分浸润，加入30 mL乙腈，剧烈摇匀，超声15 min，加入5.0 g NaCl摇匀后再超声5 min，3 500 r/min离心5 min。移取上清液12 mL于100 mL烧杯中，水浴70 ℃蒸发近干，加入2 mL乙腈溶解过膜待检测。

1.3 样品净化

用5 mL乙腈/甲苯（3/1）预淋洗Carbon/NH2柱（1 000 mg，6 mL），待淋洗液近干时迅速将油菜子、油菜植株的待净化液转移其中，10 mL乙腈/甲苯（3/1）淋洗，淋洗液收集于100 mL烧杯中，水浴70 ℃蒸发近干，加入2 mL乙腈溶解过膜待检测。

1.4 液相色谱-质谱条件

色谱柱：岛津VP-ODS（150 mm×2.0 mm，5 μm）；流动相采用含0.1%甲酸的水-乙腈，梯度洗脱（表1）；流速0.2 mL/min；进样体积5 μL；柱温40 ℃；离子源ESI（+），SIM扫描模式（m/z 296）；CDL温度250 ℃； 加热模块温度200 ℃；雾化气流速（N2）1.5 L/min；干燥气（N2）压力80 kPa；检测电压1.75 V。

2 结果与分析

2.1 定量离子的选择

在上述色谱条件下选择Scan（+）模式，进10 mg/L的三唑醇标样溶液，扫描范围m/z 150～350，得到全扫描质谱图（图1）。由图1可见，m/z 296（M+H）的为目标离子，所以选择m/z 296为定量离子。以m/z 296为定量离子采用Sim（+）模式，油菜子中的三唑醇的添加回收、标样质谱以及空白质谱见图2，油菜植株的质谱见图3，土壤中的质谱见图4。

2.2 线性范围和检出限

配制浓度为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mg/L三唑醇标样，以m/z 296质量色谱图峰面积为纵坐标，以对应的三唑醇质量浓度（mg/L）为横坐标，绘制标准曲线（图5）。其线性回归方程为Y=1.082×10-7X+89 220，线性相关系数r2=0.999 7。按 S/N=10的信噪比计算三唑醇最低检出量为1.7×10-9 g。

2.3 SPE净化柱淋洗溶剂体积的选择

在空白油菜子5.0 g、油菜植株10.0 g中添加0.2 mg/kg的三唑醇标样，按上述方法提取，样品净化时淋洗溶剂乙腈/甲苯（3/1）的体积按每次5 mL，共5次，分开收集，分别蒸发近干、定容，0.22 μm滤膜过滤，质谱检测，检测数据结果见表2。由表2可见，选择10 mL为最佳淋洗体积。

2.4 方法的添加回收率、精确度和最小检出浓度

利用未施药的油菜子、油菜植株、土壤样品作为空白样品，分别添加0.02、0.2、2.0 mg/kg 3个水平，每个水平5次重复，检测结果见表3。从表3可见，添加样品中三唑醇加标回收率为71%～110%，相对标准偏差（RSD）为1.5%～9.6%。以最小添加浓度0.02 mg/kg作为最小检出浓度，其回收率、相对标准偏差和最小检测浓度都能满足农药登记残留试验的要求。

3 结论

本研究采用乙腈提取，Carbon/NH2柱净化，液相色谱-质谱法检测三唑醇在油菜子、油菜植株、土壤中的残留，该方法操作简单，其添加回收率、精确度和最小检出浓度均能达到农药登记残留试验的要求。

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