罗红霉素颗粒和干混悬剂中降解产物HPLC测定方法建立及降解产物产生原因探讨

杨雷

摘 要：建立反相高效液相色谱法测定罗红霉素颗粒和干混悬剂中降解产物去红霉糖罗红霉素的含量。方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），磷酸盐缓冲液-乙腈（25：75）和65%乙腈梯度洗脱为流动相，检测波长为210nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。结论：本法简便、准确，可用于罗红霉素颗粒和干混悬剂中降解产物去红霉糖罗红霉素的含量测定。

关键词：罗红霉素；含量；测定

罗红霉素是新一代大环内酯类抗生素，主要作用于革兰氏阳性菌、厌氧菌、衣原体和支原体等[1-2]。罗红霉素体外抗菌作用与红霉素相类似，体内抗菌作用比红霉素强1-4倍。罗红霉素适用于化脓性链球菌引起的咽炎及扁桃体炎；沙眼衣原体引起的尿道炎和宫颈炎；敏感菌所致的鼻窦炎、中耳炎、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作等[3-5]。去红霉糖罗红霉素为罗红霉素主要降解产物之一。本文采用高效液相法对罗红霉素颗粒和干混悬剂中的降解产物去红霉糖罗红霉素进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器：LC-5520高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）；HX-06超声波清洗器（武汉恒信世纪科技有限公司）；UV-6双光束扫描型紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；Precisa XB220A电子分析天平（上海精科天美科学仪器有限公司）；PC 200-G 50恒温水浴（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）；天星进样瓶清洗机TX-500型（北京天星科仪科技有限公司）。

1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 对照品：罗红霉素、去红霉糖罗红霉素

1.4 试剂：甲醇（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）、磷酸二氢铵（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）、冰醋酸（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）、三乙胺（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、乙腈（绍兴经济开发区忠良化工有限公司）。

1.5 试药：罗红霉素颗粒、罗红霉素干混悬剂

2 测定方法确定

2.1 色谱条件

依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。流动相：流动相以磷酸盐缓冲液-乙腈（25：75）为A，65%乙腈为B，按下表梯度洗脱；检测波长：210nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按去红霉糖罗红霉素峰计算应不得低于2500。

2.2 对照品溶液的制备

取在60℃减压干燥4 小时的去红霉糖罗红霉素对照品适量，精密称定，加A流动相制成每lml含20μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品适量，精密称定，加A流动相30毫升超声处理10分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用A流动相分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加A流动至刻度，摇匀，即得。

2.4 精密度试验

精密称取去红霉糖罗红霉素对照品适量，加A流动相使溶解，制成浓度为20μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.56%，表明本方法精密度良好。

2.5 对照品的线性考察

精密称取适量去红霉糖罗红霉素对照品，加入A流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含5、10、15、20、25、30微克的溶液对照品溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，罗红霉素在5～30μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.6 准确度试验

取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入去红霉糖罗红霉素对照品，按项下方法制备成80% 100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验， 计算回收率为95-105%之间，平均回收率为96.5%。

2.7 样品稳定性试验

取同一批样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、0.5、1.5、2小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。结果表明供试品不稳定，需临用新配。取去红霉糖罗红霉素对照品，按2.2项下的对照品制备方法制备对照品，将供试品置室温下放置，分别于第0、0.5、1、1.5、2.0小時，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定去红霉糖罗红霉素峰面积的RSD=0.76%。结果表明对照品2小时内稳定。

2.8 专属性试验

取合成原料及合成中间体，照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在去红霉糖罗红霉素出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.9 破坏性试验

酸分解产物溶液的制备：取罗红霉素适量，置试管中，加沿管壁缓缓加入1mol/L盐酸1ml，煮沸10分钟，冷却，加流动相A稀释至10ml，调节溶液pH值至中性，转移定容至25毫升容量瓶内，用流动相A定容，滤过，取续滤液，即得。碱分解产物溶液的制备：取罗红霉素适量，置试管中，加1mol/L NaOH溶液1ml，煮沸10分钟，冷却，加流动相A稀释至10ml，调节溶液pH值至中性，转移定容至25毫升容量瓶内，用流动相A定容，滤过，取续滤液，即得。样品热分解产物试验溶液的制备：取罗红霉素适量，置试管中，105摄氏度加热1小时，冷却，加流动相A稀释至10ml，转移定容至25毫升容量瓶内，用加流动相A定容，滤过，取续滤液，即得。罗红霉素被酸碱破坏后产生大量去红霉糖罗红霉素，加热破坏后无去红霉糖罗红霉素产生。破坏性试验发现罗红霉素不耐酸碱，罗红霉素颗粒和干混悬剂PH值偏酸性，这可能是罗红霉素颗粒和干混悬剂降解的原因之一。

参考文献

[1]栾连军，邵青，李士敏，王萍.罗红霉素颗粒剂、胶囊剂及片剂人体生物利用度测定[J].中国新药杂志，1999（08）.

[2]李珍，沈意翔，石晶，王卓，范国荣，胡晋红.国产罗红霉素胶囊和片剂的药物动力学和生物利用度比较[J].中国药房，2000（01）.

[3]张蓉映，李宁.罗红霉素缓释片治疗社区获得性呼吸道感染的临床疗效和安全性分析[J].中国中医药现代远程教育，2010（02）.

[4]曹丽华，王慧玲，霍丽，王镇山，徐启勇，章辉，刘德梦，刘晓菊.罗红霉素缓释片与罗红霉素片治疗急性呼吸系感染的临床研究[J].大连医科大学学报，2005（02）.

[5]程晓冬.罗红霉素缓释片治疗泌尿系统感染的疗效及安全性研究[J]. 国际泌尿系统杂志，2009（06）.