涤痰汤在稳定兔动脉粥样硬化模型中的作用机制

郭遂怀 张 鹏

(武汉市武昌医院重症科，湖北 武汉 430063)

涤痰汤在稳定兔动脉粥样硬化模型中的作用机制

郭遂怀 张 鹏1

(武汉市武昌医院重症科，湖北 武汉 430063)

目的 探讨涤痰汤在稳定兔动脉粥样硬化(AS)中的作用机制。方法 40只健康雄性新西兰白兔随机分为空白对照组、AS模型组、阿托伐他汀钙组、涤痰汤组和阿托伐他汀钙+涤痰汤组，每组8只。空白对照组饲以普通饲料，其余各组给高脂饲料以建立AS模型。建模成功后，按组别给予不同药物干预4 w。取颈总动脉血测定血清中血脂〔甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)〕、抗氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)、炎性因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量；取主动脉弓组织作苏木素-伊红(HE)染色比较不同分组实验动物主动脉组织形态学改变。结果 与AS模型组比较，阿托伐他汀钙组、涤痰汤组和阿托伐他汀钙+涤痰汤组TG、TC、LDL-C、TNF-α和IL-6水平显著降低，HDL-C、SOD和MDA水平显著升高(P<0.05)；与阿托伐他汀钙组和涤痰汤组比较，阿托伐他汀钙+涤痰汤组TG、TC、LDL-C、TNF-α和IL-6水平下降更显著，HDL-C、SOD和MDA水平升高更显著(P<0.05)。形态学观察显示阿托伐他汀钙组、涤痰汤组和阿托伐他汀钙+涤痰汤组的血管内膜层泡沫状细胞均有减少，脂质沉积均有减轻，阿托伐他汀钙+涤痰汤组的减轻程度更显著。结论 涤痰汤稳定AS的作用机制可能是通过改善机体血脂异常，增强抗氧化应激能力和减轻炎性反应等途径实现的。涤痰汤与阿托伐他汀钙联合应用有协同作用，具有临床推广应用价值。

涤痰汤；动脉粥样硬化；血脂；炎性因子

动脉粥样硬化(AS)的发病机制复杂，与多种因素密切相关，其中脂质代谢异常、氧化应激损伤和炎性浸润被认为是AS发病的几种主要病变基础〔1〕。阿托伐他汀钙在临床上对高脂血症具有较好的疗效，有助于改善AS患者的血脂异常，但临床效果仍不理想〔2〕。中医学认为AS与痰浊密切相关，由于体质虚弱，中气不足，脾虚不运，可以使水湿停留，凝聚为痰，其治疗上讲究辨证论治，对于AS主要从活血化瘀、祛痰降脂、扶正补虚法(健脾益气、补益肝肾)等治法入手。有研究发现，涤痰汤具有调节血脂水平和降低致AS炎性因子的作用〔3〕，本研究旨在进一步探讨涤痰方在稳定AS中的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康雄性新西兰白兔40只〔由湖北省疾病预防控制中心提供，动物合格证号：SCXK(鄂)2008-0005〕，体质量1.4～1.6 kg，平均(1.5±0.18)kg。

1.2 药物与主要试剂 涤痰汤(由湖北中医药大学专家门诊部中药房提供，其配方包括：半夏7.5 g，茯苓6 g，胆南星7.5 g，橘红4.5 g，枳实6 g，竹茹2 g，人参3 g，石菖蒲3 g，甘草1.5 g，生姜5片)，原方水煎2次，煎液过滤，混合后加热浓缩至生药量0.738 g/ml，4℃保存备用。阿托伐他汀钙为美国辉瑞制药有限公司，批号:H20051409，超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒购自南京建成生物工程研究所;肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技有限公司)。

1.3 实验分组与给药方法 按随机数字表法分为5组，空白对照组(n=8)：普通饲养12 w，后4 w增加生理盐水10 ml/kg灌胃，1次/d；AS模型组(n=8)：高脂饲料(配方为83%普通饲料、5%猪油、10%蛋黄、2%胆固醇)饲养，8 w后随机选取2只，麻醉后取颈总动脉血，查血脂，提示血脂明显增高；主动脉分离后制备苏木素-伊红(HE)切片，血管壁内均可见明显的粥样斑块，提示AS造模成功。剩余6只继续喂予高脂饲料并以生理盐水 10 ml/kg灌胃，1次/d，共4 w；阿托伐他汀钙组(n=8)：高脂饲料饲养12 w，前8 w为建立AS模型，后4 w增加阿托伐他汀钙3 mg·kg-1·d-1，按10 ml/kg灌胃，1次/d；涤痰汤组(n=8)：高脂饲料饲养12 w，前8 w为建立AS模型，后4 w增加涤痰汤10 ml/kg灌胃，1次/d；阿托伐他汀钙+涤痰汤组(n=8)：高脂饲料饲养12 w，前8 w为建立AS模型，后4 w增加阿托伐他汀钙3 mg·kg-1·d-1溶于涤痰汤中，按10 ml/kg灌胃，1次/d。

1.4 标本采集与观察指标 末次给药后禁食(不禁水)12 h，取颈总动脉血4 ml，室温静置30 min，3 500 r/min离心15 min，分离血清，应用全自动生化分析仪测定血清中血脂水平〔甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)〕和抗氧化因子(SOD和MDA)的含量，应用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清中炎性因子(TNF-α和IL-6)的含量；于主动脉弓处取直径3 mm的组织作HE染色比较不同分组实验动物主动脉组织形态学改变。

1.5 统计学方法 采用SPSS22.0软件进行方差分析、t检验。

2 结 果

2.1 各组血脂水平比较 AS模型组兔血清TC、TG、LDL-C水平均显著高于空白对照组，HDL-C水平显著低于空白对照组(P<0.05)。与AS模型组相比，阿托伐他汀钙组、涤痰汤组、阿托伐他汀钙+涤痰汤组TC、TG、LDL-C水平均显著降低，HDL-C水平显著升高(P<0.05)；分别与阿托伐他汀钙组和涤痰汤组比较，阿托伐他汀钙+涤痰汤组的TC、TG、LDL-C水平均显著下降，HDL-C水平均显著升高(P<0.05)。见表1。

组别nTCTGHDL-CLDL-C空白对照组82.02±0.290.93±0.090.74±0.070.47±0.17AS模型组621.27±1.541)1.32±0.181)0.59±0.041)6.41±0.371)阿托伐他汀钙组84.25±0.712)3)0.97±0.182)3)1.44±0.182)3)1.43±0.212)3)涤痰汤组84.31±0.342)3)0.91±0.022)3)1.32±0.262)3)1.36±0.122)3)阿托伐他汀钙+涤痰汤组83.14±0.252)0.88±0.032)1.72±0.342)0.84±0.192)

与空白对照组比较:1)P<0.05；与AS模型组比较:2)P<0.05；与阿托伐他汀钙组+涤痰汤组比较:3)P<0.05；下表同

2.2 各组抗氧化因子水平比较 AS模型组兔血清SOD和MDA水平均显著低于空白对照组(P<0.05)。与AS模型组相比，阿托伐他汀钙组、涤痰汤组、阿托伐他汀钙+涤痰汤组SOD和MDA水平显著升高(P<0.05)；分别与阿托伐他汀钙组和涤痰汤组比较，阿托伐他汀钙+涤痰汤组SOD和MDA水平均显著升高(P<0.05)。见表2。

组别nSOD(U/ml)MDA(nmol/ml)空白对照组8299.49±15.874.42±0.40AS模型组6154.66±9.581)11.55±1.111)阿托伐他汀钙组8242.38±11.082)3)6.14±0.382)3)涤痰汤组8263.03±8.762)3)5.30±0.722)3)阿托伐他汀钙+涤痰汤组8284.27±9.162)4.71±0.362)

2.3 各组炎性因子水平比较 AS模型组兔血清TNF-α和IL-6水平均显著高于空白对照组(P<0.05)。与AS模型组相比，阿托伐他汀钙组、涤痰汤组、阿托伐他汀钙+涤痰汤组TNF-α和IL-6水平显著降低(P<0.05)；分别与阿托伐他汀钙组和涤痰汤组比较，阿托伐他汀钙+涤痰汤组TNF-α和IL-6水平均显著下降(P<0.05)。见表3。

组别nTNF-α(ng/ml)IL-6(pg/ml)空白对照组80.52±0.01133.69±3.35AS模型组61.36±0.021)181.06±4.911)阿托伐他汀钙组80.80±0.012)3)148.53±1.032)3)涤痰汤组80.69±0.012)3)141.95±0.952)3)阿托伐他汀钙+涤痰汤组80.60±0.022)134.74±0.762)

2.4 各组主动脉组织形态学改变情况 空白对照组可见主动脉壁厚薄均匀，内膜光滑完整，无AS斑块形成；AS模型组血管内膜层呈扁平或出现隆起，内膜下出现大量泡沫状细胞，细胞外有明显脂质沉积现象。阿托伐他汀钙组和涤痰汤组的内膜下泡沫状细胞数量和脂质沉积现象程度均明显轻于AS模型组，但两组间无明显差异。阿托伐他汀钙+涤痰汤组的内膜下泡沫状细胞数量显著减少，脂质沉积现象明显改善，改善程度显著优于阿托伐他汀钙组和涤痰汤组。见图1。

图1 各组主动脉组织病理学形态(HE，×200)

3 讨 论

AS是多因素共同作用引起的，发病机制复杂，目前尚未完全阐明，其中脂质代谢障碍已被证实为AS的病变基础，因此改善患者的血脂水平是临床治疗AS的重要策略〔4〕。阿托伐他汀钙是HMG-CoA还原酶的选择性、竞争性抑制剂，可有效抑制肝脏内HMG-CoA还原酶的活性和胆固醇的合成，从而降低血浆中胆固醇和脂蛋白水平，同时可增加细胞表面LDL受体，从而增强细胞摄取和代谢LDL的能力〔2,5〕，在临床治疗中应用较为广泛照药。他汀类药物长期服用可引发患者出现胃肠道不适症状，也可导致肝肾功能下降。在临床疗效方面，阿托伐他汀钙对AS长期治疗的总有效率仍不十分理想。我国传统中医药在慢性疾病的临床治疗中具有很多优势，有研究显示涤痰汤对AS具有较好的疗效〔3〕。

中医学认为AS与痰关系密切，中医学认为体质虚弱，中气不足，脾虚不运可以使水湿停留，凝聚为痰，痰为一种危害甚广的致病因素〔6〕。同时，久病伤气，气虚不能推动血行，血脉瘀滞更甚，从而加剧心脑血管事件的风险；痰瘀互阻，久病蕴热，灼伤真阴或久病耗伤气血，累及真阴，皆可导致阴虚，而阴虚生内热，煎灼津液，炼液为痰。涤痰汤出自南宋严用和的《济生方》，具有益气化痰、化浊开窍的作用。研究报道，涤痰汤对AS具有一定的疗效，可防止血栓的形成，延缓AS病情的进展,但其作用机制尚未阐述清楚〔7〕。本课题组前期研究发现，涤痰方有助于调节AS兔的血脂水平，可提高机体的抗氧化应激能力〔3〕。

动脉内膜脂质异常沉聚是AS的主要病理变化之一，胆固醇酯及胆固醇是粥样斑块的主要成分。氧化应激在AS的发生、发展过程中发挥着重要的促进作用，SOD是机体内主要的抗氧化酶和超氧自由基清除剂，其活性水平的高低代表了组织清除自由基的能力，是MDA细胞膜脂质过氧化的终产物，其表达水平高低是机体内的脂质过氧化程度的重要标志和AS的病变指标。炎症反应也是AS发生发展的重要促进因素，TNF-α和IL-6是两种重要的炎症因子，其中TNF-α可诱发动脉粥样斑块的形成、扩大，增加内皮细胞产生血小板因子的活性，促使血管内皮细胞产生直接细胞毒作用；IL-6对细胞外基质具有较强调节作用，可刺激血管平滑肌细胞增生与基质降解酶的合成，侵蚀AS斑块内基质致使粥样硬化斑块破裂，加剧AS斑块的不稳定性。本组研究结果说明涤痰汤与阿托伐他汀钙具有很好的协同作用，可显著纠正AS的血脂异常，增强机体的抗氧化应激能力，减轻炎性反应，究其原因，可能与涤痰汤的主要成分密切相关。涤痰方主要由半夏、茯苓、胆南星、橘红、枳实、竹茹、人参、石菖蒲、甘草、生姜等药物组成，研究显示，半夏能够降低全血黏度、抑制红细胞的聚集和提高红细胞的变形能力〔8〕，同时对高脂血症具有一定的治疗作用〔9〕。茯苓具有抗感染和免疫调节等功效，可降低血清TC、TG和LDL-C水平,升高HDL-C和SOD水平〔10〕。胆南星、橘红、枳实等具有抗感染作用，还可增强抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化，抗氧化防御功能也十分显著〔11,12〕。竹茹、人参、石菖蒲等的降脂作用也已得到诸多研究报道证实〔13〕。甘草和生姜则主治清热解毒、祛痰止咳，具有清除氧自由基，起到抗AS和抗血栓形成作用〔14,15〕。涤痰方对AS的疗效，其作用机制可能是通过改善机体血脂异常，增强抗氧化应激能力和减轻炎性反应等途径实现的。涤痰方与阿托伐他汀钙联合应用有协同作用，具有临床推广应用价值。

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〔2016-06-16修回〕

(编辑 滕欣航)

2015年度武汉市临床医学科研项目(No.WZ15C14)

张 鹏(1975-)，女，硕士，副主任护师，主要从事科研管理和护理管理研究。

郭遂怀(1977-)，女，博士，副主任医师，主要从事中医药防治脑血管疾病研究。

R28

A

1005-9202(2017)06-1336-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.06.014

1 武汉市武昌医院科教科