IMP3、Ki—67在胃肠胰神经分泌肿瘤中的表达及与临床病理特征的关系

李有恒++徐洪++曾+训

[摘要]目的 探讨IMP3、Ki-67在胃肠胰神经分泌肿瘤（GEP-NEN）中的表达及与临床病理特征的关系。方法 收集我院及周边地区自2010年1月～2016年10月确诊的59例GEP-NEN，运用免疫组织化学方法检测患者标本中的IMP3、Ki-67表达情况，结合临床病理特征，应用统计学的方法对结果进行分析。结果 IMP3在GEP-NEN中阳性率为81.36%（48/59），在不同肿瘤直径、有无淋巴结转移、不同肿瘤分期与分级中的表达差异有统计学意义（P<0.05），在是否有远处转移中的表达差异没无统计学意义（P>0.05）；Ki-67在GEP-NEN中阳性率为44.68%（26/59），在肿瘤大小、有无淋巴结转移、有无远处转移、病理分级及临床分期中的表达差异均有统计学意义（P<0.01）；IMP3、Ki-67表达随着肿瘤体积越大、淋巴结转移、病理分级越高、临床分期越晚阳性率越高。结论 IMP3与Ki-67在GEP-NEN的表达可作为判断患者预后的参考因素之一；IMP3可能在GEP-NEN的发生、发展过程中起重要作用。

[关键词]神经内分泌肿瘤；胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3；细胞增殖核抗原

[中图分类号] R735 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）02（c）-0015-04

Expression of IMP3 and Ki-67 in gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm and its relationship with clinicopathological features

LI You-heng XU Hong▲ ZENG Xun

Department of Pathology，Shekou People′s Hospital of Shenzhen City in Guangdong Province，Shenzhen 518067，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of IMP3 and Ki-67 in gastrointestinalopancreatic neuroendocrine neoplasm （GEP-NEN） and its relationship with clinicopathological features.Methods 59 patients with GEP-NEN diagnosed from January 2010 to October 2016 in our hospital and other surrounding areas were collected. Immunohistochemistry was used to detect the expression of IMP3 and Ki-67 in patients′ specimens.Clinical and pathological features were combined，and the results were statistically analyzed.Results The positive rate of IMP3 in GEP-NEN was 81.36% （48/59）.The differences of the expression in different tumor size，whether there was lymph node metastasis or not，different tumor stages and classifications were statistically significant （P<0.05）.There was no statistical significance in the expression of tumor in terms of whether there was distant metastasis or not （P>0.05）.The positive rate of Ki-67 in GEP-NEN was 44.68% （26/59）.The differences of the expression in different tumor size，whether there was lymph node metastasis or not，whether there was distant metastasis or not，different pathological grades and clinical stages were statistically significant （P<0.01）；the positive rate of the expression of IMP3 and Ki-67 was increased with larger tumor size，lymph node metastasis，higher pathological grades，and more advanced clinical stages.Conclusion The expression of IMP3 and Ki-67 in GEP-NEN may be one of the reference factors for determining patients′ prognosis.IMP3 may play an important role in the development and progression of GEP-NEN.

[Key words]Neuroendocrine neoplasm；Insulin-like growth factor Ⅱ mRNA binding protein 3；Cell proliferating nuclear antigen神經内分泌肿瘤（neuroendocrine neoplasm，NEN）是起源于肽能神经元以及神经内分泌细胞的一组异质性恶性肿瘤，都有转移潜能[1]。NEN可发生在人体多处器官和组织，主要发生在胃肠道和胰腺，胃肠胰神经内分泌肿瘤（gastroenteropancreatic neuroendocrine neoplasm，GEP-NEN）占所有NEN的55%～70%，发病率约为5.25/10万，在消化道肿瘤中排第2位[2]。近年来，GEP-NEN发病率明显升高，与30年前相比增加了将近5倍[3]。胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3（insulin-like growth factorⅡ mRNA binding protein 3，IMP3）是一种新识别的肿瘤胚胎蛋白，是影响肿瘤增殖及侵袭转移的重要因素之一[4]；恶性肿瘤的发生、发展与肿瘤细胞增殖密切相关；细胞增殖核抗原（cell proliferating nuclear antigen）（Ki-67）是细胞增殖的良好标志。目前，IMP3在GEP-NEN中的表达关系少有研究，国内未见报导，本研究回顾性分析59例GEP-NEN患者的临床病理资料，通过免疫组织化学方法检测IPM3、Ki-67水平，了解其与GEP-NEN临床病理特征的关系。

1资料与方法

1.1 一般资料

收集广东广州、深圳及东莞等5家医院自2010年1月～2016年10月确诊的59例胃肠胰神经内分泌肿瘤，男性41例，女性18例，男女比例2.28∶1。年龄19～77岁，平均47.9岁。发生在前肠19例，中肠14例，后肠8例，胰腺18例。肿瘤直径0.4～7 cm，其中直径≥2 cm共34例，<2 cm共25例。发生淋巴结转移14例。发生远处转移8例，其中4例肝转移，2例肺转移，皮肤及骨转移各1例。按2010年《WHO消化系统肿瘤分类》的分级标准[5]，1级（G1）27例，2级（G2）14例，3级（G3）18例；G1、G2是NEN，属于高分化肿瘤，G3是神经内分泌癌（neuroendocrine carcinoma，NEC），属于低分化肿瘤。参照美国癌症联合委员会（American Joint Committe on Cancer，AJCC） 2010年第7版TNM分期标准[6]，Ⅰ期23例，Ⅱ期8例，Ⅲ期20例，Ⅳ期8例。

1.2 研究方法

所有标本均用4%中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，以4 μm厚度切片，分别做HE和免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）染色。鼠抗人IMP3单克隆抗体（工作浓度1∶100）购自武汉博士德公司；鼠抗人Ki-67单克隆抗体购自福州迈新生物有限公司，通过罗氏全自动免疫组化染色仪（BENCHMARK GX）完成免疫组化染色，参照该仪器操作流程：①4 μm厚石蜡切片置于65℃烤片机中烤60 min，贴上标签置于机器切片盘上；②依次放上DAB试剂盒、苏木精、返蓝液和一抗等试剂瓶，运行仪器；③机器自动完成消化、抗体孵育和复染；④用含有温和清洁剂的蒸馏水冲洗、乙醇脱水、二甲苯透明，最后中性树脂胶封固；⑤用已知阳性组作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判读

采用双盲法，所有病例均由两位高年资病理医师阅片。IPM3阳性定位于细胞质，光镜下呈黄褐色（图1），以>10%的肿瘤细胞胞质着色定为阳性，按着色强度分弱阳性、中阳性及强阳性，相应显示为浅黄色、棕黄色及棕褐色。Ki-67阳性定位于细胞核，光镜下呈黄褐颗粒状（图2），以>5%的肿瘤细胞核着色定为阳性，以阳性肿瘤细胞数占比≥50%定为高增殖活性。

1.4 统计学方法

所有数据采用SPSS 19.0统计学软件处理，各组计数资料比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

IMP3阳性率为81.36%（48/59），强阳性5例，中阳性27例，弱阳性16例；IMP3在肿瘤大小、淋巴结转移、病理分级及临床分期中的表达差异均有统计学意义（P<0.05），而在肿瘤是否有转移的表达差异无统计学意义（P>0.05）。Ki-67阳性率为44.68%（26/59），高增殖活性12例；Ki-67在肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移、病理分级及临床分期的表达差异均有统计学意义（P<0.01）（表1）。

3 讨论

GEP-NEN是罕见的异质性肿瘤，可表现为相对惰性、低度恶性到高度恶性[7]，有研究显示，GEP-NEN发病率男性高于女性[3]，本研究与此相符。近年发病率明显升高，与医疗诊断技术的进步有关，但实际发病率也是升高的[8]。

1907年，Oberndorfer发现胃肠道有一种类似癌的良性肿瘤，并命名为类癌[9]，这是人们对胃肠胰神经内分泌肿瘤的早期认识，后来证实这类肿瘤都是恶性的。随着研究的深入，发现其来源于消化道弥散神经内分泌系统，部分肿瘤能摄取胺前体及脱羟基（amine precursor uptake and decarboxylation， APUD），所以又叫APUD瘤[10]。由于组织形态多样，生物学行为复杂，长期以来，这类肿瘤的命名及分类较为紊乱，直到2000年世界卫生组织（WHO）才统一命名为神经内分泌肿瘤[11]，2010年《WHO消化系统肿瘤分类》第4版对胃肠胰神经内分泌肿瘤制订了分级、分期标准，同年得到中国胃肠胰神经内分泌肿瘤病理学诊断共识的一致推荐[12]。GEP-NEN分级、分期被证实是影响患者生存率的独立危险因素[13]，有报道称GEP-NENⅠ、Ⅱ期患者5年总生存率达100%，Ⅲ期为91%，Ⅳ期为73%[14]。

IMP3是胰島素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白家族成员之一，在胚胎组织及人体多种恶性肿瘤中高表达，在瘤旁组织、良性肿瘤及成人正常组织中不表达或低表达，被认为是肿瘤胚胎蛋白[15]，大量研究表明，IMP3与消化道鳞癌、腺癌、胆管癌、乳腺癌、膀胱癌等多种恶性肿瘤的侵袭和进展关系密切，被认为是影响肿瘤患者预后的一个关键因素[4]。基础研究揭示IMP3通过结合信使RNA，促进目标RNA的翻译，上调胰岛素样生长因子Ⅱ水平，从而引起细胞增殖并抑制细胞凋亡，是促进肿瘤增殖的重要因素[16]。同时IMP3可以通过上调两性霉素诱导基因、白细胞活化黏附因子和基质金属蛋白酶1等的表达，促进肿瘤细胞伪足形成，提高肿瘤细胞的黏附作用，从而增加肿瘤侵袭性[17]。本研究结果显示，IMP3在GEP-NEN中表达阳性率较高，且明显高于瘤旁正常组织，表明IMP3表达的上调可能在GEP-NEN的发生中起重要作用。同时IMP3在不同肿瘤直径、有无淋巴结转移、不同肿瘤分期与分级中的表达差异有统计学意义，并且均成正相关，表明IMP3可能在GEP-NEN的恶性进展中也起到重要作用；本实验IMP3在是否有远处转移中的表达差异无统计学意义，与部分研究不太一致[18]，但发生远处转移组阳性率为100.00%（8/8），高于无远处转移组的78.41%（40/51），考虑可能与实验样本的局限性如病例的选择性偏移等有关，还有待进一步研究。以上结果显示IMP3在GEP-NEN总体阳性率较高，与影响GEP-NEN患者预后的多个主要危险因素呈正相关。

Ki-67是一种与细胞增殖相关的核蛋白，只存在于细胞核内，本身的存在并不依赖于DNA和组蛋白，只表达于细胞周期的G1、S、G2及M期[19]，能较准确的反映细胞的增殖状态[20]，2010年《WHO消化系统肿瘤分类》第4版把Ki-67纳入GEP-NEN的增殖活性分级指标之一。有报导称Ki-67可以评估GEP-NEN转移潜能以及预测患者的生存期[21]。本研究显示Ki-67在肿瘤直径<2 cm、无淋巴结转移、无远处转移、分期较早、级别较低的肿瘤中表达阳性率较低，相反则阳性率均较高，组间差异有统计学意义，同时KI-67高增殖集中在高级别及分期晚的病例，表明Ki-67能较直观地显示肿瘤恶性程度，印证了Ki-67高表达，则肿瘤浸润和转移的能力越强，临床分期越晚[19]。

综上所述，IMP3、Ki-67在GEP-NEN的表达均随着肿瘤恶性程度的增加而上调，可作为判断患者预后的参考因素之一；IMP3可能在GEP-NEN的发生、发展过程中起重要作用，随着对IMP3作用机制的更深入研究，可能为临床治疗GEP-NEN带来新的手段。

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（收稿日期：2016-12-06 本文编辑：许俊琴）