葛陈胶囊对大鼠前列腺增生的防治作用

孙汀，缪云萍，程敏，董文彬，叶小弟，陈爱瑛，郑高利

（1.杭州佛莲生物技术有限公司，浙江 杭州 310000；2.浙江省医学科学院，浙江 杭州 310013）

·实验研究·

葛陈胶囊对大鼠前列腺增生的防治作用

孙汀1，缪云萍2*，程敏2，董文彬2，叶小弟2，陈爱瑛2，郑高利2

（1.杭州佛莲生物技术有限公司，浙江 杭州 310000；2.浙江省医学科学院，浙江 杭州 310013）

目的探讨葛陈胶囊对实验大鼠前列腺增生的防治作用。方法应用尿生殖窦植入诱导雄性SD大鼠前列腺增生模型，随机分为三组：BPH模型组，葛陈胶囊高、低剂量组，另设假手术组。假手术组和BPH模型组灌胃去离子水，葛陈胶囊组按体质量灌胃葛陈胶囊混悬液高剂量1400mg/kg、低剂量700mg/kg，连续给药28天，给药后每周称大鼠体质量，实验结束取大鼠血清，检测血清酸性磷酸酶活性；测定前列腺体质量及体积；光镜下观察前列腺液卵磷脂小体密度和前列腺组织形态，同时结合图像分析软件进行前列腺组织形态计量学分析。结果BPH模型组大鼠前列腺体积、体积指数、体质量和体质量指数显著增加，卵磷脂小体密度明显减少、前列腺组织间质面积比例明显增加（P＜0.01）；葛陈胶囊显著降低大鼠前列腺体质量和体质量指数、体积和体积指数，部分恢复前列腺液卵磷脂小体密度（P＜0.01），并能降低前列腺组织间质面积和比例、间质面积/腺体面积比例（P＜0.05）；各组血清酸性磷酸酶活性无明显变化（P＞0.05）。结论葛陈胶囊对实验大鼠前列腺增生具有防治作用。

葛陈胶囊；尿生殖窦；前列腺增生；形态计量学

良性前列腺增生（Benign Prostatic Hyperlasia，BPH）是老年男性的常见病，随着我国人口的老龄化，患者人数逐年增加，其临床表现为排尿费力、尿线变细、尿频、尿急等，严重影响人们的生活质量。临床主要采用手术和药物等方法，手术治疗有很大的风险性，药物疗效不稳定、有不良反应等，使药物治疗常受到诸多限制。目前BPH的复方制剂日益受到关注，本研究以尿生殖窦植入诱导雄性SD大鼠前列腺增生模型，探讨葛陈胶囊对大鼠前列腺增生的防治作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 清洁级雄性SD大鼠43只，6个月龄，体质量420～470g；清洁级SD孕鼠10只，怀孕19～20天，体质量400～450g，动物由浙江省实验动物中心提供，生产许可证：SCXK（浙）2009-0039，使用许可证：SYXK（浙）2011-0166；在浙江省实验动物中心屏障环境饲养，环境温度（23±2）℃，相对湿度60%～65%，摄食、饮水自由。

1.1.2 试剂与仪器 葛陈胶囊（杭州佛莲生物技术有限公司），临用时葛陈胶囊高剂量用去离子水配成14000mg/100mL，低剂量用去离子水对半稀释；注射用青霉素钠 （华北制药股份有限公司），批号01108101；戊巴比妥钠（西格玛奥德里奇贸易有限公司），批号027K0752；酸性磷酸酶检测试剂盒（上海复星长征医学科学有限公司），批号 P1202021。LIBRORAEL-200电子分析天平（日本imadzu公司）；Motic生物显微图像摄影系统和MoticAdverse3.2形态分析软件（厦门麦克奥迪公司）；HM355S组织切片机（德国MICRO公司）；Mindray BA-88A型半自动生化分析仪（深圳迈瑞公司）。

1.2 方法 前列腺增生大鼠模型的制备及分组。麻醉已孕大鼠，无菌操作取出胎鼠，在体视显微镜下打开腹腔，取固有尿生殖窦，冷藏于4℃含抗生素及小牛血清的无菌RPMI 1640培养液中，3小时内备用。另取雄性SD大鼠43只，随机分为假手术组10只和造模组33只，大鼠麻醉后打开腹腔，造模大鼠在膀胱腹侧的前列腺组织内植入完整尿生殖窦组织2个，假手术组仅用针头探刺前列腺2次。大鼠常规饲养3天，造模组随机分为三组，每组11只，即BPH模型组、葛陈胶囊高、低剂量组。葛陈胶囊高、低剂量组分别按1400、700mg/kg体质量给药，假手术组和BPH模型组灌胃等体积去离子水，灌胃1次/d，连续28天。

1.3 观察指标及检测 观察各组大鼠的活动状况、精神状态、毛色、食饮量、排便、体质量等情况。大鼠末次给药后24小时，麻醉大鼠，眼眶取全血分离血清，按试剂盒说明检测酸性磷酸酶活性。剥离前列腺组织，取前列腺液随机选4个视野，100倍光镜下计数卵磷脂小体个数，取平均值。用滤纸吸干前列腺表面血液后称其重量；参照文献方法[1]，用排水法测量前列腺体积的变化。前列腺重量指数=前列腺重量（mg）/体质量（g），前列腺体积指数=前列腺体积（μL）/体质量（g）。前列腺用甲醛固定，石蜡切片，常规HE染色，镜下观察各组前列腺组织结构，每张切片随机捕获2个视野（每个视野面积1480μm2），用Motic Adverse 3.2图像处理分析系统，画出前列腺腺管轮廓，系统则自动产生此腺管（上皮外周）的面积和周长，计数视野内的腺管数量（在视野周边有部分腺管不完整，则统一作为0.5个腺管计）。计算其它指标：（1）腺管面积比例=腺管面积/视野面积 （1480μm2）×100%；（2）间质面积（μm2）=视野面积（1480μm2）-腺管面积；间质面积比例=间质面积/视野面积 （1480μm2）× 100%；每个腺管平均面积（μm2）=腺管面积/腺管数量。

2 结果

2.1 一般状况 各组大鼠手术后1～2天，精神萎靡，反应迟钝，毛发泛黄且光泽减弱。经过后期给药和常规饲养，假手术组和葛陈胶囊组大鼠精神状况较好，毛色有光泽，行动敏捷，大、小便正常；BPH模型组大鼠反应较迟钝，毛色光泽较暗。各组大鼠体质量持续增长，差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 葛陈胶囊对BPH模型大鼠体质量的影响（s，g）

表1 葛陈胶囊对BPH模型大鼠体质量的影响（s，g）

组别 n 0d 7d 14d 21d 28d假手术组 10 449±16 463±20 499±21 512±23 520±22 BPH模型组葛陈胶囊组高剂量低剂量11448±23481±27506±26518±30527±30 11 11 447±16 447±20 461±20 462±25 488±25 496±30 497±28 502±31 507±26 515±28

2.2 对大鼠血清ACP活性和前列腺液卵磷脂密度的影响 各组大鼠血清ACP活性比较差异无统计学意义（P＞0.05）。与假手术组比较，BPH模型组前列腺液卵磷脂密度明显减少，差异有统计学意义（P＜0.01）；与BPH模型组比较，葛陈胶囊组卵磷脂密度增加，高剂量组尤为明显，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），详见表2。

2.3 大鼠前列腺重量和重量指数、体积和体积指数的比较 与假手术组相比，BPH模型组大鼠的前列腺重量和重量指数、体积和体积指数均显著提高，差异有统计学意义（P＜0.01），说明模型制备成功；经药物干预后，葛陈胶囊能显著降低BPH模型组大鼠前列腺组织的上述指标。见表3。

表2 葛陈胶囊对BPH模型大鼠血清ACP活性和卵磷脂小体密度的影响（s）

表2 葛陈胶囊对BPH模型大鼠血清ACP活性和卵磷脂小体密度的影响（s）

与BPH模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与假手术组比较△△P＜0.01

组别 n 血清ACP（U/L）卵磷脂小体密度（个）假手术组 10 4.36±2.25 10.80±2.35 BPH模型组 11 6.01±1.48 4.87±1.46△△葛陈胶囊组高剂量低剂量11 6.27±4.38 6.64±1.60**11 5.69±3.26 6.20±1.70*

表3 葛陈胶囊对BPH模型大鼠前列腺重量和重量指数、体积和体积指数的影响（s）

表3 葛陈胶囊对BPH模型大鼠前列腺重量和重量指数、体积和体积指数的影响（s）

与BPH模型组比较**P＜0.01；与假手术组比较△△P＜0.01

组别 n 重量（mg） 重量指数（mg/g） 体积（μL） 体积指数（μL/g）假手术组 10 1260±117 2.47±0.29 1154±92 2.26±0.24 BPH模型组 11 1528±202△△2.96±0.46△△1380±165△△2.72±0.38△△葛陈胶囊组高剂量低剂量11 11 1203±115**1245±182**2.43±0.24**2.49±0.39**1089±110**1165±178**2.21±0.22**2.33±0.38**

2.4 对大鼠前列腺形态结构和形态计量学的影响

假手术组腺体排列紧密，间质纤维不明显，腺上皮细胞呈单层立方柱状，部分有较小乳头状内突；BPH模型组出现非常明显的间质增生，腺上皮较多乳头状内突，腺腔形状不规则；葛陈胶囊高剂量组间质增生明显减少，部分腺体腺上皮细胞乳头状内突；葛陈胶囊低剂量组间质增生减少，腺体大小不匀。见图1。由表4显示，各组前列腺腺管的平均面积和每视野的腺管总数未见明显差异，说明前列腺腺管无明显扩张。与假手术组比较，BPH模型组大鼠前列腺组织间质面积比例明显增加，差异有统计学意义（P＜0.01）；与BPH模型组比较，葛陈胶囊组明显降低间质面积和比例及间质面积/腺管面积比例，比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

图1 葛陈胶囊对BPH模型大鼠前列腺形态结构的影响（1A：假手术组；1B：BPH模型组；1C：葛陈胶囊高剂量组；1D：葛陈胶囊低剂量组）（HE×100）

表4 葛陈胶囊对BPH模型大鼠前列腺形态计量学的影响（s）

表4 葛陈胶囊对BPH模型大鼠前列腺形态计量学的影响（s）

与BPH模型组比较*P＜0.05；与假手术组比较△△P＜0.01

组别 n 间质面积（μm2） 间质面积比例（%） 腺管面积（μm2）假手术组 10 568±93 38.4±6.3 912±93 BPH模型组 11 699±108△△47.3±7.3△△781±108△△葛陈胶囊组高剂量低剂量11 11 598±119*615±100*40.4±8.0*41.6±6.8*882±119*865±100*

续表4

3 讨论

良性前列腺增生症（又称前列腺肥大），是引起中老年男性排尿障碍中最为常见的一种慢性进展性疾病。其主要表现在组织学上的前列腺间质和腺体成分的增生[2]。中医认为BPH主要是湿热蕴结、脾肾气虚、气滞血瘀，肺、脾、肾三脏功能失调引起，而补气助气、行瘀散结、通利水道为本病的治疗原则[3]。现代药理研究表明，补肾益气、活血化瘀、除湿清热和通利水道药物能改善人体血液循环，解除粘连，消除组织增生。

葛陈胶囊，由葛根、陈皮 、黄芩、枳 子、牡蛎、滑石组成。葛根扩张血管和改善微循环；陈皮理气健脾、燥湿化痰[4]；黄芩益气健脾、利尿[5]，临床有不少报道将黄芩作为主药入复方治疗前列腺增生，临床疗效良好[6-7]；枳 子味甘性平，降压利尿、镇痛镇静[8]；牡蛎软坚散结、化瘀散结[9]、滑石清热利湿。葛陈胶囊具有行瘀散结，清热利湿，通利小便的功效，通过调节整体防治和改善前列腺增生，毒副作用小。

人类BPH主要表现为前列腺间质增生，包括平滑肌、结缔组织及胶原纤维等基质主要组成成分的良性扩张，同时还伴随着腺腔比例的下降[10]。申青等[11]通过对未分化胎鼠尿生殖窦植入诱导大鼠BPH发生，应用形态计量学及免疫组化染色分析前列腺其组织成分变化，结果显示该模型与人类BPH的病理特点相似度较高。

本文实验研究通过复制生殖窦植入诱导大鼠BPH模型，结果表明各组体质量无明显变化。与假手术组比较，前列腺增生模型组大鼠前列腺体质量和体质量指数、体积和体积指数显著增加，卵磷脂小体密度明显减少，镜下观察和图像分析软件检测显示前列腺组织间质面积比例明显增加，腺管增生不明显，模型以间质增生为主。模型大鼠经药物干预后，葛陈胶囊（1400mg/kg、700mg/kg）可显著降低模型大鼠前列腺体质量和体质量指数、体积和体积指数，卵磷脂小体密度部分恢复，明显降低前列腺间质的面积和比例及间质面积/腺管面积比例，但对大鼠前列腺腺管的平均面积和每视野的腺管总数无明显影响。

前列腺增生以前列腺组织体积增大为关键特征，前列腺体质量和体积直接反应前列腺增生程度，是最客观的指标。本文实验研究显示葛陈胶囊对尿生殖窦植入致大鼠前列腺增生模型的体质量、体积、间质增生有较好的抑制作用。综上所述，葛陈胶囊对前列腺增生大鼠前列腺具有一定的防治作用，为葛陈胶囊治疗人类前列腺增生提供了理论依据。

[1] 郑高利，张信岳，方晓林，等.葛根异黄酮对去卵巢大鼠骨矿密度和骨强度的影响.中草药，2001，32（5）:422

[2] 马骏，黄受方，张长淮，等.成人正常前列腺的解剖学和组织学观察.解剖学杂志，2000，23（2）:156

[3] 刘绍 ，曹珊，苗明三.中医药治疗前列腺增生的药理作用分析.中医学报，2011，26（162）:1326

[4] 吴惠君，欧金龙，池晓玲，等.陈皮药理作用研究概述.实用中医内科杂志，2013，27（9）：91

[5] 汪浩，舒跃民，郑海文，等.良性前列腺增生症细胞因子水平与中药干预的研究.中国中药杂志，2010，35（6）:786

[6] 俘志刚，王丽新.中医治疗前列腺增生的临床疗效分析.中国医药指南，2014，12（21）:270

[7] 王飞.补肾逐瘀汤联合前列康片治疗良性前列腺增生症38例.中医研究，2013，26（71）:21

[8] Lukas SE，Penetar D，Berko J，et al.An extract of the Chinese herbalrootKudzu reducesalcoholdrinking by Heavy Drinkers in a naturalistic setting.Alcoholism-Clinical and Experimental Research，2005，29（5）：756

[9] 郝华光.补肾化瘀消瘕汤治疗良性前列腺增生症疗效观察.新医学导刊，2008，7（4）:129

[10]Chagas MA，Babinski MA，Costa WS，et a1.Stromal and acinar components of the transition zone in normal and hyperplastic human prostate.BJU Int，2002，89（7）:699

[11]申青，朱着，朱柳，等.尿生殖窦植入致大鼠良性前列腺增生的组织形态学研究.中华男科学杂志，2012，18（8）:703

*为通讯作者，E-mail:miaoyp70@163.com