一起蛋鸡禽白血病的荧光RT-PCR诊断

凌洪权 黎朝燕 陈忠琼 史小文 欧阳吴莉 董春霞

（①重庆市动物疫病预防控制中心 401120 ②重庆市璧山区来凤畜牧兽医站）

一起蛋鸡禽白血病的荧光RT-PCR诊断

凌洪权①黎朝燕②陈忠琼①史小文①欧阳吴莉①董春霞①

（①重庆市动物疫病预防控制中心 401120 ②重庆市璧山区来凤畜牧兽医站）

2017年1月，重庆市动物防控中心实验室收到某蛋鸡场送来的10份蛋鸡肝脏、脾脏等病料，根据蛋鸡的临床症状和病理剖解变化，采用荧光RT-PCR方法进行了禽白血病的检测。结果表明，10份样品全为禽白血病病毒阳性。

蛋鸡 禽白血病 荧光RT-PCR 诊断

禽白血病是由反转录病毒科C型反转录病毒属禽白血病/肉瘤病毒群病毒(AL/SV)所引起的禽类多种肿瘤性疾病的总称，其感染率高，发病率低[1]。ALV主要引起淋巴细胞性白血病、成髓细胞白血病、成红细胞性白血病和髓细胞样白血病。该病几乎在实行规模化养殖的国家都有发生，造成的经济损失极为严重，是危害养鸡业的主要疾病之一[2,3]。

1 材料与方法

1.1 样品 10份蛋鸡肝脏、脾脏等病料。取约1.0g病料于组织研磨器中研磨，磨碎后加入1.0ml生理盐水继续研磨成匀浆，倒入2.0ml离心管，8000r/min离心5min，取上清液200ul于1.5ml离心管中备用。

1.2 试剂 禽白血病病毒检测试剂盒(实时荧光PCR法)，购自深圳真瑞生物科技有限公司；核酸提取试剂盒(EXRNA/DNA病毒），购自苏州天隆生物科技有限公司。

1.3 方法 按照核酸提取试剂盒说明书提取禽白血病病毒核酸RNA；按照禽白血病病毒检测试剂盒说明书配制RT-PCR反应体系。反应条件如下：42℃10min ，95℃3min;95℃5s ，55℃40s，5个循环进行预扩增；95℃5s，55℃40s，40个循环，在此第二阶段结束时采集荧光信号。

2 结果

按照禽白血病病毒检测试剂盒(实时荧光PCR法)说明书的判断标准进行结果判断。检测的10份样品结果全为禽白血病病毒核酸阳性(见附图)。

3 讨论

禽白血病病毒根据病毒中和反应形式、宿主范围、囊膜特性及其他标准将其划分为A-J10个亚型。目前存在于我国禽白血病病毒感染的有A、B、J亚型，其中主要以J亚型感染为主。该病的传播方式有两种：经卵由母鸡传给子代鸡的垂直传播和鸡与鸡之间的直接或间接接触的水平传播[4]。垂直传播途径则可通过种群净化的方式来解决。其主要原则是阻断病毒从亲代到子代的垂直传播。禽白血病病毒可通过粪便污染场地、饲料、饮水及其他用具进行水平传播，搞好鸡群的环境卫生、加强鸡场的日常管理，是防止禽白血病的中心环节。

近年来，我国对活禽市场AL的防控没有得到足够的重视。国内外学者对ALV-J的研究比较深入(分子病原学调查为主)，但野生鸟类中ALV分子病原学调查的数据很少[5]。已有文献报道我国东北地区死亡的野生鸟类中存在ALV-J[6]。一旦野生鸟类感染了ALV后到鸡场去觅食，将病毒传播到鸡场，从而引起鸡的发病，因此杜绝野生鸟类到鸡场觅食是减少ALV感染发病的措施之一。

[1] 乔彩霞, 关云涛, 陈洪岩. 禽白血病研究进展[J]. 动物医学进展, 2003, 24(6)∶18-21.

[2] B.W, 卡尔尼克. 高福等译. 禽病学(第10版)[M]. 北京∶ 中国农业出版社, 1999∶ 529.

[3] 辛朝安. 禽病学[M]. 北京∶ 中国农业出版社, 2003∶ 114.

[4] 蔡丽娅, 秦爱建. 我国禽白血病病毒生物学特点及其控制[J]. 中国兽药杂志. 2009, 43(11)∶ 46-48.

[5] 杨树青, 贠鲁祥, 王丽媛等. 2015～2016年江苏盐城地区市场活禽与野生鸟类中J亚型禽白血病分子病原学调查[J]. 中国预防兽医学报, 2016, 38(9)∶ 748-750.

[6] 李德龙, 高玉龙, 曾祥伟等. 东北地区野生鸟类J 亚群禽白血病分子流行病学调查及部分基因组序列分析[J]. 畜牧兽医学报, 2013, 44(3)∶ 488-494.

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1007-1733(2017)06-0012-01

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