外周血自然杀伤T细胞表达水平与原因不明习惯性流产的相关性研究

欧阳丽红,单士刚

(1.湖北省咸宁市中心医院 湖北科技学院附属第一医院 生殖中心,湖北 咸宁,437100;2.湖北科技学院 基础医学院,湖北 咸宁,437100)

外周血自然杀伤T细胞表达水平与原因不明习惯性流产的相关性研究

欧阳丽红1,单士刚2

(1.湖北省咸宁市中心医院 湖北科技学院附属第一医院 生殖中心,湖北 咸宁,437100;2.湖北科技学院 基础医学院,湖北 咸宁,437100)

自然杀伤T细胞;原因不明习惯性流产;外周血

有文献[1]报道，自然杀伤T细胞参与了原因不明习惯性流产(URSA)过程。自然杀伤T细胞(NKT)具有同时杀伤T细胞性质的T细胞及细胞的能力，而CD56+、CD16+、CD3+则是检测自然杀伤T细胞的标志。自然杀伤T细胞具有细胞毒性作用和免疫调节作用[2]。为进一步分析自然杀伤T细胞与不明习惯性流产的关系，本研究对100例原因不明习惯性流产患者外周血中NKT细胞的表达水平进行了研究，报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2014年11月—2015年10月确诊为原因不明习惯性流产者100例为URSA组，患者平均年龄(35.1±3.2)岁，所有患者均符合下列纳入标准:① 丈夫精液常规无异常情况;②抗自身抗体检测结果为阴性;③ 无生殖道感染;④ 内分泌激素测试结果为正常;⑤ 夫妻双方染色体核型正常;⑥ 连续3次或以上的自然流产。另选取同期无URSA正常体检女性60例为正常组。URSA组进一步分为URSA难免流产组、URSA未孕组各50例，正常组进一步分为正常已生育组35例、正常妊娠组25例，平均年龄(34.1±2.2)岁，正常已生育组均正常生育过，其中正常生育1胎者27例，正常生育2胎者23例。

1.2 方法

本次研究所使用的仪器与溶血素均为美国贝克曼公司生产的 EPICS XL及 Optilyse No-wash lying solution;抗体组合为CD3-FITC/(CD16+CD56)-PE及相应的同型对照抗体;研究所使用的试剂同样为贝克曼公司生产。

清晨空腹取患者静脉血2 mL行枸椽酸钠抗凝处理，然后在样品反应罐中加入相应的荧光抗体10 μL以及100 μL枸椽酸钠抗凝全血混匀;然后选取类型相同抗体作为阴性对照，行20 min避光孵育。加入2 mL PBS,以16 cm为半径，以1 500 r/min行5 min离心处理，洗涤2次，去上清液;在完成上述操作过后加入500 μL PBS配成1.0×107/L的细胞悬液，待上机。

2 结 果

URSA未孕组、URSA难免流产组、正常已生育组、正常妊娠组外周血CD56+、CD16+、CD3+自然杀伤T细胞百分率依次为(2.5±1.4)%、(4.2±2.8)%、(5.0±2.8)%、(13.9±2.3)%,差异有统计学意义(P<0.05)。在外周血NKT细胞百分率比较,URSA难免流产组患者是URSA未孕组的2倍，正常妊娠组是正常已生育组的3倍。

3 讨 论

URSA是目前临床妇产科常见的疾病之一，其发生率约占妊娠总数的1%～2%[3-4]。近年来，国际上已将URSA诊断标准中自然流产次数降低至2次或2次以上，这使得更多的患者诊断为URSA,亦间接促使URSA发生率进一步提升[5-6]。URSA可以给患者身心健康、家庭团结带来巨大影响，由于其发生机制至今尚未完全明确，亦无特效治疗方案，因此探索URSA相关研究成为妇产科学研究的重要方向之一。NKT细胞就是指CD3+CD16+CD56+细胞，其中CD3+是T淋

巴细胞的标志物,CD16+CD56+是NK细胞的标志物。既往研究认为NKT细胞与多种疾病有着十分密切的关系。邹原方等[7-8]报道，系统性红斑狼疮患者体内CD3+CD56+NKT细胞数量下降和功能缺陷，这可能与系统性红斑狼疮的发生密切相关[9-10]。

通常情况下，胚胎抗原处于耐受状态，一旦免疫调节出现了异常，胚胎就有可能会受到免疫排斥作用，进而引发习惯性流产的发生。国外研究资料[11-12]显示，自然杀伤T细胞水平的下降可能与Th1介导自身免疫疾病有关;此外，包括系统性红斑狼疮及再生障碍性贫血等疾病也有可能会造成NKT细胞水平下降[13-14]。

本研究结果显示,URSA未孕组患者外周血中的NKT细胞表达水平与正常已生育妇女相比明显更低，作者认为自然杀伤T细胞对正常妊娠的维持有一定的促进作用[15];其次，正常妊娠组和正常已生育组自然杀伤T细胞表达水平并无显著差异，这就从侧面提示原因不明习惯性流产患者先天或后天自然杀伤T细胞表达异常，因此作者认为自然杀伤T细胞与原因不明习惯性流产的发生存在着相对的必然性关系。另一方面，由于自然杀伤T细胞具有分泌Th2以及Th1型细胞因子的作用，所以有一定的可能性会对其细胞平衡产生影响，由于原因不明习惯性流产同Th1介导的自身免疫疾病的免疫基础具有较高的相似性[16];相关资料[17-18]报道显示，小鼠试验中与本次研究的结论相似，故认为怀孕期间自然杀伤T细胞的数量减少，能够导致Th1细胞因子介导的细胞免疫增强，最终造成原因不明习惯性流产的发生。

与正常健康的生育妇女相比较，正常妊娠自然杀伤T细胞表达相对较高，与习惯性流产患者相比则显著更高(P<0.05),这就提示在怀孕后，自然杀伤T细胞会有较大幅度的提高，但提高的幅度并不足以发挥免疫耐受的作用。

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R 714.21

A

1672-2353(2017)17-223-02

10.7619/jcmp.201717084

2017-03-12

湖北省卫计生委青年人才项目(WJ2015Q034)

单士刚