混合染色法在骨髓细胞形态学检验中的应用分析

张红祥 张夏玮

（河南省许昌市中心医院 许昌461000）

混合染色法在骨髓细胞形态学检验中的应用分析

张红祥 张夏玮

（河南省许昌市中心医院 许昌461000）

目的：分析混合染色法在骨髓细胞形态学检验中的应用效果。方法：选取2015年3月～2017年3月在我院门诊检验科进行骨髓细胞学检验的100例患者作为研究对象，对其临床资料进行回顾性分析。所有标本均为新鲜采集的骨髓液，由检验科专业人员制备为涂片备用，分别采用姫氏染色法、瑞氏染色法和混合染色法对标本进行处理，对三种染色法的标本染色效果进行观察与分析。 结果：混合染色法 5、10、20、40 min 的染色评分分别为（3.9±0.3）分、（6.9±0.5）分、（9.3±0.2）分和（8.3±0.2）分，均明显高于其他两种染色方法的染色评分，差异有统计学意义，P＜0.05。结论：在骨髓细胞形态学检验中采用混合染色法的染色更清晰，对比效果更为明显，有助于形态幼稚细胞的鉴别诊断。

骨髓细胞形态学；混合染色法；姫氏染色法；瑞氏染色法；染色评分

骨髓细胞形态学检查是临床上用于各类血液疾病诊断的重要方法之一，可以提供骨髓细胞形态的具体特征[1]。为了提高临床诊断的准确率，检验人员不但需要掌握细胞异常和正常状态下的形态特征，还应当尽可能确保涂片染色效果理想，以提高骨髓细胞形态学检验的诊断效果[2～3]。本研究选取2015年3月～2017年3月在我院门诊检验科进行骨髓细胞学检验的100例患者作为研究对象，分析了混合染色法对骨髓细胞形态学检验结果的影响。现报告如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年3月～2017年3月在我院门诊检验科进行骨髓细胞学检验的100例患者作为研究对象，对其临床资料进行回顾性分析。其中男性68例，女性32例；年龄15～80周岁，平均年龄（46.3±2.5）岁。

1.2 检验方法 所有标本均为新鲜采集的骨髓液，由检验科专业人员制备成涂片备用。分别采用姫氏染色法、瑞氏染色法和混合染色法对标本进行处理。姫氏染色法和瑞氏染色法采用原液进行检验，混合染色法则将姫氏染色原液与瑞氏染色原液按照10∶1的比例进行配制。三种染色法均需要覆盖整个标本，固定1 min后对标本染色情况进行观察。

1.3 观察指标 观察分析姫氏染色法、瑞氏染色法和混合染色法对标本的染色效果。染色效果判定依据为：以0～10分为评分值域，根据检验人员可见染色效果进行评分；0分：染色效果差，无法准确判别细胞质，细胞轮廓相对模糊；10分：染色效果佳，细胞结构明显且清晰，细胞浆与细胞核对比明显。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件进行数据分析，计数资料采用χ2检验，计量资料以表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

混合染色法下5、10、20和40 min的染色评分分别为（3.9±0.3）分、（6.9±0.5）分、（9.3±0.2）分和（8.3±0.2）分，均明显高于其他两种染色方法的评分结果，差异有统计学意义，P＜0.05。见表1。

表1 三种染色法的染色评分结果比较

染色方法 5 min 10 min 20 min 40 min姫氏染色法瑞氏染色法混合染色法1.6±0.3 1.7±0.2 3.9±0.3 3.6±0.5 3.8±0.3 6.9±0.5 6.9±0.3 7.3±0.5 9.3±0.2 3.2±0.5 3.1±0.3 8.3±0.2

3 讨论

既往大量报道中显示，骨髓液涂片染色效果会对检验人员观察骨髓细胞的形态产生直接影响，可能会使骨髓液细胞结构发生改变，进而给检验人员的临床鉴别与诊断带来一定的难度。已有报道中指出[4～5]，骨髓细胞染色结果会受到大量因素的影响，包括染色成熟度、染色时间长短和涂片制备操作等。特别是染色液在使用前的配制浓度和使用情况将直接影响骨髓细胞形态学的检查结果。目前，临床上常用的染色液包括姫氏染色液和瑞氏染色液两种，姫氏染色液由美蓝、伊红组成，对细胞核有良好的染色效果，但细胞质染色效果不佳，若染色过浅或过深则会导致细胞核辨认不显著；瑞氏染色液则由亚甲蓝、天青、伊红构成，对细胞质染色效果好，对细胞核染色效果不佳。而混合染色法将姫氏染色原液与瑞氏染色原液按照10∶1的比例进行配制，综合了姫氏染色液和瑞氏染色液这两种染色液的优势，10倍的姫氏染色原液能够使细胞核着色达到良好状态，显示胞浆嗜碱性水平，色泽纯正，对嗜天青、嗜酸性和嗜碱性颗粒的着色效果理想，而配合1倍的瑞氏染色原液能够清晰地显示出细胞质的结构，使细胞质结构的识别更加明显。只要遵循低浓度、长时间的基本原则，就能够使染色持续时间更长，细胞染色更鲜明，细胞核与细胞质的层次划分也会更加明显。

本研究中比较了姫氏染色法、瑞氏染色法和混合染色法对骨髓液标本染色效果的差异，结果显示混合染色法5、10、20和40 min的染色评分分别为（3.9±0.3）分、（6.9±0.5）分、（9.3±0.2）分和（8.3±0.2）分，均明显高于其他两种染色方法的评分结果，差异有统计学意义，P＜0.05。这说明将姫氏染色原液与瑞氏染色原液按照10∶1的比例配制后用于骨髓液标本的处理，使细胞形态学有良好的观察效果，可以为骨髓系相关病变的临床诊断提供可靠依据。同时，对混合染色法不同时间点的染色评分结果进行对比可见，5 min时混合染色法的染色效果不甚理想，20 min时染色效果达到最佳状态，40 min时则有所下降。根据这一数据，临床检验中可以将20 min作为混合染色的最佳时间。将混合染色法用于对骨髓液标本的处理中，能够使骨髓细胞得到良好的染色，染色对比效果强，细胞核多呈紫红色状态，细胞浆则呈蓝色状态，两者对比明显，并且整体染色层次突出，更便于检验人员对细胞结构进行深入观察，并作为检验诊断依据。

综上所述，在骨髓细胞形态学检验中采用混合染色法的染色更清晰，对比效果更为明显，有助于形态幼稚细胞的鉴别诊断。

[1]蒋朝晖,邱先艳,余红岚.骨髓细胞髓过氧化物酶染色质控体系的建立[J].国际检验医学杂志,2016,37(15):2155-2157

[2]高秀敏,张贵权,廖奕.普鲁士兰染色在骨髓细胞内外铁检查中的应用[J].临床合理用药杂志,2014,7(19):14

[3]兰淼,巩丽,李艳红,等.不同脱钙液对骨髓组织切片HE染色效果的对比研究[J].陕西医学杂志,2010,39(10):1299-1300

[4]韩天雨,卜淑敏.去卵巢大鼠血清和骨髓细胞碱性磷酸酶水平变化的动态观察[J].中国实验动物学报,2014,22(4):37-40

[5]张雪,李蓓,陈振萍,等.儿童急性淋巴细胞白血病骨髓细胞形态学检查多中心综合比较及评价[J].检验医学,2014,29(8):843-847

R446.8

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2017.09.062

2017-05-29）