FQ-PCR法检测HBV-DNA与HBVM关系的探讨

徐 庆 邹 莉

（谷城县人民医院，湖北 襄阳 441700）

FQ-PCR法检测HBV-DNA与HBVM关系的探讨

徐 庆 邹 莉

（谷城县人民医院，湖北 襄阳 441700）

目的探讨FQ-PCR法检测HBV-DNA与HBV血清标志物（HBVM）的相关性。方法对587例临床血清标本采用FQ-PCR法进行HBV-DNA检测，同时采用ELISA法进行乙肝免疫学对比检测。结果血清HBV-DNA水平与HBV血清标志物的表现模式相关。以含有HBeAg（+）的（HBsAg（+）/HBeAg（+）/HBcAg（+））模式和（HBsAg（+）/HBeAg（+））模式的HBV-DNA阳性检出率最高，分别为91.35%（169/183）和100%（17/17），均显著高于其他HBVM模式（P＜0.01）。结论HBeAg和HBV-DNA有明显的相关性，定量检测HBV-DNA能真实反映HBV复制情况，为乙型肝炎的疗效评价提供实验室依据。

乙型肝炎病毒；FQ-PCR；血清标志物

目前，检测HBV血清标志物（HBVM）及HBV-DNA是临床诊断乙型肝炎病毒感染最常见的两种方法。HBV-DNA一般先于血清标志物出现，且其就方法而言更为灵敏，因此HBV-DNA检测在早期乙肝感染和抗病毒药物的疗效观察、病情预测等方面具有重要的临床价值。但老式的定性PCR具有易污染、假阳性高、试剂制品致癌等缺点，荧光定量PCR（FQ-PCR）正是克服了这些缺点现得到临床的广泛应用。本文采用587例临床标本同时进行FQ-PCR和ELISA法检测，将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源：选择2013年10月至2014年12月我院门诊乙肝5项查出的HBV不同感染模式者的血清587例，其中男性305例，女性282例，年龄6～79岁。采用无菌负压管抽取空腹静脉血5 mL，2 h内送检。

1.2 方法

1.2.1 HBVM测定：采用ELISA法，试剂盒由中山生物工程有限公司提供；仪器为AP-960全自动酶联免疫分析仪。

1.2.2 HBV-DNA测定：采用FQ-PCR法，试剂盒由达安基因诊断中心提供，仪器为ABI PRISM 7000全自动荧光定量PCR仪，严格按试剂说明书操作，设立阳性、阴性和临界值对照以及4个标准梯度参控品，实际临床可信灵敏度为1×10E3copies/mL，检测HBV-DNA含量范围在10E3～10E8copies/mL。

1.2.3 统计学方法：定量结果采用求算对数平均值的方法来计算HBVDNA平均拷贝数，以均数±标准差（x-±s）表示，遇有阴性结果（以＜1×10E3copies/mL为阴性结果），不参加平均值的统计。数据分析用t检验和χ2检验。

2 结 果

FQ-PCR法检测HBV-DNA水平与ELISA法检测HBVM阳性模式的关系见表1。由表1可见，只要是HBVM阳性的患者，其体内均存在不同程度的病毒复制。在HBeAg（+）的组1（大三阳）模式和组3模式中的HBV-DNA阳性率、HBV-DNA拷贝数对数值均显著高于其他各组，差异有显著性（P＜0.01）；组2（小三阳）和组4的HBV-DNA拷贝数对数值与组5和组6相比，差异无显著性（P＞0.05），但HBVDNA阳性率与组5和组6的差异均有显著性（P＜0.01）；组5和组6为具有一定免疫力的检测者，其HBV-DNA拷贝数对数值的差异均无显著性（P＞0.05）；而完全具有免疫力的组7检测者其HBV-DNA阳性率为零。

3 讨 论

本次检测结果显示，在有HBeAg（+）的组1（大三阳）模式和组3模式的HBV-DNA阳性检出率较高，分别为91.35%和100%，这与其他模式无论是在HBV-DNA阳性检出率还是其对数平均值上的差异均有显著性（P＜0.01），这与有关报道相符[1-2]，进一步证实这两种方法在反映HBV-DNA复制方面具有良好的一致性，有利于HBV感染期的诊断；而HBeAg为阴性的组2和组4模式中HBV-DNA的阳性率相对来说比较低，依次为41.01%和42.42%，这表明上面两种情况患者体内HBV复制程度依次递减[1]。另外，HBeAg阴性的患者仍然有半数可检出HBV-DNA[3]，因此判断HBV复制情况就特异性和敏感性而言，FQPCR法检测HBV-DNA要优于ELISA法检测的HBeAg[4]。

表1 血清HBV-DNA含量与HBVM的关系

另外，从组5和组6中可看出，在曾经感染并有免疫力的血清标本中，仍存在HBV-DNA的低水平复制，与有关报道一致[5]。这表示HBsAg已转阴，但血清中仍存在HBsAb、HBeAb或HBcAb的患者，其体内依然有HBV-DNA的低水平复制，有复制即不能认为其完全无传染性，进一步HBV-DNA的检测很有必要。

总之，HBV感染的分子生物学标志HBV-DNA相比血清学的HBVM能更好地反映患者体内病毒的复制状况，在临床上评价乙型肝炎的传染性及用药疗效等方面具有重要价值。

[1]杨连成.乙肝五项定性与HBV-DNA结果相关探讨[J].安徽卫生职业技术学院学报,2014,13(2):95-96.

[2]张耀华,张红旗.HBV感染者HBVM与HBV-DNA定量的关系[J].江苏医药,2014,40(16):1626-1627.

[3]褚小慧.荧光定量PCR检测HBV-DNA与ELISA检测乙肝病毒血清标志物结果的关系探析[J].现代诊断与治疗,2013,24(16):3794-3795.

[4]黄静.荧光定量PCR检测HBV-DNA与ELISA法乙肝免疫学检测的探讨[J].中国医药科学,2013,3(6):110-111.

[5]刘宇静,吴学军.荧光定量PCR检测HBN-DNA与化学发光酶免疫检测乙肝五项的相关性调查[J].标记免疫分析与临床,2014,21(2): 197-199.

R512.6+2

B

1671-8194（2017）04-0031-02