NBF—926的生物测定及对大白菜根肿病的防效试验

龙同+曹春霞+张光阳+黄大野+杨妮娜+胡洪涛+杨自文+杨再辉

摘要：十字花科蔬菜根肿病休眠孢子在1×103～1×107个孢子/mL浓度范围内均能侵染大白菜，随着休眠孢子浓度的不断增加，各处理大白菜感病率逐渐增高。1×107个孢子/mL浓度处理感病率最高，达100%。采用1×107芸薹根肿菌休眠孢子感染盆栽大白菜，测定几种不同药剂对根肿病的防治效果，结果表明，生防链霉菌NBF-926防治根肿病的盆栽试验的效果及植株鲜重均最高，显著高于其他几种药剂。

关键词：芸薹根肿菌；休眠孢子；链霉菌；生物测定；根肿病；生物防治；

中图分类号：TQ450.2+6；S476 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）23-6134-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.23.031

Abstract：The resting spores of cruciferous vegetables clubroot in the range of 1×107～1×103 can infect cabbage. Along with the increasing concentration of dormant spores， the Chinese cabbage ID（incidence of disease） of each treatment increased gradually. The ID of 1×107 concentration was the highest， up to 100%. Using 1×107 dormant spores of P. Brassicae clubroot to infect potted cabbage， the control efficacy of several different fungicides against clubroot were tested， the results showed that streptomyces NBF-926 had the highest biological control and plant fresh weight， significantly higher than the other agents.

Key words： Plasmodiophora brassicae； dormant spores； Streptomyces； bioassay； clubroot； biological control

十字花科根腫病plasmodiophoa brassicae Woron是一种世界性土传病害，其致病菌目前尚无法人工培养，分类地位还存在争议（有学者将其归于鞭毛菌，也有学者将其归于粘菌），休眠孢子在土壤中可存活10年以上[1-3]。近年，根肿病在湖北、云南、四川、贵州、浙江、福建等地高山十字花科蔬菜种植区发生严重，已成为制约中国高山大白菜、甘蓝、萝卜反季节生产的主要因素之一，其中尤以大白菜受害最重，严重地块甚至绝收，每公顷损失 45 000元以上[4-7]。

防治根肿病的有效方法主要是撒石灰调节土壤pH、轮作、种植抗病品种等，但由于存在土壤板结、经济效益差、不耐储运等缺点，上述措施均未大面积推广。常规杀菌剂如多菌灵、福美双、代森锰锌等防效不明显，防效最好的是日本石原株式会社50%氟啶胺SC与10%氰霜唑SC组合，防效可达85%左右，但由于其抑制种子萌发及使用成本高昂（每公顷近6 000元）等原因，也未得到大面积推广应用[8-10]。目前生物防治根肿病已成为研究热点[9，11-17]。

本研究对生物农药NBF-926悬浮剂进行了生物测定，并对其防治十字花科蔬菜根肿病的效果进行了盆栽试验，以期明确其初步的防效。

1 材料与方法

1.1 供试大白菜品种

大白菜品种为山地王（中央种苗株式会社）。

1.2 供试药剂

NBF-926悬浮剂（1亿cfu/g链霉菌悬浮剂，湖北省生物农药工程中心），是一种链霉菌生物制剂，链霉菌菌种包括尖孢链霉菌（Streptomyces cuspidosporus）WS-29246和/或疮痂链霉菌（Streptomyces scabiei）WS-24926，已申请国家发明专利；氟啶胺悬浮剂+氰霜唑（日本石原株式会社）；海岛素（海南正业）；肿腐萎（50%多·福可湿性粉剂，山东荣邦化工有限公司）；1 000亿cfu/g枯草芽胞杆菌WP（湖北康欣农用药业有限公司）；解淀粉芽孢杆菌（由武汉生绿科技有限公司提供）。

1.3 休眠孢子悬浮液制备

休眠孢子悬浮液制备参考黄云[13]的方法。根肿病原为芸薹根肿菌4号生理小种。称取30 g大白菜根肿组织洗净，置于24 ℃条件下腐烂5 d，切碎后加入150 mL无菌水，用组织搅碎机搅成匀浆，400目纱布过滤；滤液移入150 mL离心管中，500 r/min离心5 min；取上清液及上层灰色沉淀，加无菌水悬浮，3 100 r/min离心15 min；沉淀用15 mL 50%蔗糖溶液悬浮，混匀，3 100 r/min离心10 min；上清液用移液枪移入离心管中，加90 mL无菌水，3 100 r/min离心10 min，留沉淀，此步骤重复2～3次；将沉淀溶于一定量的无菌水中，制成浓度为1×109个孢子/mL的孢子悬浮液，并保存于4℃冰箱备用。

1.4 休眠孢子悬浮液致病力测定

将上述休眠孢子母液分别制备成不同浓度梯度的孢子悬浮液1×103、1×104、1×105、1×106、1×107个孢子/mL。采用花钵（12 cm×8 cm×10 cm）移栽健康大白菜，每钵装灭菌土1 kg。每钵移栽1株大白菜（2片真叶苗龄），移栽当天每株接入不同浓度处理大白菜根肿病休眠孢子2 mL。每处理10钵，重复3次。设清水对照。种植50 d后，拔出白菜根洗净，察看根系的根肿病，计算感病率。

1.5 NBF-926防治大白菜根肿病盆栽试验

采用同样大小花钵，每钵装灭菌土1 kg，移栽1株2叶龄大白菜苗，移栽当天每株接入大白菜根肿病休眠孢子2 mL（1×107个孢子/mL）。根据各供试药剂推荐用量及预备试验结果，试验设A稀释100倍、C稀释1 000倍、D稀释800倍，E、F稀释100倍试验处理，B处理中氟啶胺稀释1 000倍，氰霜唑稀释2 000倍。移栽后1 d灌根1次，每处理10钵，每钵100 mL，定植10 d后再灌根1次，每钵100 mL；药剂B第一次采用氟啶胺灌根，第二次采用氰霜唑灌根。各处理共灌根2次，重复3次。设清水对照。

1.6 分级标准

0级，无病；1级，根肿只附着在侧根上，数量占根系全部的1%～25%；2级，主根上有根肿附着，侧根上根肿数量占根系全部26%～49%；3级，主根上有根肿附着，根肿数量占根系的50%～75%；4级，主根上有根肿附着，根肿数量占根系的75%以上。

1.7 数据分析

采用Excel 2003和SPSS 11.5软件。

2 结果与分析

2.1 不同浓度休眠孢子悬浮液对根肿病致病力

芸薹根肿菌4号生理小种致病力最强，本研究采用该生理小种进行试验。十字花科蔬菜根肿病休眠孢子在土壤中存活时间长，活力强，是十字花科作物初次侵染源。由表1可知，不同浓度的根肿病休眠孢子均能侵染大白菜植株，但不同浓度处理之间差异明显，随着休眠孢子浓度的增加，各处理大白菜感病率呈正比例增高。1×107个孢子/mL浓度处理感病率最高，达100%，极显著高于1×105、1×104、1×103个孢子/mL浓度处理，与1×106个孢子/mL浓度处理差异不显著。

2.2 不同药剂防治根肿病的盆栽试验结果

生物农药NBF-926是国家生物农药工程技术研究中心从10万株放线菌及真菌微生物资源中筛选获得的一种十字花科根肿病高效制剂，已申请国家知识产权保护。采用盆栽试验，以枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、氟啶胺等为对照，测定NBF-926悬浮剂对十字花科根肿病的抑菌活性。

盆栽试验结果，NBF-926悬浮剂防效最高，达到95.1%，极显著高于其他处理；其株重最高，为165.4 g，显著高于海岛素、肿腐姜、枯草芽胞杆菌、解淀粉芽胞杆菌和清水对照处理（表2）。NBF-926处理的大白菜根系完好，极少出现根肿，其他处理均有明显的根肿形成（图1）。

3 小结与讨论

根肿病休眠孢子在1×103～1×107个孢子/mL浓度范围内均能侵染大白菜，随着休眠孢子浓度的增加，各处理的大白菜感病率逐渐增高。1×107个孢子/mL浓度处理感病率最高，达100%。可用于下一步不同药剂防治根肿病的盆栽试验。

生物药剂NBF-926防治大白菜根肿病的盆栽试验防效及植株鲜重均最高，其盆栽试验防效达到95.1%，显著高于日本化学农药氟啶胺与氰霜唑组合和其他药剂，值得进一步研究开发。

不同药剂生物测定盆栽试验中大白菜植株重量过轻，最高株重200 g左右，与田间种植的大白菜植株重量达2～3 kg差异很大，今后宜增加钵体积和营养土质量。

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