雌二醇浓度测定方法研究进展

黄泓轲+罗健玮

摘 要 雌二醇在人体内起着维持第二性征和调控副性器官的重要功能，其测定对多种疾病诊断具有重要意义。本文就现有测定雌二醇的各种方法进行分析比较优缺点，对雌二醇测定方法前景进行展望。

关键词 雌二醇 测定方法 色谱法

中图分类号：O657.7 文献标识码：A DOI：10.16400/j.cnki.kjdkx.2017.01.014

雌二醇（E2）是育龄妇女体内卵巢或者黄体分泌的雌激素，由卵巢或前列腺分泌后，经血流和组织液转运到靶组织（子宫、输卵管、阴道、垂体等），能与血浆蛋白高度结合，在雌激素反应组织内能与特异性受体蛋白结合形成“活化”的复合体，维持第二性征和调控副性器官的功能，其主要药理作用为：（1）促使子宫内膜增生；（2）增强子宫平滑肌的收缩；（3）促使乳腺导管发育增生，但达到较大剂量时则抑制垂体前叶释放催乳素，从而减少乳汁分泌；（4）抗雄激素作用；（5）降低血中胆固醇，并能增加钙在骨中的沉着。

1 雌二醇测定的临床意义

雌二醇在血液中的浓度主要受下丘脑-垂体-性腺轴调节控制，呈周期性波动规律。雌二醇浓度过高或过低都会导致生殖及内分泌系统紊乱，从而引发多种疾病，例如幼女性早熟、月经紊乱、不孕不育、异位妊娠等。

（1）雌二醇在发育过程中的分泌与释放，对于幼女性早熟的鉴定有着重要的诊断意义。①测定雌二醇水平可了解其影响程度，再结合其他辅助检查，可以了解是原发性性早熟抑或是由卵巢肿瘤、垂体肿瘤引起。

（2）绝经过渡期妇女由于体内雌二醇水平的改变常常造成月经周期紊乱，出血过多、过频等生理症状。②目前临床上进行绝经治疗，主要是基于模仿月经周期的雌孕激素水平来给药。因而测定雌二醇水平对于临床给药剂量的选定和药物的选用都具有十分重要的指导意义。

（3）雌二醇可以辅助不孕和月经稀发的诊断以及确定卵巢衰竭状态，广泛用于监测诱导排卵和体外受精方案。罗秀③等人通过实验也发现在黄体期补充雌二醇可以提高患者体外受精的成功率和胚胎移植周期的妊娠率。（4）早期诊断及治疗异位妊娠是挽救患病妇女生命和保存患者生育能力的关键。Geveaert④等人发现异位妊娠时，孕妇血清雌二醇浓度低于正常宫内孕者。由此可见，雌二醇的浓度检测对于异位妊娠的早期诊断具有重要意义。

除了直接给生殖及内分泌系统带来巨大影响外，雌二醇也会对其他系统疾病带来明显的效应。常见的一些疾病，如性激素依赖性肿瘤、老年痴呆症等神经损伤、肝硬化等疾病也与雌二醇有着十分重要的联系。

（1）雌二醇浓度的变化是引发性激素依赖性肿瘤（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌等）的原因之一。Ghosh⑤等人研究发现雌二醇的表达变化将对阐述卵巢癌的发病机制及诊断和预后判断上的作用有着重大意义。若有雌二醇水平异常升高时，则可能是功能性卵巢肿瘤。

（2）流行病学研究显示雌二醇可以延缓并降低老年痴呆症（AD）的发病率。Rozovsky等人通过研究发现17 -E2>1 nmol/L时能发挥大脑保护作用，此研究提示雌二醇浓度与其大脑保护作用具有一定的相关性。

（3）雌二醇对肝脏有重要的保护作用，可以抑制肝纤维化的形成。柯尊平⑥等人发现雌二醇能降低结缔组织生长因子（CTGF）和转化生长因子- （TGF- ）的mRNA和蛋白表达。

由于雌二醇与体内多种疾病的发生与治疗密切相关，因此准确地测定血液中雌二醇浓度对于疾病的诊断和治疗具有极其重要的意义。

2 雌二醇测定方法研究进展

随着人们对体内雌二醇浓度测定的越来越重视，用于体内雌二醇测定的方法和仪器正以日新月异地速度发展着。目前用于体内雌二醇测定的方法主要包括放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、免疫放射分析法、时间分辨荧光免疫分析、酶放大化学发光法、电化学发光法、色谱法、电化学传感器法等。⑦

2.1 放射免疫分析法

放射免疫分析法是最常用的，也是最早建立的一种可以用于检测体内雌二醇浓度的免疫分析法。放射免疫分析法优点突出：特异性强，不受周围环境和样本内干扰物质的影响；低本底和高灵敏度；与小分子量同位素的结合不影响免疫反应；应用范围广，具有完善的放射测量体系；操作简便等。但其缺点也是显而易見的：同位素的半衰期使得试剂盒稳定性低；结合于抗原或抗体分子上的125I分子有限，过高会引起结合物的自照射分解；试剂的使用，购买以及废物处理等均引起一定的辐射安全问题；实验容易产生交叉反应、假阳性反应，采血量大，反应测定时间较长。

2.2 酶联免疫吸附分析法

曾经认为酶联免疫吸附分析法可以完全取代放射免疫分析法，该方法特异性高、操作简便、无污染。但是这种通过比色法或偏振光法进行检测的方法干扰大，易产生假阳性反应，其灵敏度和稳定性也未能高于放射免疫分析法。

2.3 免疫放射分析法

免疫放射分析法标记抗体的比活度高，提高了分析的灵敏度（>l0-12～l0-9 mol/L）。反应快，范围广，特异性高，稳定度高的优点让免疫放射分析法越来越受到青睐，但是由于放射性标记带来的半衰期短和同位素污染成为该方法不可避免的负面影响。

2.4 时间分辨荧光免疫分析法

时间分辨荧光免疫分析法由于具有极高的分析灵敏度（l0-12～l0-9 mol/L）、宽阔的测量范围、优良的分析精密性和对多个待测物同时检测的能力，成为方法学上最具优势的非放射免疫分析技术之一，但是昂贵的仪器价格，使得该方法的普及无法达到满意的程度。

2.5 酶放大化学发光法

酶放大化学发光分析法灵敏度高（l0-12～l0-9 mol/L）、时间短、自动化程度高、线性范围宽、对环境无污染，其采用的化学发光法可与RIA媲美，是一种功能全，运行平稳，高效快速准确的化学发光分析仪。但是化学发光分析仪价格昂贵，重要操作环节须由专业人员监控，对机器运行环境有一定要求，不利于临床推广。

2.6 电化学发光法

电化学发光法具有灵敏度高（l0-12～l0-9 mol/L）、仪器设备简单、分析速度快、易实现自动化等优点，然而该方法采用非直接标记，易造成交叉污染，易受环境因素干扰，并且设备价格昂贵，依然不适合广大患者方便利用。

2.7 色谱法

常用于含量测定的色谱法主要有气相色谱法和高效液相色谱法，准确度高，分析时间短，但检测灵敏度较差，无法用于痕量雌二醇的测定。因此为了提高检测灵敏度，现在常用的色谱方法是气相色谱-质谱联用（GC-MS）法和液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）法。GC-MS/HPLC-MS法灵敏度极高（l0-14～l0-9 mol/L），检出限低，分析时间短。但是该方法在测定之前需要对待测物质进行多种处理，仪器价格昂贵，并且需要专业人员才能操作，不利于临床上广泛使用。

2.8 电化学传感器法

电化学传感器具有灵敏度高（l0-12～l0-9 mol/L），特异性强，稳定性好，成本低，采血量少，使得电化学传感器法成为一种迅速发展的雌二醇测定方法，具有广泛应用于临床检测的潜力。但是玻碳电极在每次测试前都需要重新修饰，不利于样品的批量或者连续测定，加之待测样品的前处理过程复杂，也影响了该方法的广泛应用。

3 雌二醇浓度测定方法发展方向

由于现有的用于检测雌二醇的方法都具有各自不同的缺点，因而在临床检测上都受到一定的局限。在现有测定方法中由于传感器具有成本低，灵敏度高，特异性强，稳定性好的优点，现在已广泛应用于分析测试领域。随着对体内雌二醇浓度测定的越来越重视，雌二醇传感器也将在科学技术发展的推动下以日新月异的速度发展着。

项目来源：乐山市科技局2015年产学研合作项目《即抛型雌二醇传感器的制备及其应用研究》，项目编号15GZD131

注释

① 王月影，崔丽君，邱辉.电化学发光法测定女童血清雌二醇在性早熟诊断中的应用[J].哈尔滨医科大学学报，2010.44（4）：394-395.

② Cheung A.M.， Chaudhry R.， Kapral M.， et a1.Perimenopausal and postmenopausal health [J].BMC Womens Health，2004.25（4 Suppl1）：S23.

③ 罗秀，余凡，印贤琴等.黄体期雌二醇预处理方案改善卵巢低反应者体外受精胚胎移植结局的初步研究[J].生殖医学杂志，2009.18（4）：341-344.

④ Geveaert O.， De Semt F.， Kirk E， et al.Predicting the outcome of pregnancies of unknown location：Bayesian networks with expert prior information eompartd to logistic regression[J].Human Reproduction，2006.21（7）：1824-1831.

⑤ Ghosh M. C.， Grass L.， Soosaipillai A.， et a1.Human kallikrein 6 degrades extracellular matrix proteins and may enhance the metastatic potential oftulnour cells[J].Tumour Biol，2004.25（4）：193-199.

⑥ 柯尊平，高愛梅，平洁等.17 -雌二醇对复合因素所致大鼠肝纤维化的胶原降解作用[J].西部医学，2010.22（11）：1992-1994.

⑦ 吕时铭.生殖激素的测定与临床应用[J].医师进修杂志，2000.23（5）：11-13.