胃癌组织miR-215表达变化及其与患者预后的关系

刁卓，刘晓超，唐玉虎，范莉静

(汉中市中心医院，陕西汉中723000)

胃癌组织miR-215表达变化及其与患者预后的关系

刁卓，刘晓超，唐玉虎，范莉静

(汉中市中心医院，陕西汉中723000)

目的 探讨miR-215在胃癌发生、发展中的作用。方法 选择胃癌患者55例，取手术切除的胃癌组织及其配对的癌旁正常组织，采用qRT-PCR法检测miR-215表达，并分析其与患者临床病理参数及预后的关系。结果 胃癌组织miR-215的相对表达量明显高于癌旁正常组织(P<0.05)，且其表达与胃癌组织分化程度、淋巴结转移、临床病理分期等密切相关(P均<0.05)，与患者性别、年龄无关(P均>0.05)。以miR-215相对表达量的中位值(2.83)为界值，胃癌患者miR-215高表达33例、miR-215低表达22例；生存分析显示，miR-215高表达者中位生存时间显著低于miR-215低表达者(P<0.05)。结论 miR-215在胃癌的发生、发展过程中起癌基因作用，其高表达者预后较差；miR-215有可能成为胃癌预后的监测指标。

胃癌；微小RNA-215；生存分析；预后

微小RNA(miRNA)是一类高度保守的小片段非编码RNA，通过整合到RNA诱导的沉默复合物中，与其靶mRNA的3′非编码区完全或不完全结合，降解靶mRNA或抑制翻译，参与调节个体生长、发育及疾病发生过程相关基因的表达，在细胞分化、凋亡和肿瘤生成等过程中发挥重要作用[1]。有研究发现，在多种肿瘤组织中可检测到异常表达的miRNAs，且其不易被RNA酶降解，在室温放置超过24 h或反复冻融下仍十分稳定[2，3]。因此认为，miRNAs可作为理想的分子生物学标志物，用于肿瘤诊断、治疗及预后评估等。miR-215是受p53诱导表达的一个miRNA，通过调控一系列细胞周期检验点蛋白表达，起到癌基因或抑癌基因作用[4]。大量研究证实，在结直肠癌、肾脏肿瘤、肝癌等组织中miR-215表达下调，发挥抑癌基因作用[3～6]。但在胃癌组织中miR-215表达上调，可能具有癌基因作用[7]。2010年1～4月，我们观察了胃癌组织miR-215表达变化，并分析其表达与患者临床病理参数及预后的关系。现分析结果并报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择同期在我院手术治疗的胃癌患者55例，均经术后组织病理检查明确诊断。所有患者临床病理资料完整，术前未接受任何抗肿瘤治疗，并排除远处转移者。其中，男31例、女24例，年龄30～69(56.09±8.26)岁；临床分期：Ⅰ、Ⅱ期23例，Ⅲ、Ⅳ期32例；组织分化程度：中高分化21例，低分化34例；淋巴结转移：有37例，无18例。本研究经医院伦理委员会批准，患者均知情同意。

1.2 miR-215表达检测 采用qRT-PCR法。取手术切除的胃癌组织及癌旁正常组织，TRIzol法提取组织总RNA，分光光度计检测总RNA的浓度和纯度合格后，-80 ℃冰箱保存。取总RNA约2 μg，采用逆转录酶逆转录成cDNA，-20 ℃冰箱保存。参照GeneBank提供的基因序列，由天根生化科技(北京)有限公司合成特异性目的基因引物。miR-215上游引物：5′-CTCGAGATGTCATCCTCAG-3′，下游引物：5′-GAATTCGTGAGTTCTTCTG-3′；内参GADPH上游引物：5′-AATCCCATCACCATCTTCCA-3′，下游引物：5′-CCTGCTYCAACCACCTTCTTG-3′。采用美国ABI StepOnePlus实时荧光定量PCR仪进行扩增反应。PCR反应体系：10×PCR buffer 2.5 μL，25 mmol/L MgCl21.5 μL，10 mmol/L dNTP 0.5 μL，5 U/μL Taq酶0.5 μL，10 mmol/L引物1 μL，cDNA 2 μL(相当于100 ng RNA)，双蒸水补足至25 μL。扩增条件：95 ℃热启动5 min，95 ℃变性20 s，60 ℃退火和延伸共1 min，共40个循环。在PCR扩增过程中，收集荧光信号，通过Bio-Rad CFX Manager软件计算Ct值。以GADPH基因作为内参，采用2-ΔΔCt法计算miR-215的相对表达量。试验重复3次，取平均值。

1.3 预后随访 所有患者术后定期电话随访，随访截至2016年4月。生存时间以月计算，以手术日至末次随访所获得的截至时间为准。55例胃癌患者中，术后接受辅助化疗38例，随访期间出现复发转移43例，死亡39例；因其他疾病死亡2例，失访1例。研究结束、其他原因死亡和失访作为截尾数据处理。

2 结果

2.1 胃癌组织及癌旁正常组织miR-215表达比较 胃癌组织miR-215的相对表达量为3.18±0.36，癌旁正常组织为1.03±0.32，二者比较P<0.05。

2.2 胃癌组织miR-215表达与患者临床病理参数的关系 见表1。

2.3 胃癌组织miR-215表达与患者预后的关系 以miR-215相对表达量的中位值(2.83)为界值，55例胃癌患者miR-215高表达33例、低表达22例。Kaplan-Meier生存曲线分析显示，其中位生存时间分别为24.6、65.3个月，二者比较P<0.01。见图1。

3 讨论

表1 胃癌组织miR-215表达与患者临床病理参数的关系±s)

图1 胃癌患者不同miR-215表达者的生存曲线

胃癌是源自胃黏膜上皮的恶性肿瘤，其发病率居所有消化系统恶性肿瘤的首位，是一种威胁人类健康的常见病、多发病[8]。胃癌的发生、发展是幽门螺杆菌感染、环境因素、遗传因素共同作用的结果[9]。正常情况下，胃黏膜上皮细胞的增殖和凋亡保持动态平衡，而这种平衡的维持依赖于癌基因、抑癌基因及下游靶基因的共同调控。近年来，随着医疗水平的不断进步，胃癌患者的生存率有所提高，但5年生存率仍不足30%。侵袭和转移是导致胃癌患者预后不良的主要原因[10，11]。由于胃癌的早期症状隐匿或无任何症状，易被误诊或漏诊。 因此， 寻找敏感、 特异的分子生物学标志物一直是近年来研究的热点。

miRNAs在进化过程中具有保守性，可参与细胞增殖、凋亡、分化及癌变等生命过程[12]。miR-215定位于人染色体1q41，在多种肿瘤组织中起癌基因或抑癌基因作用。Song等[3]研究发现，在骨肉瘤、结肠癌组织miR-215低表达，具有抑癌基因作用，并与化疗耐药有关。有研究发现，肺癌组织miR-215低表达，并通过下调靶基因ZEB2，参与肿瘤进展[13]；还可通过调控相关靶基因TYMS、DHFR、TS及DTL表达，参与细胞增殖、凋亡等生物过程[13，14]。与其他实体肿瘤不同，miR-215在胃癌组织中高表达，具有癌基因作用，并与肿瘤侵袭和转移明显相关[15～17]。但目前其作用机制尚不清楚。有研究认为，miR-215可能通过下调靶基因活化白细胞黏附因子、MMP-9表达及抑制上皮间质转化，参与胃癌的侵袭和转移过程[18，19]。Jin等[18]通过miRNA芯片技术及实时荧光定量PCR技术证实，胃癌组织中miR-215的表达明显高于癌旁正常组织，且其过表达可促进胃癌细胞HFE145的迁移。

本研究结果显示，胃癌组织miR-215的相对表达量明显高于癌旁正常组织，表明miR-215在胃癌的发生过程中起癌基因作用，与相关报道[20～22]基本一致。临床分期Ⅲ、Ⅳ期者miR-215的相对表达量明显高于Ⅰ、Ⅱ期者，组织分化程度低分化者明显高于中高分化者，表明miR-215的相对表达量越高，肿瘤浸润和侵袭能力越强；有淋巴结转移者miR-215的相对表达量明显高于无淋巴结转移者，表明miR-215的相对表达量越高，肿瘤淋巴结转移能力越强；但其表达与患者性别、年龄无关；与李良平等[23]报道基本一致。本研究还发现，miR-215高表达者中位生存时间明显低于miR-215低表达者，提示miR-215表达越高，胃癌患者中位生存时间越短，预后越差。

综上所述，miR-215在胃癌的发生过程中具有癌基因作用，可参与胃癌的侵袭和转移过程，并与患者预后有关，有可能成为胃癌诊断及预后判断的分子生物学标志物之一。

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