鹿肠毒血症的病原学诊断

（内蒙古民族大学动物科技学院内蒙古通辽028000）

鹿肠毒血症的病原学诊断

邓守全，马德慧*

（内蒙古民族大学动物科技学院内蒙古通辽028000）

本研究采用对送检脏器触片观察、细菌分离培养、形态学观察和药敏试验等方法，对赤峰市某鹿场病死鹿的小肠、肝脏、肺脏等组织进行了细菌分离鉴定。结果表明所分离细菌为魏氏梭菌，该菌对氧氟沙星、左氟沙星、菌必治、舒普深、阿莫西林高度敏感，对氯霉素、妥布霉素、卡那霉素、链霉素、氟苯尼考、强力霉素中度敏感，对阿米卡星、新霉素、庆大霉素有耐药性[1]。

肠毒血症；魏氏梭菌；分离培养

鹿肠毒血症是由魏氏梭菌产生的毒素引起的急性毒血症。近年来在我国部分省区鹿场流行的传染病当中，其发病率居首位，且发病急、病程短、死亡快、病死率高，以胃肠出血，尤其以小肠出血为主要特征[2]。2016年入冬以来，内蒙古赤峰市某梅花鹿养殖场鹿群陆续发生了疑似肠毒血症的急性传染病，我们通过实验室检测手段对该病进行病原学诊断，结果证实为魏氏梭菌感染。

1 材料与方法

1.1 病料

内蒙古赤峰市某梅花鹿场送检的疑似患有肠毒血症的急性死亡鹿内脏。

1.2 主要仪器和试剂

恒温培养箱（上海博讯），生物显微镜（OLYMPUS），超净工作台（苏净AIR TECH)，革兰氏染色液（青岛海博），细菌培养基（北京奥博星），药敏纸片（杭州天和）。

1.3 病料触片镜检

用酒精棉球擦拭后经火焰适度灼烤的剪刀剪开小肠，将处理好的载玻片轻触于肠黏膜，自然干燥后进行革兰氏染色，肝脏也做触片。上述触片于油镜观察。

1.4 细菌分离培养

用烧红的手术刀对十二指肠、肝脏、肺脏表面进行烧烙，待刀片冷却后在烧烙表面切一个切口，将接种环深入切口内取样，分别接种于肝汤琼脂板、血平板上和肝汤液体培养基中，肝汤液体培养基于80℃水浴20～25 min，将接种后的平板和肝汤培养液共同放置于烛缸内，37℃培养20～48 h，观察细菌生长情况和菌落特征，吸取约20 uL肝汤培养物，革兰氏染色，镜检。

1.5 药敏试验

移取肝汤培养液100 mL置于肝汤平板中，用涂布棒将其涂抹均匀后，按照国标要求，每种药敏片之间距离适当，37℃烛缸内培养24 h，观察结构，并测量抑菌圈直径。

2 结果

2.1 脏器触片结果

十二指肠黏膜触片和肝脏、肺脏切面触片均见革兰氏阳性大杆菌，菌体粗大，两端钝圆或平齐，许多菌体外周可见一圈“空白”的荚膜。(如图1～3，见P94）

2.2 菌落形态及液体培养结果

在肝汤琼脂上为边缘不整齐、表面粗糙的扁平大菌落（如图4，见P94）。分离株的菌落具有较强的溶血现象，密集的菌落使血平板整体褪色（如图5，见P94）。肝汤液体培养物出现浑浊且液面形成白色菌环，该环为菌体生长时释放出的气体所形成的泡沫。

2.3 菌体形态

镜下观察菌体为革兰氏阳性，两端钝圆，直线型粗大杆菌，此时不见荚膜。（如图6，见P94）

2.4 药敏试验结果

所分离菌株该菌对氧氟沙星、左氟沙星、菌必治、舒普深、阿莫西林高度敏感，对氯霉素、妥布霉素、卡那霉素、链霉素、氟苯尼考、强力霉素中度敏感，对阿米卡星、新霉素、庆大霉素有耐药性（见表1）。

3 讨论

1）魏氏梭菌是一种能感染多种动物的病原菌，是革兰氏厌氧芽孢杆菌的代表，可引起许多幼畜发生严重的肠道感染，在自然界中广泛存在，且常以休眠形式的芽孢体存在，对外界环境抵抗力强，在水、土壤和动物的粪便中都可以找到。其致病力强弱主要取决于其产生的毒素和具有侵袭性的酶。该分离株对营养要求较为苛刻，初次分离时需在肉汤或肝汤培养基上培养。

2）从临床症状、脏器的病理变化及对病死鹿脏器的细菌分离培养、镜检观察、药敏试验的结果分析可知，该病原分离株为魏氏梭菌。该菌对氧氟沙星、左氟沙星、菌必治、舒普深、阿莫西林高度敏感，对氯霉素、妥布霉素、卡那霉素、链霉素、氟苯尼考、强力霉素中度敏感，对阿米卡星、新霉素、庆大霉素有耐药性。

3）在实际生产过程中，包括鹿在内的反刍动物感染魏氏梭菌的现象比较多见，一般呈地方性流行，感染后发病快，死亡率高，所以应引起养鹿从业者和兽医工作者的高度重视。在今后的生产中，要加强鹿的饲养管理和免疫预防工作，防患于未然才是防控本病的根本原则。■

表1 分离菌株的药敏试验结果（mm)

[1] 孟庆玲,吴文娟,陶大勇等.天山马鹿肠毒血症的病原学诊断及病理学观察[J].塔里木大学学报,2005,17(4)：8-10.

[2] 田立志,丁玉林,郑秉武等.一起梅花鹿肠毒血症的诊断[J].内蒙古农业大学学报,2011,32(2)：309-310.

Etiologic Diagnosis for Entertaracmia in Deer

Deng Shouquan，Ma Dehui*
（Inner Mongolia university for nationalities institute of animal science and technology,TongLiao Inner Mongolia, 028000）

In this study,the microflora of the deer's small intestine,liver,lung and other tissues of deer-dead deer in Chifeng City were isolated and identified by observing the organ contact,observing bacterial culture, morphological observation and drug susceptibility test.The results showed that the isolated bacteria were Clostridium perfringens,which was sensitive to ofloxacin,levofloxacin,Rocephin,Sulperazon and amoxicillin. The bacteria were sensitive to chloramphenicol,tobramycin,Streptomycin,florfenicol,doxycycline moderately sensitive to amikacin,neomycin,gentamicin-resistant.

Entertaracmia;Clostridium welchii;Cultivation

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.1.040

*通讯作者：马德慧