超声在研究肾癌彩色血流平均密度与微血管密度相关性中的应用

崔涛，葛明珠，赵燕辉，张延辉，徐涛，刘春雷

1.青岛市中心医院 泌尿外科，山东 青岛 266042；2.青岛市肿瘤医院 腹部超声科，山东 青岛 266042

超声在研究肾癌彩色血流平均密度与微血管密度相关性中的应用

崔涛1，葛明珠2，赵燕辉1，张延辉1，徐涛1，刘春雷1

1.青岛市中心医院 泌尿外科，山东 青岛 266042；2.青岛市肿瘤医院 腹部超声科，山东 青岛 266042

目的探讨肾癌手术前超声检测彩色血流平均密度（Mean Color Vessel Density，MCVD）与手术后病理组织学分级及微血管密度（Micro Vessel Density，MVD）的相关性。方法对经手术病理确诊的69例肾癌患者术前行超声检查，根据彩色血管能量成像结果，计测MCVD值，术后对肿瘤组织标本进行病理组织学分级，用免疫组化染色法检测MVD值，并对结果进行相关性统计学分析。结果肾癌病灶中MCVD值越高，检测的MVD值也越高，两者呈正相关（r=0.998，P＜0.05）；术后病理组织学分级Ⅰ～Ⅲ级，各病理组织学分级的MCVD与MVD比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论超声检测肾癌的MCVD值与术后病理组织学分级和MVD值有较好的相关性，而且具有无创伤、可重复性等特点，可作为术前评价肾癌新生血管的可靠方法。对肾癌的早期诊断、治疗及评估预后等均有重要的临床指导意义。

超声；彩色血流平均密度；肾肿瘤；微血管密度；病理组织学

引言

肾细胞癌（Renal Cell Carcinoma，RCC），约占成人恶性肿瘤的2%～3%[1]，是肾脏恶性肿瘤中最常见的类型，症状出现晚，预后不佳。绝大多数肾癌属于多血管实体肿瘤[2]，肿瘤内的血管生成情况与其生物学行为密切相关。微血管密度（Micro Vessel Density，MVD）是目前评价肿瘤内新生血管最常用的定量指标，MVD需要在在术后取得组织标本的基础上进行，而在超声彩色血管能量成像（Color Power Angiography，CPA）的基础上检测彩色血流平均密度（Mean Color Vessel Density，MCVD），具有无创伤、可重复性、可定量等特点，可作为手术前评价肿瘤新生血管的方法。现回顾性分析研究2012年5月～2015年2月间我院收治的69例肾癌患者的手术前MCVD值与术后病理组织学分级、与MVD的相关性，讨论超声检测MCVD在评价肾癌新生血管系统方面的意义，报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2012年5月～2015年2月间我院收治的肾癌患者69例，均进行超声检查并经手术和病理证实（透明细胞癌64例，乳头状癌5例）。男48例，女21例，年龄29～81岁，平均58岁。其中31例因无痛性血尿就诊，22例因腰部不适就诊，6例在体检中发现，5例因消瘦就诊，5例因其他原因就诊。全部患者手术前均未进行放疗或化疗。本研究中纳入的病例均已获得患者知情同意并签署相关文书，并获得青岛市中心医院伦理委员会审批通过。

1.2 仪器与方法

使用美国GE LOGIQ E9型彩色多普勒超声诊断仪，探头频率3.5 MHz。超声检测MCVD：嘱患者侧卧位，常规二维超声多切面扫查，明确肿瘤位置，观察肾癌病灶的图像特点（包括肿瘤大小、液化坏死区域的大小、边界、内部回声等）；测量在图像显示清晰的情况下进行，测量3次病灶的最大径，取平均值；在图像清楚时应用CPA显示病灶内血流分布特点，取最大范围且病灶内血流信号最丰富的区域切面图后冻结图，存储；用计算机图像分析软件计算病灶内的彩色血流的面积和病灶面积（根据肿瘤最大径的平均值计算出的面积减去液化坏死区域的面积），MCVD即为二者的比值。

病理组织学检查：全部标本均经10%甲醛固定，常规脱水后，石蜡包埋，所有蜡块连续切片4张，一张作HE染色，一张做免疫组化，其余备用。病理组织学分级：按照肾癌的组织学结构将其分化水平分为3级[3]，I级为高分化型，包括腺管型、乳头型、腺泡型；Ⅱ级为中分化实性片型；Ⅲ级为低分化（未分化）型。

应用免疫组化法检测微血管密度：采用即用型鼠抗人CD34单克隆抗体，以肿瘤血管内皮细胞呈棕色或棕黄色染色为阳性判断标准。根据Weider血管计数法[4]，计数微血管管密度，首先在100倍镜下选取切片中内皮细胞染色最密集的5个区域，再在400倍镜下计数每个视野下染成棕色的血管数目。被染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇计为1个血管，只要结构不相连，与周围相近组织有明显界线，其分支结构也计作1个微血管计数。取其平均值即作为该例的MVD值。

1.4 统计学分析

所有患者数据采用SPSS 17.0进行统计学分析。所有检测数据以均数±标准差（±s）表示。采用Pearson法分析MCVD值和MCD值的相关性，采用单因素方差分析比较肾癌不同病理组织学分级之间的MCVD值和MCD值，P＜0.05为差异有显著统计学意义。

2 结果

69例肾癌患者术前经超声CPA后，计测的MCVD值均数为（0.31±0.11），术后病理组织标本经免疫组化法检测的MVD值均数为（51.21±10.62）/400倍视野，采用Pearson法分析两者的关系，呈正相关（r=0.998，P=0.037）。

比较69例肾癌患者不同病理组织学分级的MCVD值和MVD值，见表1。采用单因素方差分析各病理组织学分级之间的MCVD值、MCD值，比较差异均具有统计学意义（P＜0.05），而且病理组织学分级越高，MCVD值和MCD值也随之增高。Ⅰ级和Ⅱ级患者彩色血管能量成像图和免疫组织学染色图，见图1。

表1 69例不同病理分级肾癌患者病灶的MCVD、MVD值关系（±s）

表1 69例不同病理分级肾癌患者病灶的MCVD、MVD值关系（±s）

病理组织学分级 例数 MCVD MVD (400×)Ⅰ 级 21 0.15±0.11 36.5±11.2Ⅱ级 38 0.26±0.08 49.3±15.3Ⅲ 级 10 0.35±0.09 57.8±16.9 P值 ＜0.05 ＜0.05

3 讨论

研究证实，实体肿瘤在其发生、发展的过程中，需要形成新生血管系统来供应肿瘤细胞所需要的养分和氧气；同时，也需要新生血管为癌细胞的扩散、转移提供条件[5]。肾细胞癌绝大多数属于多血管实体肿瘤，研究评价肾细胞癌新生血管系统，有助于了解肾癌的转移、浸润等生物学特性，对肾癌的早期诊断、鉴别诊断、治疗、转移及预后评估等均有重要意义[6]。

以血管内皮细胞为标记物用免疫组织化学法来检测实体肿瘤组织的MVD是目前评价肿瘤内新生血管的常用指标[7]，MVD是评价肿瘤血管生成的金标准[8]。很多文献[9]报道了对肺癌、胃癌、乳腺癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌等多种肿瘤微血管密度的研究，证实MVD是一个重要而独立的影响预后的指标。刘本春等[10]在检测不同临床分期RCC的微血管密度中发现，肿瘤的恶性程度与微血管密度呈正相关，而且MVD可用来判断肾细胞癌的转移。病理组织学分级也是判断肿瘤预后的常用重要指标[11]，本次研究69例不同病理组织学分级肾癌患者病灶的MVD值，发现肿瘤细胞的分化程度越低，诱导血管生成的能力越强，即MVD值越高，这与临床发现的分化程度越低的肿瘤发生局部浸润和转移的机率越高越一致，病理组织学分级决定肿瘤生物学特性的内在本质可能是肿瘤病灶内的微血管密度[12]。但MVD和病理组织学分级均需要在手术后或穿刺后取组织学标本才能获得，而且MVD仅能反映肿瘤极小区域血管生成的情况，不适合手术前观察。

图1 Ⅰ级和Ⅱ级病理组织学分级肾癌患者的彩色血管能量成像和免疫组织化学染色图

随着现代医学超声技术的不断出现，不仅可以宏观显示肿瘤内血管走行、分布，测量相应参数，还可对肿瘤内血管进行定量计数分析[13]，使得超声在研究肿瘤新生血管方面的应用更加广泛。与其他术前的影像学检查技术比较，CPA利用血流中红细胞密度、散射能量成像，因CPA对声速和血流的夹角没有依赖，不出现混叠现象，能显示低速、低流量的血流。联合应用彩色多普勒血流显像（Color Doppler Flow Imaging，CDFI）和CPA诊断小肾癌，使其诊断准确率大大提高，是早期诊断的有效手段[14]。使用CPA评价肾细胞癌的血供特征还有助于肿瘤的鉴别诊断[15]。目前，CPA技术观察肿瘤内血管后，使用Auto CAD软件还可计算出MCVD，MCVD是能够反映肿瘤新生血管丰富程度的定量指标[16]。本次回顾性研究结果表明MCVD与术后病理组织学分级和MVD均具有较好的相关性，肾癌病灶中血流信号越丰富，MCVD值越高，病理组织学分级和检测MVD值也越高，各病理组织学分级的MCVD及MVD比较差异均有显著性意义（P＜0.05）。说明MCVD能够较好的反映肾癌的整体血供，并与术后肿瘤血管病理情况一致，可作为一个术前评价肾癌新生血管的可靠定量参考指标，对肾癌的早期诊断、治疗及评估预后等均有重要的临床指导意义。

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本文编辑 聂孝楠

Application of Color Doppler Ultrasound in Analyzing Correlation Between Mean Color Vessel Density and Micro Vessel Density in Renal Cell Carcinoma

CUI Tao1, GE Ming-zhu2, ZHAO Yan-hui1, ZHANG Yan-hui1, XU Tao1,LIU Chun-lei1
1. Department of Urology Surgery, Qingdao Central Hospital, Qingdao Shandong 266042, China; 2. Department of Abdominal Ultrasonography, Qingdao Tumor Hospital, Qingdao Shandong 266042, China

ObjectiveTo explore the correlation between preoperative mean color vessel density (MCVD) tested by ultrasound and postoperative histopathological grade in pathology, micro vessel density (MVD) in renal cell carcinoma.Methods69 cases of renal cell carcinoma patients confirmed via surgical pathology were examined with ultrasound preoperatively, and their MCVD were calculated according to the results of color power angiography. After operation all the slices of tumor tissue specimens were stained with routine hematoxylin-eosin (HE) staining method and immunohistochemistry staining method respectively. The tumor tissue specimens stained by HE were graded in histopothology. Immunohlstochemistry staining was done with instant-type mouse anti-human CD34 monoclonal antibody and used to calculate MVDs. Then MCVD, MVD and histopathological grades were analyzed statistically.ResultsAs MCVD value was higher in kidney lesion, the detected MVD value increased more , both showing positive correlation (r=0.998, P＜0.05) in this study. Histopathology was gradedⅠ-Ⅲ after operation. MVD and MCVD in different histopathological grades were different statistically (P＜0.05).ConclusionThe preoperative MCVD value generated by ultrasound showed good correlation with the postoperative histopathological grade as well as MVD, and ultrasonic detection had the characteristics of no wound, repeatability, which could be used as a reliable method of preoperatively evaluating angiogenesis in renal cell carcinoma. MCVD had important instructive clinical signi fi cance to renal cell carcinoma for early diagnosis, treatment and evaluating prognosis, etc.

ultrasonography; mean color vessel density; kidney neoplasms; micro vessel density; histopathology

R737.11；R445.1

B

10.3969/j.issn.1674-1633.2017.02.018

1674-1633(2017)02-0068-03

2016-04-26

2016-09-29

作者邮箱：1138097751@qq.com