槲寄生中N-桂皮酰基丁二胺药代动力学研究

孙永慧，李 靖，郎 悦

(1. 黑龙江中医药大学中医药研究院，哈尔滨 150040；2. 江苏康缘药业股份有限公司，中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏 连云港 222001)

槲寄生中N-桂皮酰基丁二胺药代动力学研究

孙永慧1，李 靖1，郎 悦2

(1. 黑龙江中医药大学中医药研究院，哈尔滨 150040；2. 江苏康缘药业股份有限公司，中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏 连云港 222001)

研究槲寄生中N-桂皮酰基丁二胺在大鼠体内的药代动力学特点.大鼠灌胃给予N-桂皮酰基丁二胺，采集不同时间点的大鼠血浆，用HPLC法检测大鼠血浆中N-桂皮酰基丁二胺的浓度，并用DAS2.0药动学软件进行数据处理，计算药动学参数.N-桂皮酰基丁二胺在大鼠体内的药动学特征符合一室模型，药动学参数分别为：半衰期速率常数T1/2(ka)=0.343 h，分布半衰期T1/2=1.306 h，达峰时间Tmax=0.750 h，最大血药浓度Cmax=1.700 μg/mL，表观分布容积V1/F=21.047 L·kg-1，口服消除率CL=11.172 L·h-1·kg-1，药时曲线下面积AUC(0-t)=4.129 h·mg·L-1. N-桂皮酰基丁二胺口服给药后，吸收和分布均较快，且分布广泛，在血浆中的清除也较快.

N-桂皮酰基丁二胺；药代动力学；HPLC；血药浓度

N-桂皮酰基丁二胺是槲寄生中的生物碱类成分[1].槲寄生总生物碱抗肿瘤活性的报道比较多，抗肿瘤活性很强[2].本实验前期提取分离并用HPLC测定了槲寄生中生物碱类成分N-桂皮酰基丁二胺的含量[3]，为血药浓度的测定提供了基础.槲寄生中已经分离出的酰胺类生物碱具有较好抗肿瘤活性[4]，所以研究槲寄生中生物碱在大鼠体内的药物吸收代谢规律，考察槲寄生提取物中N-桂皮酰基丁二胺的药代动力学特征，并用通过药时曲线来描述动态吸收过程，可以为槲寄生中生物碱的药物研发和机制研究提供依据，对阐明中药药效物质基础以及新药创制等方面均有着非常重要的意义.

1 仪器与材料

1.1 仪器

Waters 2695-2998型高效液相色谱仪(美国Waters公司)；TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂制造)；XW-80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；CPA225D电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司).

1.2 试药

N-桂皮酰基丁二胺(自制，经HPLC归一化法测定质量分数大于98.0%)；乙腈(色谱纯， Tedia公司)；其他试剂(分析纯).

1.3 实验动物

Wistar雄性大鼠，体重为(250±20 g)，SPF级，黑龙江中医药大学实验动物安全评价中心提供，实验动物生产许可证号: SCX K(黑)2014-0002.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DiamonsilTM(钻石)C18(5μm，5.6×250 mm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液(15∶85)；检测波长：278 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：25 ℃.HPLC色谱图见图1～4.实验结果显示N-桂皮酰基丁二胺色谱分离良好，不受内源性杂质峰干扰.

图1 N-桂皮酰基丁二胺对照品

图2 空白血浆

图3 含N-桂皮酰基丁二胺空白血浆

图4 受试大鼠含药血浆

2.2 血浆样品的采集

取大鼠6只，禁食12h，自由饮水.N-桂皮酰基丁二胺单体按50 mg/kg灌胃给药，分别于给药后5、15、30、45、60、90、120、180、240、360 min由尾静脉取血0.5 mL，将血样收集于离心管内(经肝素处理)，于8 000 r/min离心10 min，取上清液(即为血浆)，放入-20 ℃的冰箱中冷冻，备用.

2.3 实验方法学考察

2.3.1 对照品溶液的制备

取N-桂皮酰基丁二胺对照品适量，精密称定，加乙腈制成质量浓度为1.5 μg/mL的对照品溶液，备用.

2.3.2 标准曲线制备

取上述对照品溶液200 μL与100 μL空白大鼠血浆混合，旋涡振荡30 s，混合液于8 000 r/min离心10 min，得1.0 μg/mL的标准加样血浆溶液，再经0.22 μm微孔滤膜滤过，分别进样1、5、10、15、20 μL，测定.以峰面积为纵坐标(Y)，以进样量微克数为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程：Y=2.6×106X+5 538，R2=0.999 8，可见N-桂皮酰基丁二胺进样量在0.001～0.020 μg范围内线性关系良好.

2.3.3 精密度考察

取2.3.2项下的标准加样血浆溶液，连续进样6次，每次10 μL，记录对照品峰面积，计算得6次进样峰面积RSD值为1.3%.

2.3.4 稳定性考察

取2.3.2项下的标准加样血浆溶液，在间隔0、2、4、6、8、12 h时分别进样，进样量为10 μL，记录峰面积值，计算RSD值为1.4%，表明供试品溶液稳定性良好.

2.3.5 回收率考察

分别取6份对照品溶液，每份200 μL，按2.2.2项下的方法制备标准加样血浆溶液，进样测定.将测得的峰面积与未加血浆处理的相同质量浓度对照品溶液的峰面积相比较，计算回收率，得平均回收率为96.4%，RSD=1.4%.表明血浆样品处理方法可靠.

2.4 血浆样品的制备与测定

血浆样品解冻后取100 μL，加入乙腈200 μL，涡旋振荡60 s，以8 000 r/min离心10 min，再用0.22 μm微孔滤膜滤过，精密吸取30 μL进样测定.

2.5 血药质量浓度测定及药代动力学参数的计算

取大鼠给药后不同时间点抽取的血样，用所建立的色谱条件进行测定，平均血药质量浓度-时间曲线图如图5.用DAS2.0药学与统计软件进行数据处理，主要的药动学参数见表1.

图5 N-桂皮酰基丁二胺给药75 mg/kg的血药质量浓度-时间曲线(n=6)

CmaxTmaxT1/2V1/FCL/FAUC(0-t)T1/2(ka)1．7000．7501．30621．04711．1724．1290．343

2.6 结果及分析

大鼠灌胃N-桂皮酰基丁二胺的药动学特征均符合一室模型，以50 mg/kg剂量给药后，达峰时间为0.750 h，表明该物质在胃肠道的吸收较快；表观分布容积为21.047，表明在组织中的分布较广；在血浆中的清除率为11.172 L·h-1·kg-1，半衰期为1.306 h，表明在血浆中的清除较快.总之，N-桂皮酰基丁二胺给药后在胃肠道的吸收和分布较快，且分布广泛，在血浆中的清除也较快.

3 讨 论

大鼠血浆中N-桂皮酰基丁二胺的测定方法参考文献[3]中HPLC色谱条件，流动相为乙腈-0.2%磷酸水，经试验对色谱条件进行优化，将流动相比例调整为15∶85时色谱峰分离度良好，基线较平稳.采用该HPLC法是检测N-桂皮酰基丁二胺血药浓度的一种有效分析方法，简便并高效.

药代动力学研究包括血药浓度法以及生物效应法，二者没有本质区别，其中血药浓度法是药动学研究的经典方法，亦是经常使用的最精准的一种方法.本试验采用血药浓度测定法[5-6]对N-桂皮酰基丁二胺药代动力学进行了研究，为后期槲寄生生物碱类在抗肿瘤作用的机理研究提供了基础，也为其新药的研发提供了科学依据和理论支持.

[1] 孙永慧, 凌 勇, 任美荣, 等. 红果槲寄生的化学成分研究[J]. 中草药, 2010, 41(9): 1418-1420.

[2] 张水仙, 刘 越, 孙洪波, 等. 槲寄生化学成分及药理作用研究进展[J]. 中药材, 2011, 34(12): 1962-1967.

[3] 孙永慧, 郎 悦, 张 颖. HPLC法测定槲寄生中N-桂皮酰基丁二胺的含量[J].哈尔滨商业大学学报: 自然科学版, 2015, 31(5): 530-532.

[4] 凌 勇, 孙永慧, 赵 芹, 等. 红果槲寄生抗肿瘤有效部位的确定[J]. 中国实验方剂学杂志, 2011, 17(10): 193-195.

[5] 周 静, 周本宏, 凃 杰, 等. 石榴皮提取物中鞣花酸和没食子酸在大鼠体内的药代动力学研究[J].中国医药导报, 2015, 12(3): 19-23.

[6] 王晓钰, 江小燕, 于 曦, 等. 升麻素在大鼠体内的药代动力学研究[J]. 中国药理学通报, 2015, 31(10): 1443-1446.

Pharmacokinetic study on N-cinnamoyl putrescine in viscum coloratum nakai

SUN Yong-hui1, LI Jing1, LANG Yue2

(1. Academy of Chinese Medicine，Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine, Harbin 150040, China; 2. State Key Laboratory of Pharmaceutical Process New-tech for Chinese Medicine, Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co.Ltd., Lianyungang 222001, China)

To study the pharmacokinetic character of N-cinnamoyl putrescine in rats, after the rats were administered by N-cinnamoyl putrescine through ig, HPLC was used to determine the concentration of N-cinnamoyl putrescine in blood plasma at different times, pharmacokinetic software DAS2.0 was used to process the data. N-cinnamoyl putrescine was shown to be one-room distribution model in rats. The main pharmacokinetic parameters of N-cinnamoyl putrescine are as follows:T1/2(ka) =0.343 h,T1/2=1.306 h,Tmax=0.750 h,Cmax=1.700 μg·mL-1,V1/F=21.047 L·kg-1,CL=11.172 L·h-1·kg-1, AUC (0-t) =4.129 h·mg·L-1. It indicated that the absorption and distribution of N-cinnamoyl putrescine was rapid and wide. The distribution was broad and clearance was very quick in the plasma.

N-cinnamoyl putrescine; pharmacokinetics; HPLC; blood-medicinal concentration

2016-03-25.

黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12531635)

孙永慧(1974-)，女，博士，在站博士后，副研究员，研究方向：中药药效物质基础研究.

R28

A

1672-0946(2017)01-0008-03