顶空气相色谱法测定奥扎格雷钠中残留溶剂

明宝钢，张琳琳

顶空气相色谱法测定奥扎格雷钠中残留溶剂

明宝钢，张琳琳

目的 建立奥扎格雷钠中甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷残留量的测定方法。方法 采用DB-5毛细管色谱柱(30 m×0.532 mm，1.0 μm)，载气为氮气，柱温采取程序升温，初始温度40 ℃，保持4 min，然后以25 ℃/min的速率升至150 ℃，保持4 min；顶空进样，进样口温度200 ℃；氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度220 ℃。结果 甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷的线性范围分别为0.26～0.39、0.41～0.62、0.41～0.62、0.071～0.047、4.75～7.12 μg/mL，平均回收率(n=9)分别为101.3%、98.2%、95.4%、95.8%、95.4%。结论 该方法简便，灵敏度高，重复性好，结果准确，适合奥扎格雷钠中有机溶剂残留量的测定。

奥扎格雷钠；气相色谱法；顶空进样；残留溶剂

0 引言

奥扎格雷钠(Sodium ozagrel)为血栓素A2(TXA2)合成酶抑制剂，具有抗血小板凝聚和扩张血管的作用。依据本品的合成工艺路线，在合成过程中可能使用的有机试剂为甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷。根据中国药典2010年版二部附录ⅤE的要求[1]，参考相关文献[2-9]，本文采用气相色谱顶空进样法对上述溶剂的残留情况进行了测定。所建方法专属性强，重复性好，结果可靠，可用于奥扎格雷钠中甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷的残留量测定。

1 材料

气相色谱仪(日本岛津公司 GC-2010)；顶空自动进样器(日本岛津公司 AOC-5000)；高纯氮(纯度>99.9%)；电子分析天平(瑞士sartorius公司，CP225D)。奥扎格雷钠原料来自A企业，批号：201201、201202、201203。甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品储备液的制备 精密称取甲醇、无水乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷各约0.3、0.5、0.5、0.06、0.006 g，置 100 mL 量瓶中，加少量二甲基甲酰胺使溶解后，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密量取1、2、5、10、15、20、30 mL，分别置100 mL量瓶中，加水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液各 5 mL，分别置20 mL顶空瓶中密封，即得对照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥、⑦。

2.1.3 供试品溶液的制备 精密称取供试品约0.5 g，置 20 mL 顶空瓶中，精密加入水溶液5 mL使溶解，密封，即得。

2.1.4 空白溶液的制备 精密量取水5 mL，置 20 mL顶空瓶中，密封，即得。

2.2 色谱条件 采用DB-5 毛细管色谱柱(30 m×0.053 mm，1.0 μm)；FID 检测器；载气为氮气，流速为 1.0 mL/min，采取程序升温，初始温度 4 ℃，保持4 min，然后以25 ℃/min的速率升至200 ℃，保持4 min；进样口温度 200 ℃；检测器温度220 ℃；顶空瓶平衡温度为60 ℃，平衡时间为30 min，定量环温度为60 ℃。按上述条件，取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液进样，记录色谱图，见图1。在空白溶液色谱中，甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷主峰的保留时间处没有干扰峰出现；对照品溶液④色谱中各主峰的理论塔板数均不低于8 000，分离度均>1.5。

图1 奥扎格雷钠色谱图

2.3 线性关系考察 取“2.1.2”项下的系列对照品溶液，进样。以峰面积为纵坐标、对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷的回归方程见表1。

表1 线性方程与线性范围

2.4 重复性试验 按照“2.1.3”项下方法平行制备 6 份供试品溶液，顶空进样，结果表明，该方法重复性良好，具体结果见表2。

表2 重复性试验结果(%)

注：—为未检出

2.5 检测限与定量限测定 将对照品溶液④逐步稀释，精密量取5 mL，置20 mL顶空瓶中，密封，顶空进样，记录色谱图，所得图谱计算甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷色谱峰信噪比，测得甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷的检出限分别为2.5、2、10、60、120 ng/mL (信噪比为3∶1)，定量限分别为6、4、50、120、240 ng/mL (信噪比为10∶1)，结果见表3。

2.6 回收率试验 精密称取甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷适量，照对照品溶液④的配制方法，分别配制相当于其80%、100%、120%的溶液各3份，置100 mL量瓶中。精密称取供试品约0.5 g，共9 份，分别置20 mL 顶空瓶中，分别精密加入上述低、中、高3 个浓度的对照品溶液5 mL，密封，摇匀，按上述气相色谱条件测定，记录色谱图。计算得甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷的平均回收率(n=9)分别为101.3%、98.2%、95.4%、95.8%和95.4%；RSD分别为1.4%、1.4%、1.5%、3.4%和1.4%，结果见表4。

2.7 样品残留溶剂测定 按照“2.4”项下方法制备供试品溶液，顶空进样，结果3批样品均未检出甲醇、二氯甲烷和三氯甲烷，三批样品中乙醇和乙醚分别为0.05%和0.001%。

表3 检出限及定量限试验结果(μg/mL)

3 讨论

3.1 实验中对顶空温度及平衡时间进行了筛选，顶空温度分别考察了50、60、70 ℃；平衡时间考察了15、30、45 min。试验结果显示，顶空温度60 ℃，平衡时间30 min，顶空瓶中气液两相中的甲醇、乙醇、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷可充分平衡，峰面积适宜，故选择顶空温度60 ℃，平衡时间30 min。

表4 回收率试验结果(mg/L)

注：乙醇测得量=[(检出量-称样量)×0.05%]；乙醚测得量=[(检出量-称样量)×0.001%]

3.2 生产工艺中还涉及二甲基甲酰胺和四氯化碳等有机溶剂。试验中发现以水为溶剂时，顶空温度提高至100 ℃，或以水-二甲亚砜(9∶1)为溶剂，顶空温度提高至120 ℃，二甲基甲酰胺均无法采用顶空法进行测定；四氯化碳采用FID检测器响应值过低，对照品溶液的响应值刚刚达到检出限，故上述两种残留溶剂不适宜采用该方法同时测定。

3.3 该方法线性良好，回收率在92%～103%之间，重复性良好，结果表明，本文所建立的检测方法简便、准确、有效，能够满足实际样品检测的需要。

[1]卫生部药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:化学工业出版社,2010:31.

[2]张艳红,吕昭云,张颖,等.顶空毛细管气相色谱法测定羟戊基苯甲酸钾中的残留溶剂[J].药物分析杂志,2009,29(9):1565.

[3]程奇蕾,张德瑞,李慧义.盐酸西替利嗪中残留溶剂检查方法的研究[J].药物分析杂志,2008,28(8):1355.

[4]李心泓,杨直,胡晓炜.毛细管顶空进样法测定硫辛酸中有机溶剂残留量[J].中国新药杂志,2007,16(7):554-555.

[5]胡慧廉,丁乃立,吴莲珍.顶空气相色谱法测定左乙拉西坦中有机溶剂残留量[J].中国新药杂志,2007,16(22):1882-1884.

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[7]陈汝红,杨春巧,张轶华.顶空气相色谱法检测苄星青霉素原料药中的5种残留溶剂[J].中国药房,2012,23(45):4287.

[8]吴朝华,王秀梅,顾宝明.顶空毛细管气相色谱法测定盐酸丁卡因原料药中的残留溶剂[J].药物分析杂志,2011,31(6):1188.

[9]崇小萌,胡昌勤.利用中等极性气相色谱系统分析药物残留溶剂[J].药物分析杂志,2014,34(11):2048.

·安全用药·

Headspace GC determination for residual solutions in sodium ozagrel

MING Bao-gang,ZHANG Lin-lin

(Department of Pharmacy,Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110004,China)

Objective To establish a headspace GC method for the determination of residual solution in sodium ozagrel.Methods DB-5 column (30 m×0.532 mm,1.0 μm) was adopted,with nitrogen as a carrier gas and FID as a detector.The initial temperature was kept at 40 ℃ for 4 min,and the temperature was raised to 150 ℃ at the rate of 25 ℃/min.The injecting port temperature was 200 ℃,and the detector temperature was 220 ℃.Results The calibration curve of methanol,ether,acetone and carbon dichloride showed a good linearity within the ranges of 0.26～0.39,0.41～0.62,0.41～0.62,0.071～0.047 and 4.75～7.12 μg/mL.The average recovery rates (n=9) were 101.3%,98.2%,95.4%,95.8% and 95.4%,respectively.Conclusion The method is simple,sensitive,reproducible and accurate for the determination of residual solution in sodium ozagrel.

Sodium ozagrel;GC;Headspace sampling;Residual solvent

2016-03-04

中国医科大学附属盛京医院药学部，沈阳 110004

10.14053/j.cnki.ppcr.201702024