新疆维吾尔族寻常型银屑病中JAK1、STAT3蛋白的表达及意义

王慧琴，补 娟，赵宗峰，陈春丽，吴卫东

·短篇论著·

新疆维吾尔族寻常型银屑病中JAK1、STAT3蛋白的表达及意义

王慧琴1，补 娟1，赵宗峰1，陈春丽2，吴卫东1

目的 探讨JAK-STAT信号转导通路中JAK1和STAT3在新疆维吾尔族寻常型银屑病皮损组织中的表达及意义。方法 采用免疫组化法检测45例维吾尔族寻常型银屑病皮损组织和21例维吾尔族正常表皮组织中JAK1和STAT3蛋白的表达，并复习相关文献。结果 维吾尔族寻常型银屑病患者皮损组织中JAK1蛋白阳性率为77.78%，在维吾尔族正常表皮组织中的阳性率为28.57%；维吾尔族寻常型银屑病患者皮损组织中STAT3蛋白阳性率为86.67%，在维吾尔族正常表皮组织中的阳性率为23.81%，两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 维吾尔族寻常型银屑病发病可能与JAK-STAT信号转导通路中JAK1和STAT3蛋白异常表达相关。

寻常型银屑病；JAK1；STAT3；免疫组织化学

银屑病(psoriasis)是一种以表皮角质形成细胞异常增生和角化不全为主要病理改变的慢性复发性炎症性皮肤病。临床分型包括寻常型、关节病型、脓疱型及红皮病型。因其容易复发，难以根治而严重影响患者的身心健康，目前尚无法从根本上治愈。作者前期实验结果显示JAK-STAT信号通路的多个基因在银屑病的发生过程中异常表达[1]。JAK-STAT信号通路是重要的信号转导通路，参与机体多种生物学过程。本文采用免疫组化法检测JAK1、STAT3蛋白在维吾尔族银屑病皮损组织和维吾尔族正常表皮组织中的表达，探讨两者在银屑病发病过程中可能的作用及意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料 收集2011年～2013年新疆维吾尔自治区人民医院皮肤科诊治的45例维吾尔族寻常型银屑病(银屑病组)，其中男性20例，女性25例，年龄9～63岁，中位年龄37岁。所有患者具有典型皮损并经组织病理确诊；1个月内无皮损局部用药，不伴有其他严重疾病。另收集21例维吾尔族皮肤组织样本为对照组，均来自骨科和整形外科手术多余的正常皮肤(正常对照组)，其中男性8例，女性13例，年龄8～62岁，中位年龄21岁，并排除急、慢性疾病史。所有采集、检测均获得患者或监护人的知情同意。

1.2 主要试剂 鼠抗JAK1单克隆抗体、鼠兔通用性二抗试剂盒；兔抗人STAT3单克隆抗体、鼠兔通用型二抗试剂盒；DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥公司。

1.3 方法 免疫组化染色采用EnVision两步法，分别设立阴性对照和阳性对照；石蜡切片常规脱蜡；采用EDTA缓冲液高压修复，蒸馏水冲洗；室温下3%过氧化氢孵育封闭10 min，以清除内源性过氧化物酶活性；蒸馏水冲洗，PBS浸洗；滴加一抗，4 ℃冰箱过夜；PBS浸洗加二抗，室温下孵育45 min，PBS浸洗；DAB显色，苏木精复染、脱水、透明、封片。

1.4 结果判断 JAK1及STAT3阳性显色主要定位于细胞质，部分表达于细胞质及细胞核。细胞胞膜或胞质中出现背景清晰的棕褐色或棕黄色的染色为阳性；结果由两名病理科医师采用双盲法阅片判定，至少随机观察5个高倍视野，按阳性细胞数所占百分比分类。通过显微镜图像采集，选择无蜕变、无重叠、结构和染色清晰的切片在统一放大倍数(×100)下检测并收集，阳性标准根据阳性细胞百分比和着色强度评分：阳性细胞数10%～50%为(+)；51%～74%为()；≥75%()；<10%或着色较弱或切片内无阳性细胞为(-)。

1.5 统计学分析 采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。用χ2检验进行比较，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 JAK1蛋白在不同皮肤组织中的表达 JAK1在维吾尔族寻常型银屑病组织和正常表皮组织中均有阳性表达，定位于细胞质，部分表达于细胞质及细胞核中。维吾尔族正常表皮组织中的阳性率为28.6%(6/21)，6例表达于表皮全层细胞，15例表达于基底层细胞，棘层细胞呈弱表达或无表达(图1)。在维吾尔族寻常型银屑病组织中的阳性率为77.8%(35/45)，即35例表达于表皮全层细胞，10例表达于基底层细胞，棘层细胞呈弱表达或无表达(图2)。与维吾尔族正常表皮组织相比，银屑病表皮组织中的阳性颗粒表达于细胞质及细胞核明显增多，两组相比差异有统计学意义(χ2=14.732，P<0.001)。

2.2 STAT3蛋白在不同皮肤组织中的表达 STAT3在维吾尔族寻常型银屑病组织和正常表皮组织中均有阳性表达，阳性表达定位于细胞质；在正常表皮组织中的阳性率为23.81%(5/21)，主要表达于表皮基底层和棘层(图3)，在寻常型银屑病皮损组织中的阳性率为86.67%(39/45)，主要表达于表皮全层(图4)；两组相比差异有显著性(χ2=25.457，P<0.001)。因此推测JAK1和STAT3蛋白的差异表达与银屑病的发生、发展相关。

3 讨论

银屑病重要的临床特征是：炎症细胞浸润、表皮细胞过度增生、介质释放、真皮血管增生、局部免疫学异常等。本组前期实验发现JAK-STAT信号通路与银屑病的发生、发展密切相关。JAK-STAT信号通路是机体内普遍存在的一条由细胞因子刺激的信号转导通路，参与机体细胞的增殖、分化、存活、凋亡，介导机体免疫失调及肿瘤生成等过程[2]。JAK是一类非受体酪氨酸激酶，可以介导细胞因子与其受体结合后的信号蛋白分子级联活化反应，共包括四个成员：JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。其中JAK1、JAK2和TYK2普遍表达于各种组织和细胞中，广泛参与多种细胞因子的胞内信号转导，对机体免疫系统的正常发育及分化成熟发挥重要调控作用[2-4]。STAT是一种能与DNA结合的蛋白独特家族，被称为“信号转导子和转录激活子”。目前已发现7个STAT家族成员，分别为STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b和STAT6。STAT作为JAK/STAT信号转导通路中JAK的重要底物，受到外界信号的刺激后，可与细胞膜中磷酸化的酪氨酸残基结合，自身发生磷酸化，之后以二聚体的形式进去细胞核内与靶基因结合，调控基因的转录，从而实现细胞因子受体介导的信号转导，调节机体免疫应答反应[2-6]。

本组实验结果显示，在维吾尔族正常表皮组织和维吾尔族寻常型银屑病皮损组织中JAK1和STAT3蛋白表达着色部位及比例均不同；JAK1在维吾尔族正常表皮组织中的阳性率为28.6%，在维吾尔族寻常型银屑病皮损组织中阳性率为77.8%，与正常组相比，银屑病组阳性率明显升高。STAT3在新疆维吾尔族寻常型银屑病皮损组织中的阳性率为86.67%，在维吾尔族正常表皮组织中的阳性率为23.81%，差异有统计学意义。这与Sano等[7-8]发现超过90%的患者皮损处角质形成细胞中Stat3水平升高的研究结论相一致。这可能是因为JAK1与STAT3参与的信号通路调节机体免疫应答反应，调控细胞因子介导机体细胞变化，而研究表明银屑病是T细胞介导的炎症性皮肤病，因此作者推测JAK1和STAT3蛋白的差异表达参与介导了银屑病的发生、发展过程。但其具体的致病机制有待更深入的研究，同时明确这些问题也为银屑病的深入研究和诊治奠定基础。

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时间：2017-2-27 10:14

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170227.1015.040.html

新疆维吾尔自治区自然科学基金(2015211C213)

新疆维吾尔自治区人民医院1临床医学研究中心、2皮肤性病科，乌鲁木齐 830001

王慧琴，女，硕士，助理研究员。E-mail: maluoshi@sina.com 吴卫东，男，硕士，研究员，通讯作者。E-mail: xjwudong@126.com

R 758.6

A

1001-7399(2017)02-0190-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.02.017

接受日期：2016-09-01