RP-HPLC测儿童回春颗粒的有效成分

龙城宇(西北民族大学化工学院，甘肃 兰州 730124)

RP-HPLC测儿童回春颗粒的有效成分

龙城宇(西北民族大学化工学院，甘肃 兰州 730124)

目的建立在多个检测波长条件下用反相高效液相色谱（RP-HPLC）测定儿童回春颗粒中葛根素、芍药苷及盐酸小檗碱的含量的色谱分析方法。方法使用Aglient1200高效液相色谱仪，柱温设置为25℃、流速设定0.8mL/min、检测波长葛根素（205nm），芍药苷（230nm），小檗碱（350nm）条件下，流动相使用乙腈-0.05%的磷酸水溶液，以梯度洗脱为理论，测定有效成分的含量。结果葛根素、芍药苷，小檗碱进样量分别在0.021～0.210μg，r=0.9999；0.036～0.540μg，r=0.9999;0.034～0.408,r= 0.9999范围内线性关系良好。RSD值分别2.28%,0.75%,0.93%.结论该方法操作简单，分析速度快且有良好的重现性和稳定性。因此使用此法可以对儿童回春颗粒中的葛根素，芍药苷、小檗碱苷、进行含量测定。

儿童回春颗粒;高效液相;葛根;芍药苷;小檗碱;含量测定

1 试剂与仪器

仪器：高效液相色谱(批号：Aglient美国安捷伦公司)，超声波清洗器((批号：AS3120奥特恩斯仪器有限公司)，高速中药粉碎机，（DFT-200温岭市林大机械有限公司）。试剂：葛根素（中国药品生物制品检定所，批号：0752-9806），芍药苷（中国药品生物制品检定所，批号：110736-200933），盐酸小檗碱（中国药品生物制品检定所，批号110713-200609），三种预测成分对照品；儿童回春颗粒（德昌祥），来源：贵州汉方药业有限公司（批号：141101，1503108,131015）。

2 方法与结果

流动相溶液配制：配置0.05%的磷酸水溶液：取超纯水于1000ml的量筒中，精密量取磷酸（85%）水溶液0.56 ml至1000ml量筒中，定容，震荡均匀，在抽滤瓶口覆盖0.45 μm的水相微孔滤膜，抽滤，加少量磷酸水溶液抽滤，润洗，再抽滤剩下的磷酸水溶液。

对照品溶液的配制：精密称取葛根素、芍药苷，小檗碱对照品2.1 mg、1.8mg、3.4mg依次加入至5 mL、5 mL、5mL的容量瓶中。加入一定量的甲醇，并使用超声仪对其超声溶解30 min，冷却到室温。用移液管量取各对照品溶液0.5mL，1ml，0.5ml集中加入到10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，得对照品溶液，冷藏。对照品的浓度分别为：葛根素：0.021 mg/mL，芍药苷；0.036 mg/mL小檗碱：0.034mg/mL。

供试品溶液的配制：取儿童回春颗粒一袋，研磨，粉末备用。称取粉末适量，用含60%甲醇（分析纯）和0.6%盐酸溶解，转移到25ml的容量瓶中，加提取溶剂，在超声仪中超声提取60min；提取上层清液，过滤，滤渣继续溶解，继续在超声仪中超声30min，抽滤，提纯，将所得过滤液冷却至室温用提取溶剂定容置刻度线处，震荡，摇匀，静置，得供试品溶液，留取备用。

色谱条件设定：色谱柱：LNAAP 1057001 TC-C18(2)键和硅胶柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）；柱温为25℃；初始进样条件设定为：乙腈5%、0.05%磷酸水溶液95%；流速0.8 mL·min-1；葛根素、芍药苷，小檗碱检测波长分别为：205 nm、230nm、350nm；流动相：同时采用（B）乙腈及（C）0.05%磷酸水溶液的混合溶液

含量测定试验：取儿童回春颗粒三个批号的样品各三份，按相同的制备方法制备供试品溶液。在设定好的色谱条件下分别进样（进样量为10μL），测定葛根素，芍药苷，盐酸小檗碱的含量。可以计算出葛根素，芍药苷，小檗碱的含量分别1.22mg/ g，0.78mg/g，1.04mg/g。由结果可知，葛根素分别为485.4，477.0，477.4下的含量（mg/g）分别为1.007，0.983，0.984对应的RSD值为（%）1.783、1.269、0.947，芍药苷在峰面积64.8、49.8、58.8下的含量分别为0.597、0.467、0.544，对应的RSD值为（%）4.798、0.853、2.493，小檗碱在峰面积159.6、178.9、176.4下的含量分别为0.811、0.901、0.890，对应的RSD值为（%）1.623、0.626、1.771。

3 结语

本实验采取了不同流动相乙腈-甲醇-水，乙腈-0.05%的磷酸水溶液-甲醇进行试验，在用乙腈-甲醇-水为流动相进行试样时，发现所得谱图峰形较好，但三种成分没有分开，分离效果不好。通过查找文献，最终确定加入少量磷酸溶液，通过在实验条件下不同比例的试样，最终确定乙腈-甲醇-0.05%的磷酸水溶液作为流动相，通过梯度洗脱的方法，使三种成分得以分离。

考虑到小檗碱是季胺碱，在水中的溶解度不大，向其中加入6%盐酸，使盐酸和小檗碱成盐，增加小檗碱的溶解度，以70%的甲醇和6%的盐酸溶液为溶剂,小檗碱的峰形较好,但是基线漂移的很严重,可能是因为甲醇浓度果高引起的。

[1]黄芳兰.儿童回春颗粒临床疗效研究[J].广西柳州钢铁公司医院,2011,10(4),1～2.

[2]朱明华,胡平.仪器分析.第四版.北京高等教育出版社[M].2008,第66～67.

[3]朱明华,胡平.仪器分析.第四版.北京高教育出版社[M].2008,,第84～85.