注射用三七提取物的纯化方法优选

2017-03-03蒋德生张晓丽祝涛王能昆李剑

化工管理 2017年17期

关键词：转移率明胶提取液

蒋德生张晓丽祝涛王能昆李剑

(1云南瑞宝生物科技股份有限公司，云南昆明 651701)

(2云南希陶绿色药业股份有限公司，云南昆明 651701)

注射用三七提取物的纯化方法优选

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(1云南瑞宝生物科技股份有限公司，云南昆明 651701)

(2云南希陶绿色药业股份有限公司，云南昆明 651701)

本实验的主要目的是为了对三七提取物的纯化方法进行优选，从而提高三七提取物的纯度。其中需要采用明胶沉淀法、澄清剂法、石硫醇法、碱性醇沉法和大孔吸附树脂法五种方法对于三七提取物进行处理，同时根据三七总皂苷的转移率、质量分数、杂质的清除效果和复溶性的相关数据作为实验指标进行优化设计。经过多次实验发现五种试验方法各有利弊，应该在实验过程中扬长避短。

三七；注射用三七提取物；纯化；碱性醇沉法；大孔吸附树脂法

实验小组人员通过对于纯化实验的实验条件和实验结果进行比对发现，五种纯化方法在单独使用时不能实现最佳的实验效果。同时参考国内外的先进实验进行比对后，采用碱性醇沉法和大孔吸附树脂法相结合的方式以提纯三七提取物。实验结果表明三七总皂苷的转移率、质量分数、杂质的清除效果和复溶性都出现一定程度的增长，杂质的清除效果较之前的实验数据比较好复溶性较好。因此本文采用五种实验方法分别对于三七提取物进行纯化实验，记录相关数据并进行对比分析。

1 实验准备

1.1 实验说明

随着社会的发展及人们生活水平的提高，越来越多的患者受心脑血管疾病的折磨，对三七、其主要有效成分PNS及其制剂的需求日益剧增。其相关研究也越来越深入、透彻。与西医的药剂制作过程不同，中医在药剂的制作过程中格外重视中药提取物的纯化过程，如使用明胶沉淀法、澄清剂法、石硫醇法、碱性醇沉法和大孔吸附树脂法五种方法来进行三七提取物的纯化。同时，在进行实际的实验过程中发现这五种提纯方法各有利弊，在实际的应用中，应该根据实际情况、药材用量等来确定采用合适的纯化方法进行提取实验。与此同时做好记录工作，通过对比不同实验方法从而选择最有效、实验效果最佳的纯化方法及流程，从而提高三七提取物的质量以及达到国家相关的质量要求标准。

1.2 实验仪器和试剂

实验仪器：紫外可见分光光度计；旋转式蒸发仪，用于药剂的蒸发、提纯过程；循环水式多用真空泵；PH值或酸度计；ZT⁃Cl+1天然澄清剂；HPD300型大孔吸附树脂。

实验药剂：五加科植物三七的干燥根茎；人参皂普Re对照品；α-萘酚；香草醛；冰醋酸；无水乙醇。

实验过程：首先，取适量三七药材加入13倍量30%的无水乙醇在70℃条件下进行加热回流，持续加热40分钟，以上步骤重复两次。同时将三七溶解液进行过滤处理后，取适量的三七提取液，加入0.2mL5%香草醛冰醋酸溶液、0.8mL高氯酸溶液并将试管密封紧塞后摇匀，在60℃水浴条件下进行恒温加热15min后立即取出冷却。在向溶解液内加入5mL冰醋酸摇匀,记录吸光、分光度值。经过数据对比后发现纯化后的总皂苷质量是纯化前的1.33倍，并且这两者之比相当于三七总皂苷的转移率；并且纯化后的三七总皂苷固体物的总量为纯净度。根据相关理论说明将纯化后干燥冷却的固体物1mg加水10mL振摇溶解，同时加入检验鞣质、蛋白质和树脂在震荡后置灯检箱下观察是否澄清。

2 实验方法

2.1 明胶沉淀法

明胶沉淀法主要是利用明胶可以包裹大颗粒物质进行沉淀的特性进行三七提取液的纯化实验，因此分别取药量为1.0、2.0、3.0g∕mL三七提取液，用盐酸调整pH值之后加入5%明胶溶液，搅拌至不再产生沉淀为止。冷藏12小时之后过滤并加入95%无水乙醇，调醇体积分数至75%,再次冷藏12小时，过滤、定容后检查各项指标后发现，随着药材中三七的质量分数逐渐上升，三七总皂苷的转移率明显降低，然而三七总皂苷的质量分数在逐渐上升。

2.2 ZTC1+1天然澄清剂法

与上述实验方法相似，取含药物含量为0.10、0.15、0.20g∕mL三七提取液，按照提取液质量浓度不同分别分为A、B两组。A组分的量为1×三七浓缩液体积×1%；B组分的量为2×三七浓缩液体积×1%，两组均加入1%澄清剂，冷却后进行过滤、定容以及检查。通过比较相关数据可知，生药药材质量浓度为0.20g∕mL时，三七提取物的转移率最高，此时的鞣质蛋白质检查均呈阴性，因此在考虑提取液的质量浓度条件的情况下，选定药材提取液中的含药量、质量浓度等。

2.3 石硫醇法

同上，取含三七提取液的质量浓度为0.1、0.2、0.3、0.4g∕mL溶液,并加入25%石灰乳调从而使其pH值调整为11.5左右,搅匀,静至2小时，再用20%硫酸回调pH值至6.0，经过搅拌、过滤、冷却加入95%乙醇调整提取物的质量分数为75%，后经过冷藏12小时。再经过过滤、定容等步骤，得出相关实验数据。由此可知，为提高三七总皂苷的转移率、质量分数的问题时，应该讲溶液提取浓度控制在0.3～0.4g∕mL之间，同时考虑到浓缩的问题，由于在质量浓度为0.4g∕mL时比0.3g∕mL更费时费力，因此应该采用质量浓度为0.3g∕mL的三七提取液。

2.4 实验分析

不同的实验提纯方法各有其优弊端，如明胶沉淀法可以有效的去除三七提取液中的大分子杂质，然而利用明胶进行沉淀也向溶液中引入了明胶这种不可自然降解的物质，从某种程度上来说，它也相当于引入另一种杂质，而且明胶中含有蛋白质成分导致溶液检验时呈阳性。除此之外，一旦药材提取液的质量浓度过高，就会使得溶液内的有效物质进行聚集而被明胶当成分子物质进行包裹，导致许多有效成分藏在明胶和蹂质沉淀物中，从而导致提纯后的三七提取物的质量分数下降，使得其损失率上升。与此同时，利用明胶进行试验后的提纯溶液不能满足相关的质量要求，其质量分数也无法满足重要注射剂中的技术要求。