HPLC法同时测定不同产地五味子中4种木脂素类成分的含量Δ

沈晓君，刘玉翠，曲晓波，雷钧涛，肖井雷#（.长春中医药大学药学院，长春 07；.吉林紫鑫药业股份有限公司，长春 00；.吉林医药学院药学院，吉林吉林 0）

HPLC法同时测定不同产地五味子中4种木脂素类成分的含量Δ

沈晓君1＊，刘玉翠2，曲晓波1，雷钧涛3，肖井雷1#（1.长春中医药大学药学院，长春 130117；2.吉林紫鑫药业股份有限公司，长春 130031；3.吉林医药学院药学院，吉林吉林 132013）

目的：建立同时测定五味子中4种木脂素类成分的含量，并比较不同产地间的差异。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil ODS-C18，流动相为乙腈-水（梯度洗脱），流速为1.0 mL/min，检测波长为217 nm，柱温为30℃，进样量为10µL。结果：五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素检测进样量线性范围分别为0.375 3～2.251 8 μg（r＝0.999 6）、0.056 8～0.341 1 μg（r＝0.999 8）、0.077 4～0.464 4 μg（r＝0.999 3）、0.310 5～1.863 0 μg（r＝0.999 8）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2.0%；加样回收率分别为97.94%～100.30%（RSD＝0.98%，n＝6）、97.59%～99.61%（RSD＝0.73%，n＝6）、100.86%～103.10%（RSD＝0.83%，n＝6）、98.39%～101.03%（RSD＝1.03%，n＝6）。结论：该方法操作简便，精密度、稳定性、重复性良好，可用于五味子中4种木脂素类成分含量的同时测定；不同产地五味子中上述4种木脂素类成分含量具有较大差异。

不同产地；五味子；木脂素；高效液相色谱法

五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果实。我国五味子资源丰富，家种也比较成熟，东三省是其主要产区，内蒙古、河北、山西、北京也有少量产出[1]。现代研究表明，五味子主要含有挥发油、有机酸、维生素、木脂素、三菇、倍半菇及多糖等多种化学成分，木脂素类成分为其最主要的活性成分，主要含有五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子酯甲等[2]。为了准确评价五味子药材的质量，本课题组对第四次全国中药资源普查和药材市场流通的31份商品进行了木脂素类成分的比较研究，以为五味子药材商品的质量评价与标准提升提供科学依据。

1 材料

1.1 仪器

LC-2010AHT型高效液相色谱（HPLC）仪，包括二极管阵列检测器（日本Shimadzu公司）；SB-3200D型超声波清洗机（杭州法兰特超声波科技有限公司，功率：250 W，频率：40 kHz）；AL204型电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 试剂

五味子醇甲对照品（批号：110857-201412）、五味子酯甲对照品（批号：111529-201411）、五味子甲素对照品（批号：110764-201312）、五味子乙素对照品（批号：110765-201312）均购自中国食品药品检定研究院，纯度均＞98%；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

1.3 药材

笔者采集了22个产地五味子药材，并收集了9个市售商品（见表1），经长春中医药大学姜大成教授鉴定均为真品。

表1 五味子药材来源Tab 1 Source of S.chinensis

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil ODS-C18（250 mm×4.6 mm，5µm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（洗脱程序见表2）；流速：1.0 mL/min；检测波长：217 nm；柱温：30℃；进样量：10µL[3-6]。

表2 梯度洗脱程序Tab 2 Gradient elution program

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液 分别精密称取各待测成分对照品适量，加甲醇溶解，制成单一对照品贮备液。精密量取上述单一对照品贮备液各适量，制成五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素质量浓度分别为0.125 1、0.018 95、0.025 8、0.103 5 mg/mL的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取样品粉末约0.3 g（过3号筛），精密称定，置于25 mL量瓶中，加甲醇约2.0 mL，超声处理20 min，加甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 系统适用性试验

取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。结果表明，理论板数以各待测成分峰计均＞4 000；分离度＞1.5，各成分基线分离良好。

2.4 线性关系考察

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

分别精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液3、5、8、10、12、15、18µL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分进样量（x，μg）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程与线性范围，详见表3。

表3 回归方程与线性范围Tab 3 Regression equation and linear range

2.5 精密度试验

取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素峰面积的RSD分别为0.06%、0.11%、0.09%、0.08%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取“2.2.2”项下供试品溶液（编号：2）适量，分别于室温下放置0、2、4、8、12、18、24 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素峰面积的RSD分别为0.07%、0.15%、0.11%、0.09%（n＝7），表明供试品溶液在室温放置24 h内基本稳定。

2.7 重复性试验

精密称取同一批样品（编号：2）适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，共6份，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素峰面积的RSD分别为1.5%、0.9%、1.4%、1.2%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量样品（编号：2）适量，共6份，分别加入一定质量的待测成分对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表4。

表4 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 4 Results of recovery test（n＝6）

2.9 样品含量测定

取31批次样品各适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量[7-10]，结果见表5。

表5 样品含量测定结果（n＝3，%）Tab 5 Results of content determination of samples（n＝3，%）

续表5Continued Tab 5

3 讨论

笔者比较了甲醇、乙酸乙酯和乙醇3种溶剂对木脂素提取率的影响，结果显示甲醇提取效果最佳；同时考察了超声提取法和加热回流提取法，结果显示超声提取效率高，并以提取20 min效果最佳。

由结果可知，五味子醇甲的含量范围在0.365 3%～0.818 3%，其中吉林省桦甸市沿河村产者含量最低，吉林省抚松县松江河镇产者含量最高；五味子酯甲的含量范围在0.048 4%～0.263 4%，其中辽宁省丹东市宽甸县宽甸镇产者含量最低，吉林省抚松县松江河镇产者含量最高；五味子甲素的含量范围在0.056 9%～0.365 1%，其中辽宁省丹东市宽甸县宽甸镇产者含量最低，河北省承德市热河产者含量最高；五味子乙素的含量范围在0.185 2%～0.438 6%，其中四川荷花池中药材市场商品含量最低，黑龙江省虎林市产者含量最高。

通过对31份五味子药材商品中4种木脂素类成分的分析，得出不同产地五味子中木脂素类成分含量具有较大差异性，品质间存在一定的差异。本研究为多指标成分控制五味子饮片质量提供了科学依据，同时为进一步研究五味子及其制剂的质量控制、药理活性以及临床使用提供了一定参考。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：66.

[2] 李霞，贾晓斌，魏惠华，等.五味子提取工艺的优化研究[J].中国药房，2007，18（6）：424-426.

[3] 胡俊扬，陆兔林，毛春芹，等.HPLC法同时测定不同产地五味子中8种木脂素类成分[J].中成药，2012，34（2）：313-315.

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Simultaneous Determination of 4 Lignans in Schisandra chinensis from Different Habitats by HPLC

SHEN Xiaojun1，LIU Yucui2，QU Xiaobo1，LEI Juntao3，XIAO Jinglei1（1.School of Pharmacy，Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China；2.Jilin Zixin Pharmaceutical Co.，Ltd.，Changchun 130031，China；3.School of Pharmacy，Jilin Medical University，Jilin Jilin 132013，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the simultaneous determination of 4 lignans in Schisandra chinensis，and compare the differences among different habitats.METHODS：HPLC was performed on the column of Hypersil ODS-C18with mobile phase of acetonitrile-water（gradient elution）at a flow rate of 1.0 mL/min，the detection wavelength was 217 nm，column temperature was 30℃ and injection volume was 10 μL.RESULTS：The linear range was 0.375 3-2.251 8 μg for schizandrol A（r＝0.999 6），0.056 8-0.341 1 μg for schisantherin A（r＝0.999 8），0.077 4-0.464 4 μg for deoxyschizandrin（r＝0.999 3）and 0.310 5-1.863 0 μg for schisandrin（r＝0.999 8）；RSDs of precision，stability and reproducibility were lower than 2.0%；recoveries were 97.94%-100.30%（RSD＝0.98%，n＝6），97.59%-99.61%（RSD＝0.73%，n＝6），100.86%-103.10%（RSD＝0.83%，n＝6），98.39%-101.03%（RSD＝1.03%，n＝6），respectively.CONCLUSIONS：The method is simple with good precision，stability and reproducibility，and can be used for the simultaneous determination of lignans in S.chinensis；there are quite large differences in the contents of 4 lignans in S.chinensis from different habitats.

Different habitats；Schisandra chinensis；Lignan；HPLC

R284.1

A

1001-0408（2017）03-0387-04

2016-02-25

2016-06-12）

（编辑：张 静）

中医药行业科研专项（No.201207002-05）；吉林省中医药科技项目（No.2014-Q37）；吉林省教育厅“十三五”科学技术研究项目（No.吉教科合字〔2016〕第25号）

＊讲师，硕士。研究方向：药物质量分析。E-mail：3089028512 @qq.com

#通信作者：副教授，硕士。研究方向：中药资源与质量标准化。电话：0431-81104585。E-mail：cc-xjl@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.03.28