兰索拉唑中杂质的研究

汤媛媛， 张 佳， 糜志远

(湖北工业大学生物工程与食品学院， 湖北 武汉 430068)

兰索拉唑中杂质的研究

汤媛媛， 张 佳， 糜志远

(湖北工业大学生物工程与食品学院， 湖北 武汉 430068)

建立高效液相色谱法测定兰索拉唑中已知杂质的方法。方法:采用Agilent C18(4.6 mm×250 mm，5μm)色谱柱，流动相A为水，B为V(乙腈)∶V(水)∶V(三乙胺)=160∶40∶1的混合液，用磷酸调节pH至7.0，梯度洗脱，检测波长284 nm，流速1mL/min，进样量20 μL。结果:兰索拉唑与各已知杂质均分离良好，最低检测限与最低定量限分别为1.0～2.0 ng与3.0～4.0 ng。结论:该方法简便、快速、灵敏度高,可用于兰索拉唑杂质的检查。

兰索拉唑； 杂质； 高效液相色谱法

消化系统疾病是一种常见病和多发病，质子泵抑制剂是目前治疗消化性溃疡病抑制胃酸分泌的首选药物[1]。兰索拉唑是继奥美拉唑之后第二个质子泵抑制剂[2]，1992年由日本武田公司研制上市。目前，国内兰索拉唑的剂型有肠溶片、肠溶胶囊、冻干粉针剂，规格有15 mg和30 mg等，常用制剂为肠溶胶囊。

化学药品中杂质控制是药品质量控制中的一个重要内容。为了提升本品的现有标准以得到更为优异的产品，本研究旨在对兰索拉唑中的已知杂质(表1)[3-6]进行定性、定量分析方法的研究，为本品标准的提升提供参考。

目前国内外“兰索拉唑”标准(USP，Ph.Eur，中国药典2010年版第一增补本)中均采用高效液相色谱法对兰索拉唑中的杂质进行检查，中国药品标准中采用等度法，而国外标准中采用梯度法。本文拟对上述两种方法进行比较，并得到一种较为有效的检查方法。

表1 兰索拉唑杂质化学结构

本研究拟采用梯度洗脱法对上述杂质进行研究，得到最佳分离条件。参照美国药典“兰索拉唑”有关物质项下色谱条件，以及美国药典、欧洲药典及相关文献资料中对“兰索拉唑”原料中杂质的界定，对已知杂质兰索拉唑砜、兰索拉唑氮氧化物、兰索拉唑硫醚和1H-2-巯基-苯并咪唑等分别进行了研究。

1 仪器与药品

1.1 仪器

Dionex Ultimate 3000型双三元液相色谱仪；VWD-3100双光速可变波长紫外可见光检测器；wps-3000sl·Analytical分析型全自动进样器；METTLER TOLEDO DELTA 320 pH计，Sartorius Stedim超纯水机。

1.2 药品及对照品

兰索拉唑对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100709-201304，纯度99.8%)；杂质A对照品(兰索拉唑砜，美国药典会，批号：Lot：HOI193，纯度99.26%)；杂质B对照品(兰索拉唑氮氧化物，中美华世通公司，批号：WS0071-27-03，纯度98.5%)；杂质C对照品(兰索拉唑硫醚，美国药典会，批号：Lot：FOJ371，纯度98.9%)；杂质D 对照品(1H-2-巯基-苯并咪唑，阿拉丁试剂公司，批号：36129，纯度98.0%)；甲醇(色谱纯，美国Fisher公司)：乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)；三乙胺(色谱纯，批号：20130918，国药集团化学试剂有限公司)；磷酸(色谱纯，批号：20121212，国药集团化学试剂有限公司)；超纯水(自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性实验

以十八烷基键合硅胶为填充剂，以水作为A液，混合液V(乙腈)∶V(水)∶V(三乙胺)=160∶40∶1为B液，用磷酸调节pH至7.0，检测波长284 nm，流速1mL/min，进样量20 μL，从0到40 min，B液由10%到80%；40到50 min，B液保持80%；50到51 min，B液由80%到10%；51到60 min，B液保持10%[7-8]。兰索拉唑与兰索拉唑杂质A的分离度大于5(图1)。

图 1 兰索拉唑系统适应性实验色谱图

2.2 测定法

避光操作。精确称取兰索拉唑杂质对照品适量置于10 mL量瓶中，用稀释液(V(0.1 mol·L-1NaOH)∶V(CH3OH)=75∶25)溶解并稀释定容至刻度，0.22 μm微孔滤膜过滤，取上述对照溶液20 μL，注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的15%～20%。记录色谱图，采用自身对照法计算，即得。

2.3 兰索拉唑杂质方法学研究

2.3.1 检测下限 照2.1项下色谱条件测定，调整检测灵敏度及进样量，测定峰高为基线噪声3倍时的进样量，作为最低检出限。结果见表2。

2.3.2 定量限 照2.1项下色谱条件测定，调整检测灵敏度及进样量，测定峰高为基线噪声10倍时的进样量，作为定量限。结果见表2。

2.3.3 线性方程 精密称取兰索拉唑各杂质对照品适量，用流动相溶解并稀释制成0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mg/L的溶液，各取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得线性方程。结果见表2。

表2 兰索拉唑杂质研究方法学实验结果

2.3.4 杂质混合物 分别精确称取兰索拉唑杂质A，B，C，D和兰索拉唑对照品适量(约10.0 mg)，置于10 mL量瓶中，用稀释液(V(0.1 mol·L-1NaOH)∶V(CH3OH=75∶25)溶解并稀释定容至刻度，0.22 μm微孔滤膜过滤，备用。照2.1项下条件测定，记录色谱图(图2)。结果显示，兰索拉唑和4个主要杂质的分离良好(表3)。

图 2 兰索拉唑杂质混合物HPLC图

名称响应值相对保留时间/min兰索拉唑1．01．0兰索拉唑杂质A0．821．1兰索拉唑杂质B1．30．8兰索拉唑杂质C0．791．2兰索拉唑杂质D0．780．5

2.4 中国药品标准方法(中国药典2010年版第一增补本)

该方法为等度法[9]，具体为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(推荐色谱柱为：250 mm×4.6 mm，5 μm或能效相当的色谱柱)；以甲醇-水-三乙胺-磷酸(体积比为600∶400∶5∶1.5，用磷酸溶液(1→10 mL)调节pH值至7.3)为流动相，检测波长为284 nm。按照该方法得到色谱图(图3)。

图 3 兰索拉唑杂质HPLC图

由色谱图可知，该方法虽然分离度可满足要求，但杂质D保留时间太短(5.1 min)，容易和溶剂峰重叠，不利于杂质的判断；而杂质B的保留时间太长(91 min)，且峰型不好，使检测效率降低，在实际应用中不太适用。

3 讨论与结论

目前文献报道的多为兰索拉唑含量的测定方法及注射用兰索拉唑有关物质的检测方法，并未对已知杂质进行逐项研究和规定。美国药典中对几个主药杂质的响应值、相对保留时间和限度进行了规定，其中兰索拉唑砜、兰索拉唑氮氧化物、兰索拉唑硫醚为美国药典中规定的检查杂质，1H-2-巯基-苯并咪唑为欧洲药典中规定的检查杂质。考虑到1H-2-巯基-苯并咪唑为本品原料合成中的主要中间体，故笔者对其也一并进行了研究。将已知量的杂质对照品和兰索拉唑原料对照品进行混合洗脱，

根据保留时

间计算相对保留时间，结果显示：响应因子和相对保留时间和美国药典规定的基本一致，即杂质A，响应因子0.82，相对保留时间1.1 min；杂质B，响应因子1.3，相对保留时间0.8；杂质C，响应因子0.79，相对保留时间1.2；杂质D，响应因子0.78，相对保留时间0.5 min，其他未知杂质响应因子1.0。按上述方法对兰索拉唑的杂质进行控制，可有效提高国产兰索拉唑的质量。

[1] 任萃文.HPLC梯度洗脱法测定兰索拉唑含量和有关物质[J].食品与药品，2012，14(5)：185-186.

[2] 曹永安，刘留成，吉同琴，等.注射用兰索拉唑制备、质量控制及稳定性考察[J].药物分析杂志，2009，29(9)：1510.

[3] 俞小弟，金文虎，许煦，等.兰索拉唑的合成工艺改进[J].合成化学，2007,15(5)：648.

[4] Rane A，Pathak R K，Kaushik C P ,et al.A practical one pot synthesis of 2-[2-(pyridylmethyl)-thio]-1H-benzimidazoles[J]．Synth Commun．2002，32(8)：1211-1218.

[5] Reddy G M，Mukkanti K，Kumar T L，et al.Synthesis and characteration of metabolites and potential impurites of lansoprazole ,an antiulcerative drug[J]. Synth Commun，2008,38(20)：3477-3489.

[6] 夏桂民，王丽云，冯超敏，等.兰索拉唑肠溶胶囊中杂质的结构确证、检查及控制[J].药物分析杂志，2012,32(6)：1022-1025.

[7] European Pharmacopoeia Commission.European pharmacopoeia[M].7th ed.Strasbourg,France:European Directorate for the Quality of Medicine,2010:2219.

[8] USP[S]. 30th ed. 2012. 3642-3643.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010版第一增补本[M].北京：中国医药科技出版社，2010:282．

[责任编校： 张 众]

Research on Impurities of Lansoprazole

TANG Yuanyuan，ZHANG Jia，MI Zhiyuan

(SchoolofFoodandBiologicalEngin.，HubeiUniv.ofTech.,Wuhan430068,China)

The study established an HPLC method for the determination of known impurities in Lansoprazole. It adopted a Agilent C18 (250mm×4.6mm，5μm) column, pure water (A)-acetonitrile: water: triethylamine (160:40:1)(B) ,adjusted to pH=7.0 by phosphoric acid as mobile phases, with the detection wavelength of 284 nm,the flow rate of 1.0mL·min 1 and the injection volume of 20μL. Experiments show that Lansoprazole and its impurities were well separated ,and the limit of detection (LOD) and limit ofquantification (LOQ) of lansoprazole impurities were between 1-2ng and3-4ng, respectively. The results show that the method is fast, simple and sensitive, and suitable for the determination of the impurities in lansoprazole.

Lansoprazole；impurities；HPLC

2016-10-07

汤媛媛(1992-)， 女，湖北武汉人，湖北工业大学硕士研究生，研究方向为药物制剂

糜志远(1963-)，男，湖北武汉人，湖北工业大学副教授，研究方向为药物制剂

1003-4684(2017)01-0109-03

R975.6, R927.11

A