不同沙棘品种间芦丁含量的比较

张琼姝，王斌，杨雪芳，张洋洋，郭海利，张小民

（1.山西大学生命科学学院，山西太原030006；2.山西金科海生物技术有限公司，山西太原030006）

不同沙棘品种间芦丁含量的比较

张琼姝1，王斌1，杨雪芳1，张洋洋1，郭海利2，张小民1

（1.山西大学生命科学学院，山西太原030006；2.山西金科海生物技术有限公司，山西太原030006）

通过反相HPLC法，采用Diamonsil@C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），流动相甲醇-0.5%磷酸（33∶67），检测波长254 nm，柱温30℃，流速1.0 mL/min，进样量20 μL，对太谷试验区的6个杂交沙棘品种和本地野生中国沙棘叶中的芦丁含量进行了测定。结果表明，杂优1号芦丁含量为0.081 3%，杂优2号为0.052 3%，杂优10号为0.130 0%，杂优12号为0.132 7%，杂优54号为0.068 2%，丰宁雄为0.086 9%，中国沙棘♀为0.136 1%，中国沙棘♂为0.146 6%。研究结果不仅可为沙棘品种鉴定、适应性研究和种植推广提供参考，同时也可为进一步的产品开发提供依据。

沙棘；芦丁；反相高效液相色谱

沙棘（Hippophae rhamnoides L.）是我国防风固沙的先锋树种[1]，并且其叶果含有极高的营养物质和生物活性物质，被广泛应用于食品、化妆品、医药和轻工业等领域，故有较高的社会和经济价值[2-4]。2012年水利部沙棘中心在太谷建立了杂交沙棘苗木种植试验区，从内蒙古鄂尔多斯市东胜区九成宫沙棘育种基地引进了杂交沙棘6个雌性沙棘品种和1个雄性沙棘品种，共计5 000多株。2016年是太谷试验区引种第4年，除了每年对物候期、适应性及叶果产量调查外，还对太谷试验区各个品种以及本地的中国沙棘的化学成分进行了测定。近年来，越来越多的人研究沙棘叶和果中的化学成分，温秀凤等[5]对亲子群体沙棘叶黄酮成分含量及其变化进行了研究；李春英等[6]进行了沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较；李德鑫等[7]用HPLC法测定沙棘颗粒中的芦丁含量；赵二劳等[8]测定了沙棘叶中绿原酸和芦丁的含量；李敏等[9]用HPLC法同时测定中亚沙棘中的原儿茶酸、芦丁和异鼠李素的含量；吴哲等[10]用HPLC测定了沙棘叶中科罗索酸的含量；田晓东等[11]对沙棘叶中科罗索酸的浓缩工艺进行了研究；张璐等[12]确定了沙棘浓缩物中科罗索酸的测定方法；付阳等[13]采用UPLC-ESIMS法同时测定沙棘黄酮中5种主要成分含量。但通过高效液相色谱法对太谷试验区的不同品种沙棘叶芦丁含量的测定尚未见报道。

评价一个沙棘品种，不仅要从适应性、叶果产量等方面入手，也要进一步对其化学成分，尤其是生物活性物质的含量进行研究，方能对一个品种作出全面评价。本研究通过高效液相色谱法对水利部沙棘中心太谷试验区的6个品种以及本地野生中国沙棘叶中的芦丁含量进行了测定，旨在为品种鉴定以及进一步的种植推广提供参考。

1 材料和方法

1.1 仪器

高效液相色谱仪，紫外可见检测器，N3000色谱工作站，电子天平（AB104-N，瑞士梅特勒-托利多）；超声波清洗机（KQ5200DB型，昆山市超声仪器有限公司）；循环真空水泵（SHZ-Ⅲ型，上海亚荣生化仪器有限公司）；纯水机（SMART-N，上海康雷分析仪器设备有限公司）。

1.2 试剂

芦丁对照品（购自中国药品生物制品鉴定所），甲醇为色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。

1.3 材料

供试6个杂交沙棘品种杂优1号、杂优2号、杂优10号、杂优12号、杂优54号和丰宁雄的叶于2016年9月12日采自山西省太谷试验区。中国沙棘叶于2016年9月12日采自山西省祁县。将沙棘叶置于干燥箱中60℃干燥后粉碎，过0.177 mm筛备用。

1.4 方法

1.4.1 色谱条件色谱柱Diamonsil@C18（5 μm，4.6 mm×150 mm），流动相甲醇-0.5%磷酸（33∶67），检测波长254 nm，柱温30℃，流速1.0 mL/min，进样量20 μL。

1.4.2 溶液的配制

1.4.2.1 对照品溶液的配制精密称取芦丁对照品31.25 mg，置25 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密称取2 mL储备液，置于25 mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度，摇匀，作为对照品溶液。

1.4.2.2 供试品溶液的配制取沙棘叶粉末各5 g，置于50 mL锥形瓶中，加50 mL甲醇称质量，超声提取45 min，取出放冷，再称质量，用甲醇补足失去的质量，摇匀，过滤，即得8种供试品。

2 结果与分析

2.1 芦丁对照品色谱分析

在1.4.1色谱条件下得到芦丁对照品的色谱图，如图1所示。

2.2 线性关系考察

分别精密吸取芦丁对照品溶液1，5，10，15，20 μL，在1.4.1色谱条件下，分别注入液相色谱仪进行测定。以芦丁的进样量X（μg）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，得回归方程y＝1.0×106x，r＝0.996 2（n＝5）。结果表明，对照品进样量为0.25～5 μg，芦丁进样量与峰面积呈现良好的线性关系（图2）。

2.3 精密度试验

分别吸取1.25 mg/mL的芦丁标品溶液20 μL，重复进样6次。结果表明，重复峰面积的RSD为1.32%，精密度较好。

2.4 重复性试验

取沙棘杂优2号9月供试品溶液6份，在1.4.1色谱条件下进行测试。结果表明，样品中芦丁平均含量为1.045%，RSD为1.43%，重复性较好。

2.5 稳定性试验

取沙棘杂优2号9月供试品溶液，在1.4.1色谱条件下分别于0，2，4，6，8，12 h进样测定。结果表明，芦丁峰面积的RSD为1.03%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.6 加样回收试验

分别称取5份已知芦丁含量的同一样品粉末5 g，分别置于50 mL具塞锥形瓶中，每个锥形瓶中分别加入相应量的对照品溶液，按供试品溶液的制备方法制备5份供试品溶液，在1.4.1色谱条件下测定。试验结果表明，试验中测定样品中的芦丁含量，加样回收率均符合要求（表1）。

表1 沙棘加样回收率试验考察结果

2.7 样品含量测定

分别称取不同沙棘叶样品5 g，每样平行3份，按1.4.2.2供试品溶液的配制方法制备供试品溶液，注入液相色谱仪，按1.4.1色谱条件测定峰面积，计算样品中的芦丁含量（表2）。

从表2可以看出，太谷试验区杂交品种中杂优12号的芦丁含量最高，为0.132 7%，与本地野生的中国沙棘相比基本一致，中国沙棘（♀）0.136 1%，中国沙棘（♂）0.146 6%，杂优2号的芦丁含量最低，为0.052 3%。

表2 不同品种沙棘叶芦丁含量%

3 讨论

目前对沙棘叶黄酮的测定主要是对总黄酮的测定，最初使用的方法有化学方法，如肖蓉等[14]根据黄酮类化合物与金属离子形成稳定的呈色螯合物这一性质，应用比色法测定醋柳总黄酮含量，之后使用较多的方法是分光光度法，如侯霄等[15]使用紫外分光光度法测定山西不同产地沙棘叶中总黄酮的含量。但对总黄酮中各成分含量的报道不多，邹运香等[16]、赵二劳等[8]使用了高效液相色谱法对黄酮各组分含量进行测定，尤其是付阳等[13]采用超高效液相-电喷雾质谱法同时测定沙棘叶黄酮中5种组分的含量，这些都为植物提取物中化合物的测定提供了更准确的方法。本研究首次采用高效液相色谱法测定了杂交品种和山西野生沙棘叶中芦丁的含量，不仅为品种调查和鉴定提供依据，也为进一步品种推广和品种的开发利用提供参考。

芦丁有降低毛细血管通透性和脆性的作用，保持及恢复毛细血管的正常弹性，用于防治高血压、脑溢血、糖尿病、视网膜出血和出血性紫癜等，也有抗炎和抗过敏作用[17-20]。故不同沙棘品种叶中芦丁的含量也可作为其药用价值的一个指标。本研究结果表明，太谷试验区杂交品种中杂优12号芦丁含量最高，为0.132 7%，与本地野生的中国沙棘相比基本一致，中国沙棘（♀）0.136 1%，中国沙棘（♂）0.146 6%。也与赵二劳等[8]通过高效液相色普法所测定的五台县的野生中国沙棘的芦丁含量为0.1%，宁武县的野生中国沙棘的芦丁含量为0.14%相一致。邹运香等[16]所采集的沙棘叶也是9月份在辽宁省建平县的野生沙棘，与本试验采集沙棘叶的月份一致，所使用的测定方法也是高效液相色谱法，其中芦丁含量为0.27%，高于山西祁县的野生中国沙棘。

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分离和分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。随着先进设备和科学的方法对沙棘化学成分深入和广泛的研究，将进一步推动沙棘的开发和利用。

［1］高月萍.沙棘的开发利用价值研究[J].现代农业，2016（3）：82-83.

［2］葛孝炎，史国富，马翠英.沙棘化学成分的研究概况[J].中草药，1986，17（8）：42-44．

［3］程嘉艺，滕丹，李伟，等.沙棘总黄酮对血管内皮细胞保护作用及机制研究[J].中国中西医结合杂志，201l，31（3）：355-358.

［4］朱洪梅，赵猛，王文晖，等.酶法提取沙棘叶中黄酮的研究[J].农业与技术，2008，28（6）：30-32.

［5］温秀凤，卢顺光，金争平，等.亲子群体沙棘叶黄酮成分含量及其变化研究[J].国际沙棘研究与开发，2004，2（3）：16-20.

［6］李春英，王微，赵春建，等.沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较[J].植物研究，2005，25（4）：453-456.

［7］李德鑫，郑亚玉，靳凤云.浅谈用HPLC法测定沙棘颗粒中的芦丁含量[J].求医问药，2012，10（3）：132-133.

［8］赵二劳，王迎进，薛丽，等.反相高效液相色谱法同时测定沙棘叶中绿原酸和芦丁[J].分析科学学报，2012，28（1）：101-103.

［9］李敏，王晓燕.HPLC同时测定中亚沙棘中的原儿茶酸、芦丁和异鼠李素[J].华西药学杂志，2014，29（3）：314-316.

［10］吴哲，李小玉，田晓东，等.HPLC法测定桑叶和沙棘叶中科罗索酸的含量[J].山西农业科学，2014，42（11）：1169-1171.

［11］田晓东，张璐，张琼姝，等.沙棘叶中科罗索酸浓缩工艺初探[J].山西农业科学，2016，44（2）：239-241.

［12］张璐，田晓东，王斌，等.沙棘叶中科罗索酸浓缩物的测定方法[J].山西农业科学，2016，44（1）：30-32.

［13］付阳，王宇坤，刘明博，等.UPLC-ESIMS法同时测定沙棘黄酮中5种主要成分含量[J].内蒙古农业大学学报（自然科学版），2016，37（3）：129-133.

［14］肖蓉，肖卓殷.醋柳总黄酮甙元的含量测定[J].四川医学院学报，1982，13（1）：1-5.

［15］侯霄，万强，付永峰，等.山西各类沙棘叶总黄酮的含量测定[J].国际沙棘研究与开发，2014，12（1）：6-9.

［16］邹运香，张晓光，赵国良，等.沙棘叶中黄酮含量的测定[J].大连轻工业学院学报，1997，16（2）：12-14.

［17］AGUSTIN SALAZAR S，MEDINA JUDREZ L A，SOTO VALDEZ H，et al.Influence of the solvent system on the composition of phenolic substances and antioxidant capacity of extracts of grape（Vitis vinifera L.）marc[J].Australian Journal of Grape&Wine Research，2014，20（2）：208-213.

［18］DAVE OOMAH B，GIUSEPPE MAZZA.Flavonoids and antioxidative activities in buckwheat[J].J Agn Food Chem，1996，44：1746-1750.

［19］臧志和，曹丽萍，钟铃.芦丁药理作用及制剂的研究进展[J].医药导报，2007，26（7）：758-760.

［20］岳兴如，田敏，徐持华，等.荠菜的抗炎药理作用研究[J].时珍国医国药，2O06，17（5）：231.

Comparison of Rutin Content among Different Seabuckthorn Cultivars

ZHANGQiongshu1，WANGBin1，YANGXuefang1，ZHANGYangyang1，GUOHaili2，ZHANGXiaomin1
（1.College ofLife Science，Shanxi University，Taiyuan 030006，China；
2.Shanxi Jinkehai BiotechnologyCo.，Ltd.，Taiyuan 030006，China）

The rutin level of seabuckthron was analysed by using a reversed phase HPLC method with Diamonsil@C18 chromatographic column（5 μm,4.6 mm×150 mm）,mobile phase methanol-0.5%phosphoric acid（33∶67）,a detection wavelength of 254 nm,a column temperature of 30℃,a flow rate of 1.0 mL/min,and sample size of 20 μL.Six hybrid seabuckthorn cultivars in the Taigu experimental area and one wild Chinese seabuckthorn（Hippophae rhamnoides L.subsp.sinensis Rousi）leaves were chosen.The results showed that the rutin levels of cultivar 1,cultivar 2,cultivar 10,cultivar 12,cultivar 54,Fengning male,Chinese seabuckthorn（♀）and Chinese seabuckthorn（♂）were 0.081 3%,0.052 3%,0.130 0%,0.132 7%,0.068 2%,0.136 1%and 0.146 6%,respectively. This study not only provides a reference for the identification,adaptability,and future application of seabuckthorn varieties,but also provides a basis for further product development.

Hippophae rhamnoides;rutin；reversed phase high performance liquid chromatography

S793.6

A文献标识码：1002-2481（2017）02-0200-04

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.02.13

2016-11-15

张琼姝（1988-），女，山西晋中人，在读硕士，研究方向：细胞生物学。张小民为通信作者。