芋头脱毒快繁技术规程

张培通，殷剑美，王 立，韩晓勇，刘水东，吴 薇，常 蕾，罗 敏

（1.江苏省农业科学院经济作物研究所，江苏 南京 210014；2.江苏沿江地区农业科学研究所，江苏 南通 226541；3.江苏省农业科学院泰州农科所，江苏 泰州 225300）

江苏省泰州、南通、常州等地是长江下游芋头重要产区，品种以多子芋为主，具有香、糯、嫩、滑的特征，这些地方特色品种各具独特风味和优良特性，是当地农家特产。然而长期的无性繁殖导致了芋头植株病毒严重、种性退化。目前国内报道发现的以芋为寄主的病毒有芋花叶病毒（Dasheen mosaic virus，DMV）和黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）[1-2]，其中芋花叶病毒（DMV）分布最广，危害最大。芋花叶病毒侵染天南星科植物并引起系统性症状或隐状，伴随产生羽状花叶、叶片皱缩向上卷曲、叶面褪绿黄斑等症状[3]，田间调查可见，江苏省沿江地区优质多子芋花叶病毒感病植株达63.3%，芋头田间较普遍的花叶病毒感病症状为叶片皱缩卷曲[4]。利用组织培养方法获得无毒或少毒再生植株，切断病毒感染途径，是解决芋头病毒严重问题的有效途径[5]。芋头诱导愈伤组织培养技术对芋头品种进行脱毒，脱毒率可达48.0%，并将脱毒组培苗进行快速扩繁，可获得大批量芋头脱毒组培苗，为脱毒种芋扩繁体系建设奠定了基础[6]。通过与靖江市绿禾蔬菜专业合作社协作建设“靖江香沙芋脱毒快繁体系”，为靖江香沙芋产业的发展提供了有力支撑。为了推进江苏省各地方特色芋头脱毒种芋的扩繁体系建设，根据多年研究结果和脱毒种芋集中快繁生产实践，总结出芋头脱毒快繁技术体系，可为全省各地区建立优质特色芋头脱毒种芋提供帮助和指导。

1 种芋生产基础条件

1.1 产地要求

脱毒种芋繁殖基地应符合《中华人民共和国种子法》规定，灌溉水源符合《无公害蔬菜产地环境要求》（GB/T 18407.1）所规定的水源条件。

1.2 生产企业要求

符合《中华人民共和国种子法》和《农作物种子生产经营许可管理办法》规定要求。

1.3 脱毒种芋繁殖基地

1.3.1 基地构成

主要包括：组织培养室、脱毒核心种芋繁殖圃、脱毒原种芋繁殖田和脱毒种芋繁殖田。一般脱毒核心种芋繁殖圃、脱毒原种芋繁殖田、脱毒种芋繁殖田面积比为1∶12∶200。

1.3.2 组织培养室要求

组培室配套组成应包括准备室、接种室、培养室。

培养室须与脱毒核心种芋繁殖圃面积相匹配，按照每万株脱毒组培苗20 m2建设。

1.3.3 繁殖田块要求

田块选择：靠近水源，排灌方便。

田块要求：田间灌排沟渠配套，水利设施齐全，达到“旱能灌、涝能排”，还要根据不同等级脱毒种芋扩繁要求，建设配套的防虫防护设施。

田块土质：宜选择土层深厚、土壤肥沃的偏砂性壤土。

茬口要求：未种植芋头及甘薯、马铃薯、山药等地下根茎类作物1年以上。

2 芋头脱毒组培苗培育

2.1 外植体培养和处理

以芋头茎尖为外植体。选取保存完好、无病斑的芋头，经芋头质量0.2%的高锰酸钾（KMnO4）液消毒5min，用灭菌后的细沙覆盖整个芋头的2/3，放置于光照培养箱中促其萌发。当幼芽生长到1～3cm时切取茎尖，剥除茎尖外表2～3层叶片，流水冲洗10min，在超净工作台上用75%酒精浸泡30 s，用3%次氯酸钠（NaClO）溶液灭菌10～15min，无菌水漂洗5～7次。剥离茎尖外层叶鞘，在解剖镜下剥取0.4～0.8mm大小茎尖作为外植体。

2.2 愈伤组织诱导和组培苗芽形成

将剥取的外植体接种在MS+2,4-D 2.0 mg/L的培养基中，在温度（25±2）℃、光照度2 000～2 500 lx的培养室内无菌培养50～60 d，诱导形成愈伤组织。芋愈伤组织在上述培养基和培养条件下再经60 d左右培养，形成芋组培苗芽。

2.3 病毒鉴定

将组培苗芽切下，接种在MS+TDZ 1.0 mg/L的培养基中，长出2片叶以上时（20 d左右），取部分叶片利用酶联免疫分析法（ELISA）[4]进行芋头花叶病毒（DMV）的检测。保留无病毒组培苗进行继代培养。

2.4 继代培养

将无病毒组培苗继续培养。当植株萌发出的不定芽达2.0cm时，切下不定芽接种在MS+TDZ 1.0 mg/L的培养基中进行继代培养。一般连续继代培养不超过4次。

2.5 诱导生根

将高2.0cm以上、带有2片叶的健壮小苗切下，转入含0.02%活性炭的MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/L培养基中进行培养，诱导生根，形成脱毒组培苗。脱毒组培苗培养30～40 d（根长3～5cm）后，可以移栽田间扩繁脱毒核心种芋。

3 脱毒核心种芋繁殖

3.1 基本要求

需在专业化种芋生产单位进行，应在架设防虫网的大棚内种植，由专业技术人员负责田间管理和去杂汰劣操作。

3.2 防虫网棚建设

防虫网选用0.30～0.45mm孔径的优质尼龙纱网，种芋大棚应空间充裕（棚高2 m以上，宽6～8 m），结构稳定，利于田间作业，具有较强的抗风能力。

3.3 炼苗处理

最佳栽植时间为4月下旬—5月上旬。移栽前1周将脱毒组培苗置于常温环境中炼苗，避免阳光直射。移栽前1 d打开瓶盖炼苗。

3.4 移栽种植

防虫网大棚内纵向筑畦作为苗床，畦面宽1.2 m，畦高6～7cm，畦沟宽60cm，每畦种2行。按行距50cm在苗床上开宽15cm、深10cm的移栽行沟，沟内填充中性（pH 6.8～7.3）的常规蔬菜育苗基质，并浇透水。将炼苗后的脱毒组培苗洗净基部培养基，按株距30cm栽入移栽行沟。栽后及时喷水保湿，搭小拱棚并加盖遮阳网。移栽后的前2周每天早晚各浇水1次，第2周开始10：00前和16：00后打开遮阳网，第3周开始揭掉遮阳网，注意勤浇水。苗期保持棚内温度15～25 ℃、基质含水量80%～90%。

3.5 病虫害控制

3.5.1 控制病害

每隔15 d左右，于晴天选用符合《农药安全使用标准》（GB 4285）和《农药合理使用准则》（GB/T 8321）规定的广谱保护性杀菌剂喷雾。

3.5.2 防治害虫

主要害虫为蚜虫、斜纹夜蛾和蛴螬，具体防治方法为：（1）蚜虫和斜纹夜蛾。根据预测预报，使用符合《农药安全使用标准》和《农药合理使用准则》规定的适宜杀虫剂进行化学喷雾防治。喷药时间掌握在傍晚。（2）蛴螬。采用灌水灭虫或毒饵诱杀方法。根据虫害发生情况，选择晴天15：00左右开始灌水，保持浅水层至次日早晨，然后晾田2～3 d。

3.6 苗床管理

3.6.1 控制温度

生长前期温度控制在25 ℃以下，后期温度控制在25～30 ℃。当温度过高（30 ℃以上）时，应覆盖遮阳网或采取喷水降温。

3.6.2 水分管理

晴天早晚可轻浇小水各1次，阴天根据土壤温度、水分情况3～4 d浇水1次，保证基质不过干或过湿，以植株不出现缺水症状为宜。

3.6.3 肥料管理

全生育期只施肥1次。于7月下旬每667 m2苗床施硫酸钾复合肥（45%浓度，15-15-15）30 kg，或施用符合《肥料合理使用准则通则》（NY/T 496）规定的氮磷钾等量的其他肥料，忌用含氯肥料。

3.6.4 保留分株

全生育期不除边萌、不去分株。

3.7 收获保存

3.7.1 适时收获

11月上中旬收获为宜。收获前20 d不浇水，保持土壤干爽，确保种芋干燥。

3.7.2 种芋处理

收获芋盘，不应掰下子孙芋，保持芋盘完整；清理芋盘上的泥土，晾晒1～2 d；用25%阿米西达悬浮液800倍液均匀喷雾，之后再晾晒1～2 d；用生石灰粉均匀包裹，入库保存。

3.7.3 越冬储存

将处理后的种芋盘摆放在仓库内，先铺1层稻草，然后摆1层种芋盘，再均匀撒1层干生石灰粉。如此摆放多层，堆高不宜超过1 m。库内温度控制在5～8 ℃，相对湿度维持在80%～90%，定期通风，保持仓库内清洁卫生。贮藏期间及时剔除烂芋。

4 脱毒原种芋繁殖

4.1 脱毒原种芋繁殖田要求

繁殖田要求同脱毒核心种芋繁殖圃。

4.2 脱毒种芋繁殖田防虫网棚建设

防虫网棚建设要求同脱毒核心种芋繁殖圃。

4.3 整地做畦

冬前深耕晒垡，每667 m2施入腐熟的牛羊粪2 000 kg，春季再次施牛羊粪1 000 kg。播种前筑畦，畦宽1.0 m，畦高6～7cm，畦沟宽40cm。

4.4 高质量播种

4.4.1 适期播种

适宜播期为4月上旬。

4.4.2 适量播种

每畦2行，行距40cm，株距30cm，每667 m2种植量约为2 500株。

4.4.3 播种要求

开沟播种，播种沟深度10cm，种芋均匀摆放于沟内，及时覆土。

4.4.4 除草覆膜

覆土后全田均匀喷洒96%精都尔乳油800倍液，并及时加盖黑色地膜。地膜必须贴紧畦面，四周用土封好。

4.4.5 促进出苗

播种出苗期间，土壤含水量以70%～80%为宜。若遇长期干旱，要及时浇水。发芽后及时破膜引苗。

4.5 足水促苗

苗期保持田间土壤含水量不低于60%。

4.6 病虫害控制

主要病虫害及防治方法同脱毒核心种芋繁殖。

4.7 膨大期管理

4.7.1 水分管理

保持土壤含水量在70%左右，干旱时及时浇水。7月份在缺乏有效降水的情况下，每隔5～7 d灌水1次，要“沟灌洇水，夜灌晨排”，不能大水漫灌，也不能长期淹水。8月上旬以后，灌水次数可减少，土壤偏干应及时灌水，灌水方法同7月份。

4.7.2 肥料管理

当幼苗达到8～9叶时（一般在7月中旬）及时追肥。每667 m2撒施菜饼60 kg+硫酸钾复合肥（45%浓度，15-15-15）30 kg，或施用符合《肥料合理使用准则通则》（NY/T 496）规定的满足氮磷钾含量的其他肥料。

4.7.3 壅根培土

7月中下旬进行壅根培土。挖取畦间沟内泥土，培于芋头行上，壅土高度10cm以上。

4.8 保留分株

全生育期不要去除分株。

4.9 收获保存

收获方法及保存措施同核心脱毒种芋。

5 脱毒种芋繁殖

选择有经验的芋头种植农户或专业合作社，利用脱毒原种芋在大田进行扩繁，生产管理、保存方法同脱毒原种芋。

[1]李永伟.天南星科植物病毒研究[D].杭州:浙江大学,2002.

[2]刘文洪,陈集双.侵染天南星科植物病毒的分子鉴定及其生态学研究[J].应用生态学报,2004,15(4):566-570.

[3]施世明,洪霓.芋病毒病研究进展[J].长江蔬菜,2010(14):3-5.

[4]殷剑美,韩晓勇,王立,等.靖江香沙芋脱毒组培技术效应及种芋扩繁要点[J].江苏农业科学,2015,43(8):151-153.

[5]崔瑾.芋(Colocasiae sculenta L. Schott)脱毒快繁体系的构建以及组培苗无糖培养的研究[D].南京:南京农业大学,2002.

[6]韩晓勇,宋婷婷,王立,等.靖江香沙芋组织培养快繁技术研究[J].江苏农业科学,2014,42(1):50-52.