高效液相色谱法测定复方珍珠口疮颗粒中苍术素含量

张立新，李 娟，周晓英

（四川省成都市食品药品检验研究院，四川 成都 610045）

高效液相色谱法测定复方珍珠口疮颗粒中苍术素含量

张立新，李 娟，周晓英

（四川省成都市食品药品检验研究院，四川 成都 610045）

目的建立测定复方珍珠口疮颗粒中苍术素含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为Diamonsil C18柱（200 mm×4.6 mm，5 m），流动相为甲醇－水（79∶21），流速为1.0 mL／min，检测波长为340 nm。结果苍术素进样量在18.4～277.2 g范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为 Y＝7 897.2 X－31 006（r＝0.999 7），平均回收率为97.97%，RSD＝1.60%(n＝6)。结论该方法准确，简便，重复性好，可用于复方珍珠口疮颗粒的质量控制。

高效液相色谱法；复方珍珠口疮颗粒；苍术素；含量测定

复方珍珠口疮颗粒是由珍珠、苍术、五倍子、甘草4味中药材经粉碎提取等工艺加工制成的中药颗粒，具有燥湿、生津、止痛的功效，常用于心脾燥热所致口疮，症见口疮周围红肿、中间凹陷、表面黄白，灼热疼痛，口干口臭，舌红等。原质量标准为国家药品监督管理局标准（试行）[1]，现收载于2015年版《中国药典（一部）》[2]。苍术素为苍术的有效成分和特有成分[3]，具有抗菌、抗炎、抗病毒等多种功效[4－5]，原标准及现行标准均未对苍术素含量进行测定。为更好地控制产品质量，本研究中采用高效液相色谱（HPLC）法测定其中苍术素的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200 series液相色谱仪，Agilent 1200 series DAD检测器(美国安捷伦科技公司)；Waters 2695－2487型高效液相色谱仪(Waters公司)；AE240型电子天平。

1.2 试药

苍术素对照品（成都曼思特生物科技有限公司，批号为MUST－10090807，含量＜98%）；复方珍珠口疮颗粒（德阳华康药业有限责任公司）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Diamonsil C18柱（200 mm×4.6 mm， 5 μm）；流动相：甲醇－水（79∶21）；检测波长：340 nm；流速：1.0 mL／min；柱温：30℃。在该色谱条件下，苍术素与杂质峰分离效果良好，通过二级管阵列检测器对峰纯度进行检测，峰纯度因子在计算出的阈值限值内，苍术素为符合要求的纯峰，保留时间适中。色谱图见图1。

2.2 溶液制备

取苍术素对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度为80 μg／mL的溶液，作为对照品溶液。取本品适量，研细，取约1.0 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方制成不含苍术药材的样品，并按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验：取对照品溶液、阴性对照品溶液、供试品溶液各10 μL，按拟订色谱条件进样测定。结果阴性对照品溶液对苍术素的含量测定无干扰，见图1。

线性关系考察：精密吸取不同体积的苍术素对照品溶液（0.009 24 mg／mL），注入液相色谱仪，按拟订色谱条件测定峰面积，以对照品进样量（X，μg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y＝7 897.2 X－31 006（r＝0.999 7）。结果表明，苍术素进样量在18.4～277.2 μg范围内与峰面积线性关系良好。结果详见表1。

图1 高效液相色谱图

稳定性试验：取同一对照品溶液和同一供试品溶液，置阴暗处保存，分别于1，2，4，6，8，16 h时进样测定峰面积。结果的 RSD为1.5%和1.7%(n＝6)，表明对照品溶液和供试品溶液置暗处保存，在12 h内基本稳定。结果详见表2。取同一对照品溶液，置日光下放置1 h后测定，分解为2个峰；放置20 h后测定，分解为6个峰。结果表明，苍术素在光照下容易分解。

重复性试验：取同一批样品6份，依法制备供试品溶液。按拟订色谱条件进样测定。结果表明，方法重复性良好，详见表3。

加样回收试验：精密吸取已知含量的样品（批号为100715，苍术素含量为0.196 mg／g）6份，精密加入对照品溶液（0.008 36 g／L）1＃、2＃30 mL，3＃、4＃20 mL，5＃、6＃15 mL，再精密加入甲醇至50 mL，依法制备供试品溶液。按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表4。

2.4 样品含量测定

取本品3批样品，依法制备供试品溶液，按拟订方法进样测定。结果见表5。

3 讨论

表1 苍术素线性关系考察结果

表2 苍术素稳定性试验结果

表3 苍术素重复性试验结果（n＝6）

表4 苍术素加样回收试验结果（n＝6）

苍术为复方珍珠口疮颗粒制剂中的重要成分，苍术中所含苍术素为挥发性成分，主要存在于挥发油中，光照下较易分解，但在避光条件下较稳定。参照文献[6－9]，对供试品溶液的制备方法和高效液相色谱条件进行了比较研究。

表5 3批样品含量测定结果（mg／g，n＝2）

样品提取时间：比较了不同超声处理时间（20，30，60 min）的影响，结果含量分别为0.193，0.198，0.197mg／g，说明3个提取时间测定结果无明显差异，故选择了提取率最高的超声处理30 min。

提取溶剂选择：比较了乙醇和甲醇2种溶剂的影响，甲醇提取测定结果高于乙醇提取（提取结果甲醇为0.198 mg／g，80%乙醇为0.135 mg／g）。

流动相选择：比较了流动相组成比例和pH变化的影响，以甲醇－水（79∶21）、甲醇－水（84∶21）、甲醇－水（72∶28）、甲醇－0.3%磷酸（79∶21）为流动相，均能达到理想的分离效果，故选择甲醇－水（79∶21）。

仪器选择：比较了不同仪器的测定结果，采用Agilent 1200 series高效液相色谱仪与 Waters 2695－2487高效液相色谱仪，苍术素峰形均良好，测定结果无明显差异。

色谱柱选择：比较了不同品牌和不同长度的C18柱，采用了3根色谱柱进行比较[Diamonsil C18柱（200 mm× 4.6 mm，5 μm），Ultimate PAH柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm），Akasil柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），结果均能达到较好的分离效果。

综上所述，该提取方法简便，提取完全，色谱条件适应性强，方法重复性好，可作为复方珍珠口疮颗粒质量标准的含量测定方法。

[1]WS－091（Z－015）－2011－2011Z，国家药品监督管理局标准（试行）[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：1 235－1 236.

[3]黄瑞平，孙敏宁，潘红玲.茅苍术与北苍术中苍术素含量的比较[J].中国中医药科技，2015，22（4）：398－399.

[4]殷俊方，黄宝康，吴锦忠.苍术属药用植物的药理作用研究进展[J].药学实践杂志，2008，26（4）：252－254.

[5]赵子剑，肖胜男，赵永新，等.苍术药理作用的文献再评价[J].中国医院药学杂志，2011，31（7）：607－609.

[6]周 军，赵 晨，王 杰.藿香正气不同制剂中苍术素的含量测定[J].药物分析杂志，2012，32（8）：1 476－1 478.

[7]翟卫峰，尉小慧，张淑霞，等.HPLC法同时测定越鞠丸提取物YJ－XCC1Z3中藁本内酯、 －香附酮、苍术素的含量[J].药物分析杂志，2009，29（5）：693－695.

[8]张 磊，欧阳臻，赵 明，等.茅苍术中苍术酮、茅术醇、 －桉叶醇和苍术素的同时含量测定及其聚类分析[J].中国中药杂志，2010，35（6）：725－727.

[9]闵春艳，游本刚.香附、苍术挥发油中 －香附酮和苍术含量的同时测定[J].中国药业，2013，22（12）：89－91.

Content Determination of Atractylodin in Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules

Zhang Lixin，Li Juan，Zhou Xiaoying
(Chengdu Institute for Food＆ Drug Control，Chengdu，Sichuan，China 610045）

Objective To establish a method to determine the contentsofatractylodin in Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules.Methods An HPLC method was adopted.Diamonsil C18column（200 mm×4.6 mm，5 μm）was used.The mobile phase consisted of mthanol－water（79∶21）；the flow rate was 1.0 mL／min；the wavelength of detector was 340 nm.Results The calibration curves of atractylodin showed good linearity in the range of 18.4－277.2 g.The Regression Equation was Y＝7 897.2 X－31 006（r＝0.999 7）.The average recoveries was 97.97%，RSD＝1.60%（n＝6）.Conclusion This method is accurate，simply and reproducible，and is suitable for the determination of atractylodin content in Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules.

HPLC；Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules；atractylodin；content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2016)24－0070－03

2016－08－11)