中药制剂有效成分含量测定中高效液相色谱法的应用分析

2017-01-21裴勇

中国卫生产业 2017年22期

关键词：香豆素药制剂法测定

裴勇

河南中医药大学第一附属医院中药制剂提取间，河南郑州 450000

中药制剂有效成分含量测定中高效液相色谱法的应用分析

裴勇

河南中医药大学第一附属医院中药制剂提取间，河南郑州 450000

中药类型包括中药成方制剂、中成药、单味制剂等，与西药相比，中药制剂不良反应小，用量少，且具有一定持久性和高效性。但中药制剂所含成分较多，制备工艺复杂，在中药制剂质量控制上很难做到面面俱到，造成中药制剂质量良莠不齐。为保证中药制剂质量，该研究采用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）对中药制剂有效成分含量测定中的应用与发展进行分析研究，并提出观点，以供参考。

中药制剂；含量测定；高效液相；色谱法

中药制剂质量检测中，一般将具有生理活性的化学成分作为控制标准与质量评价，以衡量产品是否稳定、质量是否达标等。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种具有分析速度快、检测灵敏度高、分离效率高、应用范围广、操作方便、重现性高等诸多特点的成分含量测定方法，可用于分析样品沸点、大分子量有效成分、热不稳定性等，已成为目前控制中药制剂有效成分的重要手段。该研究对HPLC法在中药制剂中药苷类、萜类、黄酮类、生物碱类、醌类、木脂素类、香豆素类、有机酸类等8种有效成分含量测定应用进行介绍。

1 中药苷类成分含量测定

苷类在是天然药物研究中不可忽视的一类成分，其广泛分布于中药界，生理活性多样，结构不一，国内外均有对采用HPLC法测定中药苷类成分含量的文献报道[1]。高广慧等[2]采用HPLC法对中芍药苷含量进行测定，将提取与分离工艺优化，有效分离芍药苷成分，方法准确可靠，能够较好控制中成药、中药材中芍药苷质量。苏晓楠等[3]通过HPLC法，快速、准确测定了芒果苷、新芒果苷及知母皂苷成分的含量，为中药材质量控制的全面性奠定了坚实基础。陈华等[4]用HPLC法测定黄芩苷含量，通过精密度、稳定性、重复性、加样回收率试验及样品含量测定，结果显示样品分离度及重现性好，峰型佳，无杂质峰干扰，保留时间稳定，精密度、稳定性、重复性均符合标准。

2 萜类成分含量测定

萜类成分结构复杂、种类繁多、生理活性多种多样，采用HPLC法可检测出一些萜类成分含量，有学者对银杏叶提取物萜类内酯（倍半萜内酯和二萜内酯）含量进行测定[5]，倍半萜内酯包括白果内脂，二萜内酯包括银杏内酯A、B、C等，结果显示，以对照品峰浓度为横坐标、面积为纵坐标，绘制标准曲线，相关系数＞0.99，适用于含量测定，且白果内酯平均RSD值0.72%，平均回收率101.35%，银杏内酯 A、B、CRSD 值分别为 1.86%、1.52%、1.40%，平均回收率99.35%、101.21%、101.22%，表明该定量分析方法精密度和重复性良好，可广泛应用于萜类成分测定。

3 黄酮类成分含量测定

黄酮类化合物多与糖类结合组成各种黄铜苷类，其易溶于水、甲醇、乙醇等极性强的溶剂，抗氧化作用强，可阻止细胞衰老、退化以及癌症发生。采用HPLC法测定具有较高灵敏度，冯秀丽等[6]研究者利用HPLC法测定猴耳环药材中黄酮类含量，结果显示峰面积与成分质量浓度在测定范围内均呈现良好的线性关系，平均RSD值0.36%～1.20%，平均回收率99.91%～100.98%，表明HPLC法简单、准确、分离度高、灵敏度佳，可作为一种有效测定黄酮类成分含量的方法。

4 生物碱类成分含量测定

生物碱是中草药有效成分之一，具有显著的生物活性和光学活性。生物碱呈环状结构，可与酸形成盐，因其存在形式不同（可分为成盐型与游离型），碱性强弱也有一定差异。应用HPLC法可精准测定生物碱成分含量，经相关研究证实[7]，采用HPLC法测定元胡药材中5种生物碱（紫堇碱、四氢小柴碱、延胡索乙素、原阿片碱、脱氢海罂粟碱）含量准确，RSD（n=7）均在 1.6%～2.8%以内，精密度及稳定性良好，平均回收率在95.10%～97.20%之间，测定结果可靠、操作方法简便可行，重现性与分离度较好，可作为元胡类药材的质量控制。

5 醌类成分含量测定

醌类化合物广泛分布于植物中，如蓼科的大黄、虎杖、何首乌，豆科的决明子、番泻叶，百合科的芦荟等，具有致泻、抗菌、止血等多种功效，菲醌、蒽醌及萘醌类单体成分在可见光、紫外光下均有较强吸收作用，采用HPLC测定具有准确、快速、灵敏、高效等特点，中药成分研究应用广泛。葛素囡等在紫草及其毛状根萘醌类化合物测定中采用HPLC-ESI-MS/MS法的结果表明[8]，该方法可作为中药活性成分测定的有效有段。霍金海等[9]对不同时期北青龙衣中38种萘醌类化合物成分进行测定后发现，采用HPLC法能够准确监测出北青龙衣萘醌类化合物随采收时间变化其含量呈逐渐下降趋势，以0.1%甲酸乙腈-甲酸水体系所得的色谱峰形良好，色谱峰稳定且信息较多，分离效果佳，专属性强，可有效缩短分析时间，适宜醌类成分含量测定。

6 木脂素类成分含量测定

木脂素类多分布于裸子植物与被子植物中，生物活性多种，是由二分子苯丙素衍生物聚合形成的化合物，对多种木脂素类有效成分含量均可采用HPLC法测定，如厚朴酚、连翘苷、牛蒡子苷、五味子素类等，汪丽君等[10]研究者应用HPLC法已成功测定五味子中8个木脂素类有效成分（五味子醇乙、五味子醇甲、五味子酯甲、戈米辛 G、戈米辛 J、五味子乙素、五味子甲素、和五味子丙素），各成分均显示出良好的线性关系，平均加样回收率（n=9）在98.9%～102.6%之间，不同时间峰面积RSD在1.5%～2.6%之间，试品溶液24 h内稳定，在不同试验条件下其重现性均较好，木脂素类含量采用HPLC法测定简单可行，对制剂质量控制参考价值较高。

7 香豆素类成分含量测定

香豆素类主要由酪氨酸衍生而来，属于天然药物生理活性成分，为测定蛇床子中香豆素类成分含量，李义敏等[11]采用高效液相色谱仪对蛇床子3种香豆素成分（欧芹属素乙、蛇床子素、佛手柑内酯）含量进行测定，HPLC法进行纯度检测质量分数为98%以上，其质量浓度分别为 0.005 1～0.102 6 mg/mL、0.051 3～1.025 mg/mL、0.005 7～0.114 8 mg/mL，其与峰面积线性关系良好，加样回收率102.85%、101.39%、97.12%，稳定性试验中测得RSD分别为1.55%、1.50%、1.04%，表明其在24 h内具有良好稳定性，重复性试验测得RSD为0.41%、1.31%、1.27%，说明重复性良好，采用HPLC法测定香豆素类含量稳定、准确，可为评价不同产地蛇床子质量提供依据。

8 有机酸类成分含量测定

有机酸指的是具有酸性的有机化合物，在中草药根、叶以及果实中分布广泛，如覆盆子、五味子等，一般与钠、钾、钙、生物碱类等结合成盐，也可以游离状态存在，已有试验采用HPLC法成功测定有机酸含量，任晓蕾等[12]采用HPLC法测定了短瓣金莲花藜芦酸的含量，短瓣金莲花富含有机酸和黄酮化合物，且与其生物活性有一定相关性，通过采用2010型高效液相色谱仪，将冰醋酸、乙腈作为色谱纯，使被测物质锋行对称，藜芦酸平均回收率为100.72%，RSD为0.93%，平均含量1.089 mg/g，明确乙腈-1%冰醋酸溶液等度洗脱可使藜芦酸成分获得良好的分离效果，响应值高且峰型好，基线平稳，可作为短瓣金莲花质量控制指标之一。

综上所述，HPLC法以其高速、高效、高分辨率等技术优势在中药成分含量测定中的作用日益显现，已逐渐成为中药检验的重要分析手段。该研究相信，随着HPLC技术不断更新与改进，必将推动中药检验研究迈向一个崭新阶段。

[1]杨勇,顾中怡,徐春春,等.高效液相色谱法测定氟啶虫胺腈制剂中有效成分含量[J].农药,2015,54(7):512-515.

[2]高广慧,田金苗,赵飞,等.固相萃取-高效液相色谱法测定中药制剂及保健食品中芍药苷[J].理化检验-化学分册,2015,51(2):228-230.

[3]苏晓楠,季德,周亚萍,等.HPLC-DAD-ELSD同时测定知母中黄酮和皂苷类成分的含量[J].中国中药杂志,2015,40(1):108-111.

[4]陈华,于波涛,范开华,等.辛苍颗粒中药材的定性鉴别和黄芩苷的含量测定[J].西部医学,2016,28(6):855-858.

[5]刘会,黄绳武,郭莹,等.HPLC法测定不同厂家银杏叶提取物中黄酮醇苷和萜类内酯含量[J].中华中医药杂志,2015,30(2):598-601.

[6]冯秀丽,王欢,祝晨蔯,等.HPLC法同时测定猴耳环药材中3种黄酮类成分的含量[J].中药新药与临床药理,2015,26(5):668-671.

[7]徐皓.HPLC法测定不同产地元胡药材中5种生物碱含量[J].药物分析杂志,2015,132(8):1403-1407.

[8]葛素囡,王芳,周歌,等.新疆紫草及其毛状根中萘醌类化合物的研究[J].中药新药与临床药理,2015,26(5):675-681.

[9]霍金海,孙国东,董文婷,等.基于UPLC-Q-TOF-MS技术的北青龙衣有效成分动态变化分析[J].中国中药杂志,2016,41(18):3379-3388.

[10]汪丽君,刘淑敏,毛春芹,等.一测多评法同时测定五味子中8个木脂素类成分的含量[J].药物分析杂志,2015,132(7):1191-1197.

[11]李义敏,张巧艳,秦路平,等.HPLC法测定蛇床子中3种香豆素类成分的含量[J].中药材,2015,38(7):1441-1443.