NF-κB在内毒素血症大鼠肝损伤中的变化及意义

张慕裴凌

NF-κB在内毒素血症大鼠肝损伤中的变化及意义

张慕1，2裴凌1

目的观察NF-κB在内毒素血症大鼠肝损伤中的变化，分析内毒素血症中NF-κB表达的意义。方法选取40只健康Wistar大鼠，随机分为肝损伤组和对照组，各20只，肝损伤组大鼠建立内毒素血症肝损伤模型，在建模前后观察组间NF-κB表达水平的变化。结果在造模后3 h时、6 h、12 h时，内毒素组NF-κB表达水平[（14．83±1．65）D、（21．35±2．57）D、（31．63±3．57）D]和肝损伤程度[（1．14±0．87）分、（2．06±1．03）分、（3．02±1．35）分]高于对照组，差异有统计学意义，P＜0．05。结论内毒素血症肝损伤大鼠肝组织内NF-κB表达升高，考虑NF-κB可能参与了肝损伤过程。

NF-κB；内毒素血症；肝损伤

内毒素血症能够通过引发炎症反应对于肝脏功能造成损伤[1-3]，而急性肝损伤作为肝炎、肝癌等疾病恶化进展的重要因素，积极发掘肝损伤的病理机制对于防治疾病进展极为重要。本实验通过观察NF-κB活化程度在内毒素血症肝损伤模型中的变化，旨在初步阐明NF-κB在肝损伤中的作用，现总结如下。

1 资料和方法

1.1 实验动物

Wistar大鼠40只（中国医科大学实验动物中心，辽检证第SCXK2008 0002号），体质量约为180～230 g，平均（200±19）g，雌雄各20只，适应性喂养条件均为37℃、45%湿度、自由进食，光暗比1：1。

1.2 实验试剂

脂多糖（美国Sigma公司）；SABC试剂盒以及NF-κB抗体（武汉博士德生物工程公司）；Olympus 图像分析系统（日本Olympus公司）

1.3 实验方法

（1）动物分组：依据数字随机表进行分组，每组各20只大鼠，组间大鼠的体质量、鼠龄、雌雄比差异均无统计学意义（P＞0.05）。（2）建模方法：参照相关文献[4]利用脂多糖进行内毒素肝损伤模型建立，注射途径为经股静脉注射，注射剂量为5 mg/kg。对照组在同时间注射等体积无菌氯化钠溶液（0.9%）。实验期间所有大鼠均自由摄食，光暗比1：1。

1.4 观察指标

在造模前、造模后3 h、6 h、12 h时分别处死5只大鼠，无菌获取肝组织并制成石蜡标本切片，部分进行免疫组化染色处理，通过显微镜观察肝组织形态变化，并根据Camargo肝组织损伤程度评价法[5]进行肝组织损伤分级，计分越高，损伤越重。另一部分制成免疫组化切片，利用Olympus显微摄像分析系统，以积分光密度法检测肝组织内NF-κB表达水平，每次随机选取4个高倍（×400）光镜视野，取4次均值作为最终结果。

1.5 统计学处理

实验数据通过SPSS.20.0软件进行对比，计量资料用（均数±标准差）表示，组间使用两独立样本t检验，组内不同时间点比较用LSD-T分析，P＜0.05，差异有统计学意义。

2 结果

在造模前，两组大鼠的肝组织形态均正常，未见损伤征象，且两组大鼠NF-κB的积分光密度值均较低，模型组为（7.24±1.03）D，对照组为（7.15±1.04）D，组间相比，P＞0.05，差异无统计学意义。在造模后3 h时、6 h、12 h时，模型组损伤评分分别为（1.14±0.87）分、（2.06±1.03）分、（3.02±1.35）分，NF-κB积分光密度值分别为（14.83±1.65）D、（21.35±2.57）D、（31.63±3.57）D，对照组损伤评分分别为（0.15±0.03）分、（0.14±0.04）分、（0.11±0.03）分，NF-κB积分光密度值分别为（7.26±1.05）D、（7.14±1.06）D、（7.21±1.07）D，组间数据相比，P＜0.05，差异有统计学意义。在造模后，模型组肝细胞出现明显的肿胀、变性以及炎症浸润表现，并随着时间增加，损伤表现逐渐加重，且肝组织内NF-κB表达量不断升高，与组内造模前相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

肝脏作为重要的解毒场所，肝功能一旦出现损伤，体内排毒机制将受严重影响，其不仅使疾病恶化，且易引发多器官功能衰竭，从而威胁生命安全。NF-κB作为体内关键性转录诱导因子，其能够通过结合靶蛋白干预特定基因表达，从而对细胞分化生长、炎症反应和免疫机制产生重要影响。相关实验发现[6-8]，NF-κB对于肝功能具有重要影响，其在肝炎、肝癌等肝脏疾病发生发展过程中发挥重要作用。本实验结果显示，与对照组相比，在建模之后，模型组肝损伤评分升高，肝组织NF-κB表达水平上升，说明内毒素血症能够导致肝损伤，虽然正常肝细胞内能够检测到少量NF-κB表达，但是当肝脏发生损伤后，肝内NF-κ表达将升高。

综上所述，内毒素血症能够对肝细胞造成损伤，内毒素血症肝损伤能够增加NF-κB表达，NF-κB可能对肝损伤机制有调控作用。

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Study On the Changes and Its Significance of NF-κB on Liver Injury for the Rats With Endotoxemia

ZHANG Mu1,2PEI Ling11 Department of Anesthesiology, The First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang Liaoning 110001, China, 2 Department of Anesthesiology, Shenyang Anorectal Hospital, Shenyang Liaoning 110000, China

ObjectiveTo observe the changes of NF-κB on liver injury for the rats with endotoxemia, to analyze and the significance of NF-κB for endotoxemia.Methods40 healthy wistar rats were selected and randomly divided into liver injury group and control group. There were 20 rats in each group. The endotoxemia liver injury model was established in liver injury group. The changes of NF-κB expression level were observed before and after modeling.ResultsAfter modeling for 3 hours, 6 hours,12 hours,NF-κB expressions in endotoxin Group were [(14.83±1.65) D,(21.35±2.57) D,(31.63±3.57) D] and the degrees of liver injury were [(1.14±0.87) points,(2.06±1.03) points,(3.02±1.35) points], they were significantly higher than the control group, the differences were significant between the groups,P＜0.05.ConclusionNF-κB expression is significantly increased in liver tissue of the liver injury rats with endotoxemia,NF-κB may be the factor for liver injury.

NF-κb; endotoxemia; liver injury

R-3

A

1674-9316（2017）01-0143-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．01．092

1 中国医科大学附属第一医院麻醉科，辽宁 沈阳 110001 2 沈阳市肛肠医院麻醉科，辽宁 沈阳 110000