七花颗粒对2型糖尿病大鼠病理组织改变的影响

孔春芹+付婷婷+陈普+张超

【摘 要】 目的：观察七花颗粒对2型糖尿病大鼠模型症状及病理组织学改变的影响。方法：通过高脂饲料+STZ诱导2型糖尿病大鼠模型，观察在七花颗粒干预下大鼠糖尿病症状及病理组织学的改变。结果：七花颗粒可以有效的改善糖尿病大鼠模型的病理组织学。结论：七花颗粒对于糖尿病大鼠病理组织学的改变有延缓和治疗作用，对于恢复功能和阻碍病情发展效果明显。

【关键词】 七花颗粒；糖尿病；病理组织学

【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）24-0037-06

Abstract：Objective To observe the histopathological changes on biochemical indices of each group in the rats.Methods Experimental group fed with high fat feed besides streptozotocin injected to induce T2DM rat model，to observe the histopathological changes.Results The QiHua Granule cansignificantly changethe histopathological；Conclusions The QiHua Granule for pathological changes of diabetic rats histology and treatment can delay，impede the restoration of function and progression of the disease effect significantly.

Keywords：QiHua Granule；Diabetic；The Histopathological

云南民族医药资源极为丰富，从民族药中寻找新药在现代医药产业的发展中占有十分重要的地位。七花颗粒作为哈尼族验方，有长期的临床用药基础，疗效肯定。笔者通过复制2型糖尿病（TyPe 2 Diabetes Mellitus，T2DM）大鼠模型，分析七花颗粒对T2DM大鼠糖尿病症状和肝肾胰组织病理改变的影响，为明确七花颗粒的降血糖机制提供科学依据。

1 材料与分析

1.1 材料 动物清洁级Wistar雄性的大鼠共48只，体重（220±20）g，由四川省医学科学实验动物研究所供给，许可证号码：SCXK（川）2013-24。药物七花颗粒（该方为保密处方，原药材由云南绿生药业有限公司提供），盐酸二甲双胍缓释片（规格：0.85g/片×20片，中美上海施贵宝制药有限公司生产）。试剂链脲佐菌素（streptozotocin，STZ，BiosharP）；FPG由安稳血糖测试仪测试（三诺安稳血糖测试条：长沙三诺生物传感科技股份有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 T2DM动物模型复制 取48只Wistar雄性大鼠，适应喂养1周，随机分为空白对照组、模型对照组、七花颗粒低剂量组、七花颗粒中剂量组、七花颗粒高剂量组、阳性对照组（二甲双胍），用苦味酸染色法标记。空白对照组用国家标准固体混合饲料喂养，其余各组使用高脂饲料喂养。4周后空白对照组在腹腔注射0.9%NaCl注射液，其余各组大鼠在腹腔注射30mg/kgSTZ（STZ溶于0.1mol/L、pH：4.4柠檬酸三钠-柠檬酸缓冲液中），之后每三天1次尾静脉采血检测血糖连续10d。空腹血糖≥11.1mmol/L且稳定时即T2DM模型复制成功，选入实验。

1.2.2 高脂饲料的配制 基础饲料67.5%（碳水化合物占53%，脂肪占5%，蛋白质占23%），食盐0.5%，白糖10%，猪油10%，蛋黄粉10%，胆固醇1%，猪胆盐0.5%，香油0.5%。实验高脂饲料由成都达硕生物科技有限公司按照上方配制，高压灭菌，真空包装，冷藏保存。

1.2.3 柠檬酸三钠-柠檬酸缓冲液的配制 0.1mol/L的柠檬酸母液A：2.101g-水合柠檬酸溶于100mL双蒸水中；0.1mol/L的柠檬酸三钠母液B：2.941g二水合柠檬酸三钠溶于100mL双蒸水中；二者按照A-B（28：22）的比例配制pH为4.4的缓冲液备用。

1.2.4 给药实验 共分为六组，每组8只，给药4周，灌胃给药容积为1mL/100g。实验组以七花颗粒（以临床剂量45g/60kg·d，按照体表面积换算生药剂量为：0.405g/100g·d）水煎剂，按照高中低剂量组4：2：1的梯度比例灌胃给药。阳性对照组以二甲双胍100mg/kg·d，水溶液灌胃给药。空白组和模型组不给药。测试给药第2、4周时大鼠血糖FPG。

1.2.5 脏器固定及染色 切取肝左叶、左肾及全部胰腺组织浸入10%的福尔马林溶液中固定。48h后的肝肾胰腺，通过洗涤，梯度酒精（浓度：70%、80%、90%、95%×2、100%×2，都为2h）按次序脱水，二甲苯透明，使用石蜡包埋，用轮转切片机切为薄片（厚度5μm为宜）。裱在无菌的载玻片上面，75℃烤片机烤片2h；二甲苯脱蜡5min 2次→乙醇洗蜡（100%→95%→90%→80%→70%→水冲洗）各5min。

肝脏和肾脏做HE染色（即苏木素6min+伊红3min）→70%～100%乙醇脱水→二甲苯透明→用树脂胶封片→显微镜下观察组织；胰腺做Mallory 三色法染色（Mallory 三色法染液：苯胺蓝0.5g，桔黄G 2g，磷目酸或磷钨酸1g，蒸馏水100mL）。在400倍的光学显微镜之下仔细观察肝肾和胰腺的组织病理学改变。

1.2.6 统计学方法 数据采用SPSS 18.0软件进行统计分析，各组数据中的计量资料用均数加减标准差（x±s）表示，行t检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 基本情况 实验开始后，每一天观察每一组饮食量及饮水量并记录，每五天称量全部大鼠体重、测定FPG。

2.2.1 饮食饮水量的变化 实验开始后，大鼠T2DM模型诱导过程前期饮水量呈轻度上升趋势，饮食量略有下降。给予STZ腹腔注射后，饮食量开始下降之后上升并保持平稳，饮水量极度上升并多尿消瘦。用七花颗粒灌胃之后，实验组饮食量开始上升并保持平稳，饮水量下降；模型对照组饮食饮水量一直呈现上升的趋势。

2.2.2 大鼠体重变化 实验开始后，大鼠T2DM模型诱导过程前期体重呈上升趋势，给予STZ腹腔注射后，体重开始下降，之后用七花颗粒灌胃，体重开始上升，模型对照组体重一直呈现下降的趋势。

2.2.3 大鼠血糖变化 实验前期所有大鼠的血糖稳定正常无差异，腹腔注射STZ后，血糖到达一个峰值。给药后大鼠血糖开始下降，4周后基本呈现一种稳定的状态。选取给药后2周、4周空腹血糖，如表1所示，七花颗粒可以有效地改善糖尿病大鼠模型的空腹血糖，差异具有统计学意义（P<0.05）。

2.2 肝脏病理改变 由图1可知，空白对照组：肝脏被膜结构正常，未见到炎细胞浸润；肝小叶的结构完整，肝细胞索多数排列整齐，围绕着中央静脉的呈放射状排列，肝细胞无明显增生。模型对照组：模型组肝细胞普遍水肿变性，易见肝细胞呈现为点状的坏死；肝血窦扩张闭塞、扭曲；汇管区有轻度炎性细胞的浸润，部分肝细胞脂肪变性。阳性对照组：肝细胞广泛水肿变性，易出现肝细胞坏死呈点状；部分肝血窦扩张闭塞、扭曲；一些大鼠汇管区有一定的炎细胞浸润。

七花颗粒低剂量组：肝细胞普遍水肿变性，易见肝细胞坏死呈点状；肝血窦扩张闭塞、扭曲；在汇管区有一定程度的炎细胞浸润聚集。七花颗粒中剂量组：肝细胞普遍水肿变性，部分动物见肝细胞坏死呈点状；肝血窦扩张闭塞、扭曲；汇管区有轻微的炎细胞浸润。七花颗粒高剂量组：部分肝细胞轻微水肿变性，小部分出现肝细胞点状坏死；肝血窦扩张闭塞、扭曲；一些大鼠主要在汇管区有微微的炎细胞浸润。

2.3 肾脏病理改变 由图2可知，空白对照组：肾小球主要分布于肾皮质部，未见细胞增生和炎症细胞渗出，肾小球毛细血管结构清楚，未见纤维增生及变性改变；肾小管数目较多，细胞的排列整齐，小管内未见出血等病变。模型对照组：肾小球以及肾间质充血，肾小管的上皮细胞有水肿，部分肾小球增大，系膜基质增多，系膜区增宽，肾小球内可以看到粉红色的沉积物；肾小管上皮细胞水肿，肾小管里面可以看到粉红染色蛋白性渗出物，可见肾小管上皮细胞变性脱落。七花颗粒低剂量组：肾小球及肾间质充血，肾小管上皮细胞水肿，部分肾小球的体积变大，系膜基质变多，系膜区宽度增加，肾小球内有粉红沉积物；肾小管上皮细胞水肿，肾小管内可见粉红染色蛋白性渗出物，见肾小管上皮细胞变性脱落。七花颗粒中剂量组：肾小球系膜区宽度增加，有少量粉红变性沉积物，主要沿球系膜区分布；肾小管上皮细胞水肿。七花颗粒高剂量组：肾小球系膜区增宽，有少量粉红变性沉积物，病变发生于部分肾小球，小球病变成节段性，主要沿球系膜区分布；肾小管上皮细胞水肿伴随变性脱落。阳性对照组：肾小球系膜区宽度增加，部分有少量粉红变性沉积物，主要沿球系膜区分布；肾小管上皮细胞水肿。

2.4 胰腺病理改变 由图3可知，空白对照组：胰腺外的分泌部形态清楚结构清晰；胰岛多呈现为圆形或者椭圆形的细胞团，分散在胰腺腺泡之间，数目比较多，胰岛的界限清晰，细胞团的大小各异，胰岛细胞的胞质丰富，胞浆淡染为浅粉红色，核大多数是圆形深染；胰岛内纤维成分比较少见。模型对照组：胰腺外的分泌部形态清楚结构清晰。胰岛分布稀疏，充血水肿；可见胰岛细胞发生核缩小和凝聚、空泡水肿变性等退行性改变，胰岛细胞数目减少；有细胞核缺失，细胞体积缩小，胞浆变浅可见组织残影，有胰岛细胞坏死，胰岛内纤维细胞增生，胰岛间质有逐渐纤维化的趋势。七花颗粒低剂量组：胰腺外的分泌部形态清楚结构清晰。胰岛分布稀疏，有充血和水肿；胰岛细胞发生核缩小和凝聚、空泡水肿变性等退行性改变，可见胰岛细胞的坏死，胰岛内的纤维细胞明显增生，胰岛间质渐渐纤维化趋势。七花颗粒中剂量组：胰腺外的分泌部形态清楚结构清晰。可见胰岛充血水肿。偶尔出现胰岛细胞的核缩小和凝聚、空泡水肿变性等退行性改变，罕有胰岛细胞坏死，胰岛细胞数量稍稍降低；个别大鼠胰岛内纤维细胞增生。七花颗粒高剂量组：胰腺外的分泌部形态清楚结构清晰；可见胰岛充血水肿。少见胰岛细胞发生核缩小和凝聚、空泡水肿变性等退行性改变，胰岛细胞数量略微变少；胰岛内少数纤维细胞增生。阳性对照组：胰腺外的分泌部形态清楚结构清晰；可见胰岛充血水肿；可见少量胰岛细胞发生核缩小和凝聚、空泡水肿变性等退行性改变，胰岛细胞数量有所降低；胰岛内偶见纤维细胞增生。

2.5 七花颗粒对2型糖尿病大鼠病理学改变的影响 空白对照组大鼠的肝脏、肾脏、胰腺基本正常，未见明显的病理改变。与模型组相比，七花颗粒给药组，肝脏组织细胞坏死少，脂肪变性程度轻；肾脏水肿程度低，渗出物少，粉红沉积物少；胰岛细胞数量多，核缩小和凝聚、空泡水肿变性程度轻，表明七花颗粒可以有效地改善糖尿病大鼠模型的病理组织学改变，对于糖尿病大鼠病理变化有延缓和治疗作用，对于恢复功能和阻碍病情发展效果明显。

3 讨论

由于人们的饮食结构改变，糖尿病的发病比例不断上升。糖尿病已然成为了第三大威胁人们身体健康的慢性非传染性疾病[1]。糖尿病疾病过程中所存在的高血糖，可诱发各组织，尤其是眼、心脏、血管、肾、神经的慢性损伤和功能方面的障碍。临床表现主要是多饮，多尿，多食，消瘦，疲乏无力，肥胖为主。近几年在中国糖尿病患病比例快速增长无可置疑[2]。

链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）通过葡萄糖转运蛋白2进入胰岛β细胞或烷化DNA，造成细胞死亡，使胰岛素不足引发高血糖，STZ是目前制备糖尿病动物模型使用较多的药物。本实验采用wistar雄性大鼠模拟T2DM发病过程，用高脂饲料喂养合并STZ诱导大鼠T2DM模型。先以高脂高糖饮食，诱发胰岛素抵抗，再配合低剂量的STZ，破坏部分胰岛β细胞的功能，二者相互结合使用可诱导大鼠血糖升高出现高胰岛素血症、血脂异常等病理生理的改变，与人类T2DM相类似[3]。

现代医学认为人体在代谢碳水化合物的过程中，肝脏吸收门静脉中的葡萄糖合成肝糖原，抑制糖原分解和糖异生，降低葡萄糖的浓度。血糖升高的主要原因是肝脏的胰岛素抵抗[4]。体内物质代谢重点依靠肝脏，肝脏功能的障碍自然引起代谢紊乱[5]。胰岛素分泌不足还有外周组织胰岛素抵抗是T2DM临床特点[6]。胰岛素抗性和胰岛β细胞功能受到损害是T2DM的主要病机，T2DM发病的中心环节是胰岛β细胞功能受到损害。肾小球的滤过功能受损是由高血糖引起的，从而使肾脏的超微结构的损伤病情逐步加重[7]。纤溶系统活性降低，微血管病变、糖尿病肾病等也是均是由于T2DM的胰岛素抵抗所致[8]。其是一个恶性循环的过程。肝肾脏胰腺可以反映糖尿病对机体的病理改变。检验糖尿病治疗药效方面，依靠血糖和肝肾胰腺的病理组织学改变。为糖尿病及其并发症的治疗方面提供依据，且对可临床用药有着积极的指导作用。

综上所述，七花颗粒在对糖尿病大鼠模型的症状改善，降低控制血糖方面效果显著，对肝脏、肾脏、胰腺的病理改变有一定的治疗和延缓作用。

参考文献

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[3]李晓东，封德梅，赵良功，等.红芪多糖HPS-3对2型糖尿病大鼠糖脂代谢和胰腺组织病理改变的影响[J].中药药理与临床，2012，28（1）：83-85.

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[7]孙岩萍，李兴，王强.糖尿病大鼠肾脏超微结构的变化[J].中国现代药物应用，2008，2（6）：34-36.

[8]孔园珍，张建飞.2型糖尿病肾病与血浆tPA、PAI-1水平及HOMA-IR的关系研究[J].浙江医学，2014，（12）：1070-1072.

（编辑：陶希睿）