生长调节剂对油茶离体诱导及增殖的影响

吴茂力；敬袁兵；张恺凯；古 勇

(四川省原子能研究院，四川 成都 610066)



生长调节剂对油茶离体诱导及增殖的影响

吴茂力；敬袁兵；张恺凯；古 勇

(四川省原子能研究院，四川 成都 610066)

以油茶“渝良油A1”为外植体试验材料，通过正交试验研究外源激素对油茶茎段诱导及增殖的影响。结果表明：玉米素可提高油茶诱导率，油茶外植体诱导的最佳培养基是1/2MS+IBA 2.5mg/L+6-BA2.5mg/L+ZT7mg/L+CH 600 mg/L；ABT-6号生根粉可促进油茶增殖培养，油茶增殖培养的最佳培养基是1/2MS+ ABT-6号4mg/L+IBA1mg/L+ KT1mg/L。

油茶；生长调节剂；组织培养；增殖

油茶(Camellia oleifera)为山茶科常绿经济作物，果实用于产油，其油质媲美橄榄油[1]，为世界四大木本油料作物之一[2]，同时也是我国主要木本食用油料作物，食用价值、药用价值以及工业价值极高。此外，油茶林还用于防火、保持水土、调节气候等[3]。 由于油茶极大的综合利用潜力，对油茶苗木的需求量增加。但油茶属于异花授粉，有性繁殖后代性状分离比较明显[4]，扦插繁育效率低，需时长，操作不便，难以推广，而组培育苗具有减小个体差异，保持优良母本的性状的优势[5]。颜慕勤等研究通过胚状体诱导形成了再生植株[6]。张智俊等用子叶为试验材料进行诱导， 结果表明湘林1号用2，4-D与KT诱导效果较好，而湘林4号则以6-BA与IAA诱导效果较好[7]。闻丽等研究表明2，4-D 与6-BA 组合是诱导油茶花药形成愈伤组织较好激素, 愈伤组织诱导率达42.74%[8]。丁植磊等研究表明2，4-D与NAA是诱导油茶花药愈伤组织较好的激素配比[9]。目前，利用油茶组培育苗存在的问题是防止培养过程中褐化、基部愈伤组织膨大、提高生根率等问题。目前，国内外油茶组织培养主要通过子叶[10-12]、花药[8-9]等外植体进行愈伤组织诱导，然后分化形成植株，而通过茎段腋芽出芽诱导还少见报道，为此，以油茶新生芽为外植体，经过研究建立其诱导及增殖体系，为油茶离体繁育技术的建立提供数据基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料为重庆油茶优良家系“渝良油A1”，试验材料采集于2013年5月。

1.2 外植体诱导

设计L16 (44)正交试验，采用3-吲哚基丁酸(3-indolebutyric acid，IBA)、6苄基嘌呤(6-Benzylaminopurine，6-BA)、玉米素 (zeatin，ZT) 3种植物激素对油茶愈伤组织进行诱导。油茶新生外植体用浓度为3%洗衣粉水中浸泡30min，然后用清水冲洗，在超净工作台上无菌条件下，放入0.1%氯化汞溶液中灭菌20min,再投入70%的酒精中浸泡8s，用无菌水冲洗4～5次后，立即接种于诱导培养基上(蔗糖25 g/L、琼脂4g/L，PH值为5.7)，每个处理32瓶，每瓶1株，置于温度为25±2℃的培养室散光培养5d后转入光照强度为1500～2000lx，光照时间为12h/d的条件下培养。

1.3 增殖培养

设计L9 (33)正交试验，采用ABT-6生根粉、3-吲哚基丁酸(3-indolebutyric acid，IBA)、激动素(kinetin，KT) 3种植物激素对油茶诱导成形幼芽进行增殖培养。诱导成形幼芽接种于增殖培养基上(蔗糖25 g/L、琼脂4g/L，PH值为5.7)，每个处理6瓶，每瓶2株，置于温度为25±2℃的培养室散光培养5d后转入光照强度为1500～2000lx，光照时间为12h/d的条件下培养。

1.4 数据处理

所有数据均采用Excel 2007和SPSS19.0软件进行分析，其中包括各种数据统计、统计图的制定、方差分析、LSD多重比较等。

2 结果与分析

2.1 植物激素对油茶腋芽诱导影响

外植体于诱导培养基，每间隔35d传代培养，传3次后萌发新芽，继代时统计诱导率，表1结果表明油茶诱导率在27%～81.3%之间。ZT对油茶离体繁育影响较大，随着玉米素浓度增高，油茶诱导率升高，ZT浓度为7mg/L，IBA浓度为2.5 mg/L，6BA浓度为1.5mg/L时，油茶最高诱导率为81.3%。诱导新芽经传代后生长出2至3片新叶，再经两次传代后可产生对生芽(图1)。

表1 不同植物激素水平对油茶诱导的影响

Table 1 Effect of different plant hormone levels on induction of Camellia Oleifera

图1 油茶诱导培养Fig1 Camellia Oleifera induce culture

注：1.油茶腋芽诱导出芽；2.油茶对生芽。数学数字代表不同处理。

Note：1. Lateral buds germnated from shoots of Camellia Oleifera.2. Right buds of Camellia Oleifera；Mathematical figures represented difference treatments.

2.2 外源激素对油茶茎段增殖的影响

表2表明ABT-6号生根粉及植物生长素IBA能促进油茶增殖培养，处理3、处理6、处理9油茶平均高度均较高，特别是与处理1、处理4、处理7相比植株明显拔高、分节。ABT-6号生根粉对油茶增殖培养中产生的基部愈伤组织有抑制作用。

图2结果表明，1，4，7号处理未添加ABT-6号生根粉，基部均分化愈伤组织，愈伤组织形态大、不规则、褐色，植株矮小，分节不明显，叶片下垂，植株无活力。

表2 不同激素水平对油茶继代苗增殖培养的影响

Table 2 Effect of different plant hormone levels on proliferation of Camellia Oleifera

图2 植物激素对油茶茎段增殖的影响Fig2 Plant hormone influence shoots buds proliferation

注：数学数字代表不同处理

Note：Mathematical figures represented difference treatments.

3 讨论

研究以油茶春季新出幼芽为外植体进行诱导，ZT浓度为7mg/L，IBA浓度为2.5mg/L，6-BA浓度为2.5 mg/L时(处理4)，诱导率达81.3%，高于吴正凯等研究茎段诱导53%[13]油茶花药42.74%愈伤组织诱导率[8]，随着ZT浓度的升高，外植体诱导率增加，表明ZT具有促进油茶诱导作用。

油茶增殖培养过程中，茎段基部易产生较多愈伤组织是油茶组织培养瓶颈[14]，研究利用ABT-6生根粉作为外源调节剂，增加油茶增殖繁育高度，减小基部愈伤组织，促进了油茶离体增殖繁育。根据结果，油茶增殖培养基以ABT-6浓度为4mg/L，IBA浓度为4mg/L，KT浓度为1 mg/L为最佳(处理3)。

[1] 黎先胜.我国油茶资源的开发利用研究[J].湖南科技学院学报，2005，26(11)：127-129.

[2] 庄瑞林.中国油茶[M].北京：中国林业出版社，1988：1-5.

[3] 王清连.植物组织培养[M].北京：中国农业出版社，2000.

[4] 李宝银，周俊新，李凌，等.乌桕与竹柏等树种混交效果评价[J].华东森林经理，2009，23( 1)：13-16.

[5] 林少韩.中国油茶生产现状及发展策略[J].世界林业研究，1989，2( 4)：70-76.

[6] 颜慕勤.油茶体细胞胚状体的发生[J]. 实验生物学报，1980，3(3)：343-347.

[7] 毕方铖，谭晓风，张智俊，等.油茶离体培养诱导再生植株的研究[J].经济林研究， 2004，22(2)：5-9.

[8] 闻丽，张日清，李典军.不同激素配比对油茶花药愈伤组织形成的影响[J].经济林研究，2005，23(4)：21-23.

[9] 丁植磊，张日清，刘友全，等.油茶12个物种花药愈伤组织诱导及继代培养[J].经济林研究， 2007， 25 (001)：20-24.

[10] 王瑞， 陈永忠，王湘南，等.油茶优良无性系叶片愈伤组织诱导研究[J].经济林研究，2009， 27 (002)：35-39.

[11] 张智俊， 金晓玲, 罗淑萍, 等.油茶子叶体细胞胚形成的细胞学观察[J].植物生理学通讯，2004，40 (005): 570-572.

[12] 张智俊，罗淑萍，李亚玲，等.油茶优良无性系子叶体细胞胚植株再生[J].植物学通报, 2005， 22 (B08)：43- 49.

[13] 吴正凯，郑晓峰.油茶组织培养技术研究[J].内蒙古农业科技，2008( 1)：63-64.

[14] 王瑞，陈永忠.油茶组织培养与植株再生研究进展[J].湖南林业科技，2006，33 (005)：63-66.

Effect of Plant Growth Regulator on Induction and Proliferation ofCamelliaOleiferain vitro

WU Mao-li;JING Yuan-bing;ZHANG Kai-kai; GU Yong

(SichuanInstituteofAtomicEnergy,Chengdu,Sichuan610066)

To investigate the effect of different growth regulator on Camellia Oleifera induction and shoots proliferation. “Yuliang YouA1”new buds were used as materials. The optimum combination of plant growth regulators in 1/2MS culture medium for plant regeneration was established by orthogonal test. The results revealed zeatin promoted buds induction ratio, the most effective medium was 1/2MS+2.5mg/L-1 IBA+2.5mg/L-16-BA+7 mg/L-1ZT+600 mg/L-1 CH. ABT-6 rooting powder had effective on shoots proliferation, the most effective medium was 1/2MS+4mg/L-1 ABT-6+1mg/L-1IBA+1 mg/L-1KT.

Camellia Oleifera; growth regulator; tissue culture; proliferation

2016-09-02

四川省科技支撑计划项目(2014SZ0132)

吴茂力(1977-)，男，副研究员，主要从事水稻育种与耕作研究。