大乌泡药材的薄层色谱鉴别实验*

刘 瑶, 陈 瑞， 蔡 进， 刘珈伲， 刘丽娜， 黄 静

(贵州医科大学 药学院， 贵州 贵阳 550025)



大乌泡药材的薄层色谱鉴别实验*

刘 瑶**, 陈 瑞， 蔡 进， 刘珈伲， 刘丽娜， 黄 静***

(贵州医科大学 药学院， 贵州 贵阳 550025)

目的： 建立大乌泡药材的薄层色谱鉴别方法。方法: 以槲皮素和山柰酚为对照品，甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1，V/V/V)为展开剂，定量吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一块硅胶G薄层板上，1% AlCl3及乙醇溶液显色后，置于紫光灯下365 nm处检视。结果: 27批大乌泡药材薄层色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。 结论： 薄层色谱方法可用于大乌泡药材的质量控制。

中草药； 色谱法，薄层； 大乌泡； 山柰酚； 槲皮素

大乌泡为蔷薇科悬钩子属大乌泡(RubusmultibracteatusLevi & Vant)的干燥叶，味微苦，性凉，具清热解毒、祛风除湿、凉血、止血、接骨的功效，民间多用于治痢疾、腹泻、风湿痹痛、咳血、妇女倒经、骨折等，主要分布于四川、云南、贵州等[1]。大乌泡载于《中国苗族药物彩色图集》、《全国中草药汇编》、《中药大辞典》、《中华本草》及地方本草著作《云南中草药》、《贵州省中药材、民族药材质量标准》，作为民间常用苗药，其质量控制研究较为薄弱，缺少以药材专属性成分为对照品的质量标准研究。本实验室前期通过对大乌泡药材化学成分的研究，从乙酸乙酯部位分离得到化合物槲皮素和山柰酚[2]，本文将以二者作为对照品，研究大乌泡药材的薄层色谱鉴别方法，为大乌泡药材的质量控制提供依据。

1 材料与方法

1.1 药品、仪器与试剂

槲皮素对照品(批号100081-201408，纯度99.1%)、山柰酚对照品(批号110861-201310，纯度93.2%)均购自中国药品生物制品鉴定所；27批大乌泡样品均采购于贵州凯里，经贵州医科大学龙庆德鉴定为蔷薇科悬钩子属植物大乌泡(RubusmultibracteatusLevl&Vant)的干燥叶,样品信息见表1。仪器为手提式高速中药粉碎机(温岭市大德中药机械有限公司)，EL204电子天平(梅特勒托利多仪器有限公司)，HH-2数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)，HS-10260D超声波清洗

表1 大乌泡药材样本采收时间Tab.1 The sample information of Rubusmultibracteatus Levl & Vant

器(天津恒高科技发展有限公司)，CAMAG Linomat薄层色谱点样器(瑞士卡玛公司)ZF-2型三用紫外仪(上海市安亭电子仪器厂)，硅胶G、硅胶GF254、聚酰胺薄膜(青岛海洋化工厂分厂)，点样毛细管(上海欣鹏玻璃仪器有限公司)，双槽展开缸，所用试剂均为分析纯。

1.2 对照品溶液的制备

取槲皮素和山柰酚适量，分别用甲醇溶解，制成0.5 g/L的对照品溶液。

1.3 供试品溶液的制备

取大乌泡药材适量，粉碎，精密称取大乌泡药材粗粉1 g，加入50 mL甲醇，超声提取1 h，滤过，滤液中再加入12.5 mL盐酸，70 ℃水浴水解1 h，迅速冷却，水浴浓缩至干，残渣加2 mL甲醇使之完全溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。

1.4 薄层色谱鉴别

参照《中国药典》2010版一部附录VI B薄层色谱法[3]，分别吸取对照品溶液2 μL、供试品溶液16 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1，V/V/V)为展开剂，预饱和15 min，展开、取出、晾干，喷1% AlCl3乙醇溶液，适当加热后，置紫光灯下365 nm波长下检视。

2 结果

结果显示，27批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置显示相同颜色的荧光斑点。见图1。

注：1～27为27批大乌泡供试品，a为山柰酚，b为槲皮素图1 27批大乌泡的薄层色谱Fig.1 TLC chromatograms of 27 batches of Rubus multibracteatus Levl & Vant

3 讨论

实验对甲醇和乙醇两种溶剂进行了考察，乙醇提取液的样品斑点显色不明显，甲醇提取液的样品斑点清晰，圆而集中，因此提取溶剂选用甲醇。曾分别对70 ℃水浴回流提取1 h、超声提取1 h和索式提取3 h进行了考察，比较3种提取方式的提取效果。结果显示回流提取的样品斑点较明显，但不规整，分离效果差；超声提取的样品斑点清晰圆整，分离度高；索式提取的样品斑点荧光较弱，无法鉴别，因此提取方式选用超声提取1 h。

为得到最佳展开效果，本实验结合文献[4-9]报道，试验了多种展开系统：甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1，V/V/V)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1，V/V/V)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶1，V/V/V)、环己烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶10∶1，V/V/V)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(10∶9∶1，V/V/V)等，比较实验结果发现，在展开系统为甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1，V/V/V)时，得到的薄层色谱分离度好，斑点规整清晰，Rf值重复性好。

本实验曾使用硅胶G薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜等，其中硅胶G薄层板样品分离效果最佳，硅胶GF254薄层板未能使样品斑点达到良好的分离效果，聚酰胺薄膜中样品斑点严重拖尾，因此薄层板选用硅胶G薄层板。根据黄酮类成分可与部分金属盐类反应，生成有色金属络合物的特点，对1% AlCl3乙醇溶液[10-12]进行了考察，并考察了通用显色剂2%香草醛硫酸溶液和10%硫酸乙醇溶液对薄层鉴别的影响。结果显示，1% AlCl3乙醇溶液在365 nm紫外光下荧光明显且斑点清晰，2%香草醛硫酸溶液和10%硫酸乙醇溶液荧光较弱且易减退，因此选择1%AlCl3乙醇溶液作为显色剂。实验中用薄层色谱点样仪分别对供试品和对照品的点样量进行了考察，并最终确定当槲皮素、山柰酚对照品点样量为2 μL，供试品溶液点样量为16 μL时，色谱斑点丰富，明显且清晰。

实验对27批同产地不同采收期的大乌泡药材进行了薄层鉴别，结果显示，在27批大乌泡药材样品色谱图中，与槲皮素、山柰酚对照品色谱图的相应位置上，具有相同颜色的荧光斑点，且斑点圆整、清晰，分离效果好，Rf值适中。苗药大乌泡作为一种民间常用药，其质量标准现仅在《贵州省中药材、民族药材质量标准》中收录，该质量标准简单，并未有相关薄层鉴别，本实验在大乌泡药材质量控制研究稀少的背景下，首次以槲皮素和山柰酚为对照品，建立了大乌泡药材的薄层鉴别方法，该方法简便且重复性好，可用于其质量控制。

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[2] 孟鑫.大乌泡镇痛、抗炎药效物质基础研究[D].贵阳：贵州医科大学， 2015.

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(2016-10-05收稿，2016-11-26修回)

中文编辑： 刘 平； 英文编辑： 刘 华

Experimental Research on TLC Identification ofRubusmultibracteatusLevl&Vant

LIU Yao， CHEN Rui， CAI Jin， LIU Jiani， LIU Lina, HUANG Jing

(CollegeofPharmacy,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550025,Guizhou,China)

Objective: To establish the TLC identification method ofRubusmultibracteatusLevl&Vant. Methods： Quercetin and kaempferol was used as the reference substance.The spread solvent was made of toluene-ethyl acetate-formic acid(5:4:1,V/V/V). The quantitative reference substance solution and test solution were drawn onto the same silica gel G. Drawing quantitative reference substance solution and test solution on a silica gel G. Color display was made by spraying 1% aluminum chloride acid ethanol. The fluorescence chromatogram was detected at 365nm in the UV lamp. Result: The spots in the chromatogram of the 27 batches ofRubusMultibracteatusLevl&Vanthad the same color as quercetin and kaempferol in corresponding position. Conclusion: Thin layer chromatography method can be used for the quality control ofRubusmultibracteatusLevl&Vant.

drug,Chinese herbal; chromatography,thin layer;RubusmultibracteatusLevl&Vant; kaempferol; quercetin

贵州省科技厅中药攻关项目[黔科合ZY(2011)3005]

时间：2016-12-15

http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1164.R.20161215.1534.003.html

R285.1

A

1000-2707(2016)12-1408-03

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.12.009

**贵州医科大学2014级硕士研究生

***通信作者 E-mail:huangjgy@sohu.com