小鼠体外寄生虫的药浴治疗

翟青新

(南京大学医学院附属鼓楼医院动物实验中心，南京 210008)

经验交流

小鼠体外寄生虫的药浴治疗

翟青新

(南京大学医学院附属鼓楼医院动物实验中心，南京 210008)

目的 伊维菌素全群药浴法治疗小鼠体外寄生虫。方法 近800只自繁自用基因工程保种小鼠，伊维菌素药浴液浓度为1% (L/L)，每只鼠至少药浴游泳1 min，中途用漏勺把鼠头按压入药液3～4次。10日龄内小鼠需单独人工辅助药浴。药浴后换笼，同时环境驱虫，只药浴1次。结果 全群死亡率约2%。随访18个月，未再见到体外寄生虫，鼠群健康，繁殖正常。结论 伊维菌素注射液全群药浴法治疗小鼠体外寄生虫切实可行。

小鼠；消灭；体外寄生虫；伊维菌素；药浴

2014年11月某实验动物使用许可单位屏障设施，共有8间饲养室。其中1间饲养室里的独立通气饲养笼架(IVC，individual ventilated cages)共有120笼近800只小鼠，用于转基因或基因敲除小鼠的研究或保种，大多数都弥足珍贵，已世代繁衍了近10年，期间有从国内外购买、引进(或被赠予)的，小鼠进入屏障时都有生产许可证和该批次实验动物质量检测证明。但在IVC不锈钢平板架上，肉眼可见寄生虫在快速爬行；饲养笼内侧面及纸膜盖内侧，肉眼依稀可见似芝麻大小安静的寄生虫。寄生虫可能来源于购入引进的鼠或随科研人员的物品侵入[1]，该室鼠属于外单位寄养鼠，运行模式是只提供场地和常规饲养服务，思想麻痹、管理松懈。按国标要求只能全群淘汰或剖腹净化。肉眼观察鼠，几乎正常，没有症状。为了消灭这些寄生虫，我们采用伊维菌素药浴的方法[2]，从发现疫情到全群药浴完毕共花了约21 d时间，又随访了近18个月，证明此方法效果确实，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 动物

自繁殖近10年用于基因工程研究的B6背景的小鼠近800只。

1.2 主要药品

消毒片(主要有效成分：三氯异氰尿酸)、市售杀虫气雾剂(胺菊酯0.3%，氯氰菊酯0.15%，右旋烯丙菊酯0.1%)。伊维菌素注射液(四川恒通动物制药有限公司，批准文号：兽药字(2013)220382646，批号20131108)，规格10 mL:10万单位。双甲脒(江西博莱大药厂，批准文号：兽药字(2009)140061046，批号20140810，规格10 mL:12.5%)。

1.3 主要物品

XTS-4A型手术显微镜(镇江光学仪器厂，10×)，无菌冷水。卫生纸、漏勺、量杯500 mL、尺、热水；药浴小桶(高20 cm，桶底直径14 cm，桶口直径20 cm)、剪刀、温度计、不同颜色或做好记号的大桶(分别用来盛热水、冷水、脏水)；记号笔、时钟、电吹风。以上新进入屏障的物品分别按最合适的方法进行灭菌或消毒(高压；消毒液浸泡；紫外线照射。)

1.4 方法

1.4.1 各种水的配置：擦拭消毒：约20℃，2片/L(有效氯浓度1 000 mg/L)。擦拭驱虫：1支双甲脒倒入3 L约40℃ 水。药浴：3瓶伊维菌素倒入3 L约(36～37)℃的药浴小桶，水深约12 cm，浓度为1% (L/L)。1瓶伊维菌素倒入1 L约(36～37)℃的浅盘，用于人工药浴10日龄内的小鼠。由脉动真空灭菌器(XG1.DME-0.6B)提供无菌热水，无菌冷水(约20℃)直接在屏障内取用。用量杯和温度计现用现配合适体积和温度的水，可在桶上画出体积刻度，便于重复配置。

1.4.2 药浴[3]前期准备：饲养室：喷洒杀虫气雾剂重点是墙角的回风口，IVC机箱送风口的过滤膜、与房顶相接的排风管道、IVC不锈钢层板。洁储室：清空、喷洒杀虫气雾剂。3 h后，对饲养室和洁储室清洁、消毒水擦拭30 min后再清洁。洁储室放入由灭菌器提供的以下无菌物品：饲养笼、刨花垫料、金属网盖、饮水瓶、瓶塞、挂钩、挂牌、纸膜。60Co辐照灭菌的颗粒垫料。提前2 h调节屏障设施的温度，使室温达到(24～26)℃。

1.4.3 伊维菌素药浴后换笼，每笼鼠与挂牌一致，不能出错。有孕鼠及乳鼠的，牌上作标记，重点观察：先全部更换新挂牌。把笼A小鼠逐个放入小桶药浴，挂牌挂在桶边，确认只数，开始计时，中途用漏勺把鼠头按压入药液3～4次，每只鼠至少药浴游泳1 min。用漏勺捞出小鼠，放入周转笼T(主要作用是吸水：无菌带金属网盖的饲养笼，其内是无菌颗粒垫料或卫生纸)，挂牌挂在笼T边。助手用电吹风(恒温档)隔着金属网盖轻吹鼠毛。开始药浴笼B，药浴快结束时，助手关电吹风，周转笼T腾空，把笼A鼠放入无菌垫料笼A’[ 药浴前与其接触的所有的物品(饲养笼、垫料、金属网盖、饲料、水瓶、瓶塞、水、纸膜盖、挂钩)全部更换]，挂牌同步转移。确认只数。笼A’放入安全处暂不回到原位。依次类推。3 L水可以洗10笼小鼠。浴液变脏、变少、变冷后要及时更换。周转笼内的颗粒垫料潮湿要及时更换。10日龄内的鼠需单独人工辅助药浴。

1.4.4 双甲脒擦拭、杀虫气雾剂喷洒驱虫：笼架所有面及缝隙孔洞处仔细擦拭清洁后再擦拭驱虫。一侧60笼的架子清空后再统一插入饲养笼。120笼更换完毕，最后离开时，室内喷洒杀虫气雾剂。

1.5 长期疗效观察

小鼠全群药浴后，在不同天数进行肉眼观察和镜检。

2 结果

2.1 耗时

120笼药浴共耗时3 h。

2.2 死亡率

全群死亡率约2%。药浴时无意外溺亡。分别在药浴24 h、48 h后，逐笼排查尸体。48 h内，3日龄内的5窝共40只，死亡6只； 4～10日龄内的5窝共40只，死亡3只；接近12月龄的年长鼠20只，死亡5只。48 h后死亡只数未见增加。

2.3 孕鼠的繁殖

药浴48 h后观察，肉眼能识别的10只孕鼠，有2只已正常生产哺乳带仔，另外8只孕鼠正常。

2.4 环境中肉眼可见寄生虫

药浴换笼结束后，按常规每7 d换笼1次。18个月来，仔细肉眼观察笼内壁、纸膜盖内侧、笼架表面的寄生虫，均未见到。

2.5 鼠体表寄生虫

根据经典的方法[4]，每3个月随机抽检 20 只，18个月来，均为阴性。

2.6 鼠群繁衍

18个月来，一切正常。

3 讨论

3.1 蜱是暂时寄生，外界环境的灭虫工作更重要，要群防群控

从分类学的角度，节肢动物门蛛形纲蜱螨亚纲的进一步细分值得研究[5]。但从治疗的角度可分成蜱和螨：一般来说肉眼可见是蜱，螨肉眼不可见[6]。蜱嗅觉敏锐，依靠化学感觉寻找宿主，15米外就能感受到宿主[5，7]。因本次事件主要任务是消灭肉眼可见的体外寄生虫，故推测肉眼可见物是蜱。因B6鼠高发(黑皮黑毛)、老龄鼠高发[8]，而基因工程所用的皆为B6鼠，也会有接近12月龄的年长鼠，但其表型与是否感染寄生虫不一定一致。蜱的发育经过卵、若虫、幼虫、成虫4个阶段。硬蜱和软蜱生物学特性略有差异[5]：硬雌蜱交配后吸饱血离开宿主落地，软蜱只有在吸血时才在宿主身上，在外界环境中隐蔽地度过其生活史的大部分时间。由此可见蜱属于暂时寄生，不是永久寄生。这或许能解释，为什么外界环境中肉眼能见虫时，根据经典的方法[4,5]，依然在鼠身上找不到寄生虫。这也提示我们，从鼠身上查不到寄生虫，并不能说明没有寄生虫。螨是永久寄生，直接接触传播，不太容易全群爆发。

3.2 药浴

3.2.1 室温、水温及水深：为了让鼠游泳时不感到太冷，屏障室温要调得略高点，人会稍感不适，需要克服。水温要合适，低了不宜洗澡且影响药效，过高会引起中毒。水面面积要合适，太大不易兼顾到每只鼠；成年小鼠体长及尾长都在9 cm左右，水深约12 cm，水太浅小鼠会蹦跳，水太深极个别不会游泳，沉底的鼠，不便于打捞抢救。

3.2.2 成年鼠、年长鼠、孕鼠、带乳母鼠及乳鼠的情况分析[9]：成年鼠正常。年长鼠死亡率较高。孕鼠正常，特别是临产前仍可以药浴，对繁育无任何不良影响。乳鼠有一定死亡率。

3.2.3 药浴1次即可，先小样本试验再全群进行，其后每周换笼1次[10-12]：因无先例可寻，咨询信鸽药浴浓度后，确定浓度，初次试验100只，观察21 d，成功后，大规模药浴。本次全群药浴，即刻换笼。2% 死亡率，可能因个体差异及月龄不一，或有过敏(颤抖)、中毒、感冒发烧，实属正常。药浴只进行了1次，再也没发现体外寄生虫。观察1.5年来，对繁育无任何不良影响。说明本方法完全可靠。

3.3 阻断传播途径：

3.3.1 鼠药浴后，要进行换笼：与浴前鼠接触的物品全部更换。人员分工明确，药浴前后的鼠由不同的人抓取。擦拭笼架由专人负责。脏垫料焚烧。

3.3.2 老式 IVC架比普通笼架或更易传播体外寄生虫：从阻断传播途径的角度和蜱对弱光为正反应的生物学特性[5]。普通笼架及其饲养笼(无盖)构造简单，无死角，通透，便于彻底打扫清洁。已用了10年的老式IVC架子使120笼连成一片，不锈钢层板底面及与饲养笼配套的纸膜盖内侧光线极暗；平时换笼的时候，不锈钢板底面特别是送排风孔洞的卫生容易忽视，大多数纸膜盖是破的，纸膜盖也没有每次与饲养笼同步更换，与房顶相通的多皱褶排风管道也是卫生死角。此屏障设施其他饲养室为普通笼架，且饲养的是实验周期不超过4个月的实验鼠，这些饲养室未观察到体外寄生虫。

3.3.3 给药后必须换笼：药浴、口服(饮水[2]、拌料[13])、皮下注射[14]都可以用来治疗寄生虫。皮下注射给药血药浓度较高，吸收更充分，作用时间更长，故对外寄生虫的药效强于口服给药。针对鼠群大小，可采取不同的方法。但都必须换笼，进行环境灭虫。

3.4 密闭与屏障设施的送排风

屏障的消毒、驱虫方式众多，气体消毒或喷雾理论上都需要密闭，但一般的屏障设施送排风的控制是“全或无”，不能每室独立控制。根据经验，正常的送排风对于有密闭要求的处理效果影响不大。

3.5 注意操作细节

正确认识喷雾灭虫、清洁、消毒、再清洁、擦拭驱虫、再喷雾驱虫这6个步骤。消毒前必须清洁到位，消毒后，要再次清洁。防止对金属的腐蚀、或降低后续杀虫剂的作用。

3.6 暴露出的问题

屏障设施的管理模式是：小鼠离开屏障就不得返回。但实际科研中，有些小鼠需要进行影像检查(X线，CT，彩超)或放疗，而这些仪器屏障内又没有，势必要将鼠带离屏障，但其后，还要继续饲养用于科研。现实情况是：科研人员在自己的实验室附近会有极小规模的临时普通饲养室；在具有使用许可的屏障设施内有个大规模的饲养室，他们就穿梭在不同级别的饲养室之间。屏障设施各饲养室一直满负荷运转，没有空舍的时机，鼠群世代繁衍，不自检，又从不驱虫。普通设施临时饲养实验小鼠这种特殊形式将在一段时间内不会消失，只要自然界存在野鼠，寄生虫防治就是一项长期的艰巨任务。

3.7 可防可控

加强管理：排查所有穿梭在不同级别饲养室的人员，重点管理，禁止携带一切在普通饲养室使用过的物品(特别是纸箱、纸盒、纸包、纸袋、本子、笔)进入屏障设施。鼠必须带出进行实验的，须提前预约，由屏障内统一提供无菌的含垫料纸箱。因本次大规模药浴的成功，积累了足够的经验。对普通设施饲养室寄生虫防治给予科学指导，把疫病防治消灭在萌芽状态。

综上所述：伊维菌素[15,16]具有广谱、 高效、 用量小和安全等优点，对体内外寄生虫特别是线虫和节肢动物均具有高效驱杀作用。此方法有其积极的实际意义，值得推广应用。

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Medicated bath for eradication of external parasites in mice

ZHAI Qing-xin

(Center of Animal Experiments, Nanjing Drum Tower Hospital, The Affiliated Hospital of Nanjing University School of Medicine, Nanjing 210008, China )

Objective To report the results of medicated bath with ivermectin for eradication of external parasites in mice. Methods Nearly 800 genetically engineered mice which are self-used were treated with ivermectin medicated bath in concentration of 1% (L/L) to eradicate external parasites. Each mouse swims at least 1 minute, including immersing the head into solution for 3-4 times with a colander. Manual auxiliary medicated bath was needed for less than 10-day ones.All cages and materials were changed after the medicated bath, and environmental disinfection was performed at the same time. Medicated bath was used only once. Results Mortality rate of the mice was about 2%. The mice were followed-up for 18 months, and no reinfection with external parasites was observed. The mice were healthy and reproduction was normal. Conclusions Medicated bath with ivermectin is effective and feasible for eradication of external parasites in laboratory mice.

Mice; External parasites; Eradication;Ivermectin; Medicated bath

翟青新 (1973 - )， 女， 硕士， 高级兽医师， 研究方向：实验动物饲养与科研管理。E- mail: 1508505619@ qq.com。

R-33

A

1671-7856(2017) 02-0070-04

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.02.013

2016-12-01