猪圆环病毒3型在韩国猪群中的流行状况调查

咸 文 梁海英等译

猪圆环病毒3型在韩国猪群中的流行状况调查

咸 文 梁海英等译

猪圆环病毒（Porcine circovirus， PCV）是环状病毒科圆环病毒属的无囊膜病毒，基因组为单股环状DNA。众所周知，猪圆环病毒1型（PCV1）和猪圆环病毒2型（PCV2）均对猪具有感染性。但是，最早被鉴定为PK-15细胞污染物的PCV1已知对猪是无致病性的，而PCV2感染则可导致诸如断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS），猪皮炎与肾病综合征（PDNS）及种猪繁殖障碍等多种与猪圆环病毒2型相关疾病（PCVAD），使养猪业遭受巨大的经济损失。在韩国，PCV2于1999年从具有PMWS的样品中被首次鉴定报道，现已成为韩国猪群中普遍存在的病原之一。

最近，利用宏基因组学方法，在具有PDNS和繁殖障碍的临床病例中，鉴定出一种被称为猪圆环病毒3型（PCV3）的新型猪圆环病毒。此外，PCV3在患心脏和多系统炎症的病猪中也可被检测到。尽管对PCV3的关注越来越多，但目前在韩国对这种病毒的分布情况知之甚少。本研究拟对收集的口腔液样品进行PCR检测，以确定PCV3在韩国的流行现状和遗传特征。

2016年，实验共随机收集了源自6个地理省份的73个不同养殖规模（200～500头母猪）的自繁自养猪场的共360管口腔液样本（1管样本约来自20头猪），每个采样猪场的临床病史和疾病状况未做调查。样本被分为4组，即断奶组（67/360），生长组（136/360），成年组（124/360）和病猪组（33/360）。所有样品分别以3 000r/min离心10min处理后，取上清液分装保存于-80℃备用。使用DNA提取试剂盒，分别提取-80℃保存备用的口腔液样品中的病毒DNA。

利用针对PCV3 ORF2的特异性引物，对提取的DNA进行PCR检测，预扩增大小为330bp（Palinski et al.， 2017）。检测结果显示，在360管口腔液样本中，159个样本呈现PCV3病毒DNA阳性（44.2%），72.6%（53/73）的猪场中存在PCV3病毒DNA，广泛分布于韩国各省。四组中患病率最高的为病猪组，比例为51.5%；生长组（42.6%）和成年组（41.1%）明显低于断奶组（49.3%）。

从9个不同猪场中选出PCV3强阳性样本，分别使用两对PCV3特异性引物进行扩增，共获得了9个毒株（KU毒株）的全长基因组（GenBank登录号KY996337～KY996345），大小与其他PCV3毒株相同均为2 000bp，推导的ORF2大小均为645bp。序列分析结果表明，PCV3韩国毒株与美国毒株全基因序列相似性为98.9%～99.8%，推导的ORF2的序列相似性为97.9%～99.8%；PCV3韩国毒株之间的全基因序列相似性为99.0%～99.9%，ORF2的序列相似性为98.1%～100%；PCV3韩国毒株与美国毒株的Cap蛋白氨基酸序列相似性均为97.6%～100%。

系统发育分析显示，韩国PCV3病毒与美国和中国PCV3病毒株密切相关。在这两个系统发育中，韩国PCV3毒株是分散的，没有任何基于国家的地理关联。

PCV3是最近在猪场中出现的一种猪的新型病毒，其感染的猪表现出PDNS和繁殖障碍等临床症状；尤其是经过宏基因组测序显示，只有PCV3能从流产胎儿中被检测出来（Phan et al.，2016；Palinski et al.，2017）。 在韩国也出现了类似情况，即从发生繁殖障碍的猪场中获得的流产胎儿，经检测仅从样本中发现有PCV3，却未检测到任何与流产相关的其他病原体。

据报道，在中国PCV3也是在繁殖障碍猪群及新生仔猪急性死亡中唯一能检测到的病原体（Ku et al，2017）。这些报道表明，PCV3与繁殖障碍之间可能存在关系。虽然尚未在猪细胞系中分离获得PCV3（Palinski et al，2017），但通过建立一个能在体外分离获得病毒的体系来研究PCV3的发病机理，不失为一个新的研究方向。

本研究扩大了对PCV3分布和遗传特征的认识，PCV3在韩国猪群中广泛分布，病猪群样本检出率最高。在韩国，PCV3在猪群和猪场的阳性检出率，明显高于此前中国猪群（34.7%，77/222）和猪场（68.6%，24/35）的流行病学调查结果（Ku et al，2017），这可能与口腔液样品采集方法更具广泛性有关，其是评估猪群健康状况的有效方法。

遗传进化分析表明，PCV3毒株间的基因组成高度相似，然而也发现了较小的遗传多样性。由于PCV2疫苗效果在一定程度上体现了PCV2的临床意义，虽然PCV3的临床意义尚未明确，但还需通过各种方法进行临床观察及实验研究，以确定PCV3与临床表现之间的关联。

摘自《猪业科学》2017年第10期