广东紫珠茎和叶乙醇水提取物的乙酸乙酯溶性部位化学成分研究(Ⅱ) △

陈冈，付辉政，戴冕，冯童童，王栋

(1.江西省人民医院，江西 南昌 330006；2.江西省药品检验检测研究院 江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330046)

·基础研究·

广东紫珠茎和叶乙醇水提取物的乙酸乙酯溶性部位化学成分研究(Ⅱ)△

陈冈1，付辉政2*，戴冕2，冯童童2，王栋2*

(1.江西省人民医院，江西 南昌 330006；2.江西省药品检验检测研究院 江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330046)

目的：研究广东紫珠CallicarpakwangtungensisChun茎和叶的70%乙醇水提取物的乙酸乙酯萃取部位的化学成分。方法：利用硅胶、ODS、Sephadex LH-20、MPLC等柱色谱方法进行化合物的分离纯化，根据化合物的薄层色谱和波谱分析方法及文献资料查询来进行结构鉴定。结果：从广东紫珠乙酸乙酯溶性部位分离得到8个化合物，分别为：乌药倍半萜内酯D(1)，丁香酸(2)，黑麦草内酯(3)，荆芥内酯(4)，4-羟基苯甲酸(5)，4-羟基苯甲醛(6)，日本金粟兰内酯A(7)，1R，8-二羟基薄荷醇(8)。结论：化合物1、3～8为首次从该植物中分离得到。

广东紫珠；马鞭草科；化学成分

广东紫珠CallicarpakwangtungensisChun为马鞭草科(Verbenaceae)紫珠属(CallicarpaL.)植物，别名万年青、珍珠风、臭常山、老鸦饭等。灌木，高约2 m，主要分布于浙江、江西、福建、湖北、湖南、贵州、福建、广东等地，生于海拔300～1600 m的山坡林中或灌木丛中[1]。广东紫珠在民间习称“紫珠草”，在江西萍乡地区民间沿用已久，是20世纪70 年代中草药运动发掘出来的药物[2]。广东紫珠具有清热解毒、凉血止血、消炎生肌等功效，主治偏头风痛、吐血、跌打肿痛、外伤出血等[3]。该植物在民间主要用于止血疗伤，多数以茎叶水煎内服或研末外敷。目前，国内外学者报道了广东紫珠主要含有黄酮苷[2，4-6]、苯丙素糖苷[2]、三萜[2，5-7]、酚酸[2，4-5]等类化合物。在前期研究基础上，继续对其化学成分进行研究。利用各种色谱技术从广东紫珠茎和叶的70%乙醇水提物的乙酸乙酯溶性部位分离鉴定了8个单体化合物，分别为：乌药倍半萜内酯D(1)，丁香酸(2)，黑麦草内酯(3)，荆芥内酯(4)，4-羟基苯甲酸(5)，4-羟基苯甲醛(6)，日本金粟兰内酯A(7)，1R，8-二羟基薄荷醇(8)。化合物1、3～8均为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

Varian UNITY INOVA 600超导核磁共振仪(美国Varian公司)；MicromassZabSpec质谱仪(美国Micromass公司)；岛津2010系列高效液相色谱仪(日本岛津公司)；Buchi中压液相制备色谱仪(瑞士步琪公司)；岛津20-AD型制备高效液相色谱仪；C18反相填料为日本YMC产品；Sephadex LH-20(瑞典Amersham Biosciences 公司)；Sartorius BP211D型电子天平(德国赛托利斯集团)；UV-260分光光度计(日本岛津公司)；柱色谱硅胶(200～300目)、薄层色谱硅胶(青岛海洋化工厂)；水为娃哈哈纯净水，氘代试剂DMSO-d6(美国剑桥公司CIL)；其他试剂均为分析纯。

广东紫珠原药材采自江西萍乡，经江西省药品检验检测研究院周国平主任中药师鉴定为马鞭草科植物广东紫珠CallicarpakwangtungensisChun的干燥枝及叶。标本保存在江西省药品检验检测研究院中药标本室。

2 提取与分离

广东紫珠的茎和叶干药材150 kg，粉碎，用6倍量70%乙醇水浸泡4 h，加热回流提取3次，每次2 h，浓缩至浸膏40 L，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。萃取液分别减压浓缩至干，得石油醚溶性部分(23.2 g)、乙酸乙酯溶性部分(312 g)和正丁醇溶性部分(521 g)。将乙酸乙酯溶性部分用适量甲醇溶解后，用1∶1.5的硅胶拌样，经正相硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯(8∶1)为洗脱剂，依次接下14份500 mL洗脱液及8份切得干柱组分Fr.1～Fr.22。Fr.8(7.2 g)以三氯甲烷-甲醇(30∶1～2∶1)为洗脱剂进行正相硅胶柱色谱，经薄层色谱检视，合并相近的组分，得6个组分(Fr.8-1～Fr.8-6)。Fr.8-5(2.1 g)经中压制备液相色谱，以甲醇-水(20∶80～80∶20)梯度洗脱，经高效液相色谱检测后，合并为7个部分(Fr.8-5-1～Fr.8-5-7)，Fr.8-5-3(15.1 mg)经反相高效制备液相色谱，以甲醇-水(30∶70)(7 mL·min-1)为流动相，得到化合物1(7.4 mg)。Fr.8-5-4(120 mg)经反相高效制备液相色谱，以乙腈-0.1%三氟乙酸(21∶79)(7 mL·min-1)为流动相，得到化合物2(12.5 mg)、3(10.6 mg)和4(6.3 mg)。Fr.14 (7.6 g)以三氯甲烷-甲醇(25∶1～2∶1)为流动相进行正相硅胶柱色谱，经薄层色谱检视，合并相近的组分，得8个组分(Fr.14-1～14-8)。Fr.14-6(2.5g)经中压制备液相色谱，以甲醇-水(20∶80～80∶20)梯度洗脱，经高效液相色谱检测后，合并为7个部分(Fr.14-6-1～14-6-7)，Fr.14-6-4(10.3 mg)经反相高效制备液相色谱，以甲醇-水(26∶74)(7 mL·min-1)为流动相，得到化合物5(6.6 mg)，Fr.14-6-5 (121 mg)经反相高效制备液相色谱，以乙腈-0.1%三氟乙酸(19∶81)(7 mL·min-1)为流动相，得到化合物6(9.2 mg)和7(15.6 mg)。Fr.14-6-6 (221mg)经SephadexLH-20柱色谱，以95%的甲醇水洗脱，得到5个部分(Fr.14-6-6-1～14-6-6-5)，Fr.14-6-6-3(70.8 mg)经反相高效制备液相色谱，以乙腈-0.1%三氟乙酸(17∶83)(7 mL·min-1)为流动相，得到化合物8(12.2 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：黄色无定形粉末(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：285.11[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：1.31(3H，s，CH3-14)，1.77(3H，s，CH3-13)，1.94(3H，d，J=6.0 Hz，CH3-15)，2.17 (1H，d，J=12.0 Hz，Hα-9)，2.56(2H，m，H-2)，3.19(1H，d，J=12.0 Hz，Hβ-9)，3.89(1H，m，H-1)，5.82(1H，brs，H-3)，6.63(1H，s，H-6)，9.14(1H，s，8-OH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：74.7(C-1)，33.6(C-2)，130.7(C-3)，132.1(C-4)，153.0(C-5)，113.2(C-6)，156.1(C-7)，103.1(C-8)，44.3(C-9)，43.1(C-10)，118.6(C-11)，173.6(C-12)，8.6(C-13)，17.4(C-14)，20.0(C-15)。以上数据与文献数据基本一致[8]，故鉴定化合物1为乌药倍半萜内酯D，为首次从该植物中分离得到。

化合物2：白色无定形粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：199[M+H]+，221[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：3.80(6H，s，7-OCH3，8-OCH3)，7.20(2H，s，H-2，6)，9.16(1H，s，4-OH)，12.55(1H，s，9-COOH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：167.2(C-7)，147.4(C-3，5)，140.2(C-4)，120.4(C-1)，106.9(C-2，6)，56(7，8-OCH3)。以上数据与文献数据基本一致[9]，故鉴定化合物2为丁香酸。

化合物3：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：219[M+Na]+，195[M-H]-；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：1.19(3H，s，CH3-12)，1.38(3H，s，CH3-11)，1.63(1H，dd，J=13.3，4.0 Hz，Hα-2)，1.42(1H，dd，J=14.1，3.7 Hz，Hβ-2)，1.67(3H，s，9-CH3)，2.29(1H，dt，J=13.3，2.6 Hz，Hα-4)，1.87(1H，dt，J=14.1，2.6 Hz，Hβ-4)，4.08(1H，m，H-3)，4.98(1H，s，3-OH)，5.78(1H，s，H-6)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：183.5(C-8)，171.5(C-6)，112.6(C-7)，87.0(C-5)，65.3(C-3)，47.1(C-2)，45.8(C-4)，36.1(C-1)，30.9(C-11)，27.3(C-9)，26.7(C-12)。以上数据与文献数据基本一致[10]，故鉴定化合物3为黑麦草内酯，为首次从该植物中分离得到。

化合物4：浅黄色油状物，ESI-MSm/z：205[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：0.90(3H，d，J=6.6 Hz，10-CH3)，0.94 (1H，dd，J=12.7，4.0 Hz，Hα-5)，1.10(1H，m，H-6)，1.70(3H，s，9-CH3)，1.85(2H，m，H-1)，2.21(2H，m，H-2)，2.67(1H，dd，J=13.6，2.2 Hz，Hβ-5)，3.34(s，11-OH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：35.1(C-1)，24.4(C-2)，161.5(C-3)，104.1(C-4)，46.3(C-5)，29.3(C-6)，120.1(C-7)，172.3(C-8)，8.4(C-9)，21.4(C-10)。以上数据与文献数据基本一致[11]，故鉴定化合物4为荆芥内酯，为首次从该植物中分离得到。

化合物5：白色无定形粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：139[M+H]+，161[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：6.82(2H，d，J=8.6 Hz，H-3，5)，7.78(2H，d，J=8.6 Hz，H-2，6)，10.25(1H，brs，4-OH)，12.41(1H，brs，7-COOH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：170.0(C-7)，163.2(C-4)132.9(C-2，6)，122.6(C-1)，115.6(C-3，5)。以上数据与文献数据基本一致[9]，故鉴定化合物5为4-对羟基苯甲酸，为首次从该植物中分离得到。

化合物6：白色无定形粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：123[M+H]+，121[M-H]-；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：6.93(2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5)，7.76(2H，d，J=8.6 Hz，H-2，6)，9.79(1H，brs，7-CHO)，10.61(1H，brs，4-OH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：191.5(C-7)，163.8(C-4)，132.6(C-2，6)，128.9(C-1)，116.3(C-3，5)。以上数据与文献数据基本一致[9]，故鉴定化合物6为4-对羟基苯甲醛，为首次从该植物中分离得到。

化合物7：白色无定形粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：249[M+H]+，271[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：1.08(3H，s，14-CH3)，1.43(1H，d，J=12.1 Hz，Hβ-9)，1.47(3H，s，15-CH3)，1.51(3H，s，13-CH3)，2.24(1H，m，H-2)，2.30(1H，m，H-2)，2.35(1H，brt，J=11.7 Hz，Hβ-6)，2.64 (1H，dd，J=10.5，10.9 Hz，Hα-6)，2.84(1H，d，J=12.5 Hz，Hα-9)，2.86(1H，brd，J=12.1 Hz，H-5)，3.36(1H，dd，J=7.7，7.0 Hz，H-1)，4.70(1H，brs，H-3)，7.9(1H，s，8-OH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：74.0(C-1)，32.3(C-2)，121.1(C-3)，133.0(C-4)，48.2(C-5)，23.5(C-6)，161.2(C-7)，104.1(C-8)，46.7(C-9)，38.3(C-10)，120.7(C-11)，171.7(C-12)，7.9 (C-13)，9.8(C-14)，20.7(C-15)。以上数据与文献数据基本一致[12]，故鉴定化合物7为日本金粟兰内酯A，为首次从该植物中分离得到。

化合物8：白色无定形粉末(甲醇)，EI-MSm/z：211[M+Na]+，187[M-H]-；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：0.82(3H，s，10-CH3)，0.83(3H，s，9-CH3)，1.10(3H，s，7-CH3)，1.26(2H，m，H2-6)，1.39(1H，m，H-4)，1.46(1H，m，H-5)，1.65(1H，dt，J=12.8，3.9 Hz，H-3)，1.77(2H，m， H2-2)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：73.6(C-1)，49.1(C-2)，70.3(C-3)，55.8(C-4)，17.3(C-5)，39.5(C-6)，17.4(C-7)，74.3(C-8)，30.1(C-9)，29.7(C-10)。以上数据与文献数据基本一致[13]，故鉴定化合物8为1R，8-二羟基薄荷醇，为首次从该植物中分离得到。

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ChemicalConstituentsofEthylAcetate-solublePartsinAqueousEthanolicExtractofStemsandLeafofCallicarpakwangtungensisChun(Ⅱ)

CHEN Gang1，FU Huizheng2*，DAI Mian2，FENG Tongtong2，WANG Dong2*

(1.Jiangxi Provincal People’s Hospital，Nanchang 330006，China；2.Jiangxi Provincial Institute for Drug Control，Jiangxi Provincial Engineering Research Center for Drug and Medical Device Quality，Nanchang 330046，China)

Objective：To study the chemical constituents of ethyl acetate-soluble parts in the 70% aqueous ethanolic extract of the stems and leaf ofCallicarpakwangtungensisChun.Methods：The chemical constituents were isolated and purified by chromatographic column on silica gel，ODS，Sephadex LH-20 and MPLC.Their structures were elucidated by thin layer chromatographic analysis，spectroscopic evidence and compared with those in literatures.Results：Eight compounds were isolated from ethyl acetate soluble part of the 70% aqueous ethanolic extract，whose structures were elucidated as linderagalactone D(1)，syringic acid(2)，loliolide(3)，schizonepetin (4)，4-hydroxybenzoic acid (5)，4-hydroxybenzaldehyde (6)，chlojaponilactone A (7)，1R，8-dihydroxymenthol (8).Conclusion：Compounds1、3-8were isolated from this plant for the first time.

CallicarpakwangtungensisChun；Verbenaceae；chemical constituents

国家自然科学基金(81460589)

] 付辉政，助理研究员，研究方向：中药活性成分及质量标准研究，E-mail：fhzfhz620@sohu.com；王栋，主任中药师，研究方向：中药活性成分及质量标准研究，Tel：(0791)86258662，E-mail：jxdcwd@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.8.013

2016-12-05)

*[