FHIT、C-myc基因在宫颈癌中的表达及临床意义

宋春丽

(邯郸市中心医院妇一科，河北 邯郸 056000)



FHIT、C-myc基因在宫颈癌中的表达及临床意义

宋春丽

(邯郸市中心医院妇一科，河北 邯郸 056000)

目的 检测脆性组氨酸三联体基因(FHIT)、C-myc基因在宫颈癌中的表达，分析两者之间的相关性。方法 采用免疫组化SP法检测50例宫颈浸润癌组织(CC)、70例宫颈上皮内瘤变(CIN)和30例正常宫颈组织中FHIT和C-myc的表达、分析其与宫颈癌临床病理特点的关系及两者之间的相关性。结果 (1) FHIT在正常宫颈组织、CIN组及宫颈癌组中的表达分别为93.3%、67.1%、22%，C-myc在正常宫颈组织、CIN组及宫颈癌组中的表达分别为16.7%、47.1%、76%。(2)FHIT的表达率随FIGO分期升高、病理学分级升高而逐渐降低(P<0.05),在无淋巴结转移及有淋巴结转移的患者中逐渐降低(P>0.05)。C-myc阳性表达随FIGO分期升高、病理学分级升高而升高(P<0.05)，在无淋巴结转移及有淋巴结转移的患者中逐渐升高(P>0.05)。(3)FHIT与C-myc的表达呈负相关。结论 同时检测FHIT、C-myc基因可能有助于对宫颈癌的早期发现，并且有望成为对宫颈癌治疗效果评价及预后分析的有效方法，两者结合可作为宫颈癌预后判断的指标。

脆性组氨酸三联体基因； C-myc基因； 宫颈癌； 宫颈上皮内瘤变； 免疫组化

脆性组氨酸三联体基因(FHIT)是一种抑癌基因,位于 3P14.2 区域,该基因跨越人类染色体脆性部位 FRA3B，在调节细胞周期和凋亡中发挥作用。C-myc基因是一种可使细胞无限增殖、获永生化功能、促进细胞分裂的基因，与多种肿瘤的发生发展有关。FHIT、 C-myc在多种肿瘤组织中呈表达异常,但两者在宫颈癌中相互作用的关系目前国内外尚未见相关报道。本实验采用免疫组化方法对宫颈癌组织中FHIT和C-myc的表达进行检测,结合临床病理资料,探讨两者在宫颈癌中的表达及相互关系,为患者的预后估计提供参考。

1 材料与方法

1.1 标本来源及处理 本研究资料取自邯郸市中心医院从2012年1月至2015年9月手术切除及活检的宫颈组织石蜡包埋标本150例为研究对象，其中30 例正常宫颈标本取自因子宫良性病变行子宫切除术的患者，宫颈上皮内瘤变70例，其中CINⅠ15 例、CINⅡ20例、CINⅢ35例，宫颈癌50例，按FTGO 临床分期标准: Ⅰ期 16 例[其中Ⅰa1期3例，Ⅰa2期4例，Ⅰb1期 5例，Ⅰb2期4例，患者年龄19～45岁,平均年龄(33.9±5.94)岁]。Ⅱ期24 例[其中Ⅱa期10例，Ⅱb期14例，患者年龄22～58岁,平均年龄(46.4±9.94)岁]。Ⅲ期～IV期 10 例，患者年龄40～52岁,平均年龄(44.9±6.79)岁。宫颈癌患者均为宫颈鳞状细胞癌，按肿瘤分化程度: 角化性大细胞型鳞状细胞癌14例，非角化性大细胞型鳞状细胞癌26 例，小细胞型鳞状细胞癌10例。在手术的宫颈癌患者中，有淋巴转移5例，无淋巴结转移21例。全部标本均经过病理科诊断，术前未经过放、化疗及肿瘤药物治疗。

1.2 主要试剂 FHIT兔抗人多克隆抗体、C-myc鼠抗人单克隆抗体、SP试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。DAB显色试剂购自武汉博士德生物工程公司。

1.3 免疫组织化学染色 采用免疫组织化学S-P法，实验步骤按试剂盒说明书进行，以柠檬酸缓冲液高温高压进行抗原修复，DAB显色，自来水充分冲洗;梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。PBS代替一抗作空白对照，阳性对照为随试剂盒附带的阳线切片。每张切片选取5个高倍(400倍)视野，每视野观察100个细胞。

1.4 结果判定 所有切片的观察均经3名病理科医生独立在光镜下完成。FHIT蛋白的表达产物定位于细胞浆，C-myc蛋白的阳性表达产物定位于细胞核,以出现棕黄色颗粒为阳性。按染色强度计分,0分为无色,1分为淡黄色,2分为黄色,3分为棕黄色；按阳性细胞所占百分比计分,阳性细胞数为≤10%为0分(-)，阳性细胞数>10%～≤25%为1分(+)，阳性细胞数>25%～≤50%为2分(++)，阳性细胞数>50%～≤75%为3分(+++)，阳性细胞数>75%为4分(++++)。0～<3分为表达阴性，≥3分为表达阳性。

1.5 统计学方法 采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学处理，实验数据采用χ2检验,检验水准α=0.05(双侧)。

2 结 果

2.1 FHIT、 C-myc在正常宫颈组织、CIN组及宫颈癌组中的表达 FHIT在正常宫颈组织、CIN组及宫颈癌组中的表达分别为93.3%、67.1%、22%，其中正常宫颈组与CIN组比较差异有统计学意义(P<0.05)，CIN组与宫颈癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)，正常宫颈组与宫颈癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)。C-myc在正常宫颈组织、CIN组及宫颈癌组中的表达分别为16.7%、47.1%、76%，其中正常宫颈组与CIN组比较差异有统计学意义(P<0.05)，CIN组与宫颈癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)，正常宫颈组与宫颈癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 三组FHIT、 C-myc表达

2.2 FHIT、C-myc表达与宫颈癌临床病理特征的关系 FHIT蛋白在宫颈癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期的表达分别为43.8%、12.5%、10%，差异有统计学意义(P<0.05)，在角化性大细胞型鳞状细胞癌、非角化性大细胞型鳞状细胞癌及小细胞型鳞状细胞癌中的表达分别为50%、11.5%、10%，差异有统计学意义(P<0.05)。在无淋巴结转移及有淋巴结转移的宫颈癌中，表达分别为42.9%、20%，差异无统计学意义(P>0.05)。C-myc蛋白在宫颈癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期的表达分别为43.8%、87.5%、90%，差异有统计学意义(P<0.05)，在角化性大细胞型鳞状细胞癌、非角化性大细胞型鳞状细胞癌及小细胞型鳞状细胞癌中的表达分别为71.4%、76.9%、80%，差异无统计学意义(P>0.05)。在无淋巴结转移及有淋巴结转移的宫颈癌中，表达分别为76.2%、100%，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 FHIT和C-myc蛋白表达与宫颈癌临床特征的关系

2.3 宫颈癌组织中FHIT与C-myc表达的相关性 在50例宫颈癌中，FHIT与C-myc同时表达阳性有10例，同时表达阴性有5例，应用spearman相关分析，FHIT与C-myc的表达呈负相关(P<0.05)。见表3。

表3 FHIT和C-myc蛋白在宫颈癌中表达的相关性

注：r=-0.622，P=0.000。

3 讨 论

人乳头瘤病毒(HPV)是一种双链DNA病毒,其核心含有约7 800～7 900个碱基对高危型人乳头瘤病毒的持续感染,是子宫颈上皮内瘤变及子宫颈癌发生的最主要因素[1]。但仅有HPV感染对宫颈癌的发展是不够的，其他宿主因素包括改变肿瘤抑制基因的活动可能导致致癌过程[2]。到目前为止，多种人类原发肿瘤组织和细胞系中，尤其是暴露于环境致癌物的器官上皮肿瘤中经常发现有FHIT基因高比例的缺失，包括胃癌、结肠癌、乳腺癌、宫颈癌和头颈部肿瘤等。近年来，人们从转录、翻译等不同水平研究了FHIT与宫颈癌的关系。在宫颈癌中有44%～71%的FHIT基因的转录异常和表达异常，而且在宫颈癌前病变和原位癌中也有FHIT的异常转录和表达，表明FHIT基因的异常改变参与了宫颈癌的发生和发展。研究[2]表明FHIT基因CpG岛甲基化是FHIT基因失活的主要机制，是与宫颈癌的发生有密切关系的早期事件。本研究显示FHIT在正常宫颈组织、CIN组及宫颈癌组中的表达分别为93.3%、67.1%、22%，在宫颈癌中的表达明显低于CIN组及正常宫颈组，三组之间差异均有统计学意义，说明FHIT在宫颈癌中发生了缺失，与其他研究结果一致[3]。且发现FHIT表达与临床分期、病理分级关系密切，FHIT的低表达主要见于期别较高、小细胞型鳞状细胞癌及有淋巴结转移的宫颈癌患者中，提示它与宫颈癌潜在的恶性生物学行为密切相关，在宫颈癌的发生、发展中可能起重要作用。有研究表明，人乳头状瘤病毒16感染、FHIT基因甲基化和叶酸缺乏可能促进宫颈癌的进展，FHIT基因可能是一个有效的目标子宫颈癌的预防和治疗[4]。

C-myc基因是myc基因家族的重要成员之一，C-myc基因既是一种可易位基因，又是一种多种物质调节的可调节基因，也是一种可使细胞无限增殖，获永生化功能，促进细胞分裂的基因，与多种肿瘤发生发展有关。C-myc基因的扩增和过度表达可能是某些宫颈癌发生中的早发事件，约1/3的早期浸润性癌和某些宫颈上皮内瘤样病变3级出现C-myc的过度表达，但并未在正常宫颈上皮和低级别非典型增生中发现，有研究[5]表明，在早期癌中C-myc的扩增和预后较差有关。研究[6]证明，在宫颈癌中，C-myc蛋白的表达在有周围组织浸润、有淋巴结转移和远处转移时显著升高，其阳性表达随期别的增加而升高。何志连[7]等研究结果显示：C-myc在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌中阳性表达率分别为20%(2/10),45%(9/20)和66.7%(20/30), 且随FIGO分期、病理学分级、淋巴结转移而升高。本研究显示，C-myc在正常宫颈组织、CIN组及宫颈癌组中的表达分别为16.7%、47.1%、76%，且随FIGO分期、病理学分级而升高。在有淋巴结转移中的表达高于无淋巴结转移病例中的表达，说明C-myc参与了宫颈癌的发展，对预后起预测作用。

[1] 邱芳，王萍玲.人乳头瘤病毒疫苗的临床应用前景及展望[J].贵州医药，2015,39(3)：282-283.

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邯郸市科技局科技计划项目(项目编号：1323108087-13)

R737.33

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1000-744X(2016)03-0254-03

2015-11-02)