动物实验了解梗阻性黄疸不同时期肝脏氧化应激指标并抗氧化免疫营养治疗梗阻性黄疸患者疗效观察

刘飞 杨大刚△ 孙诚谊 王惠群 刘影 李福堂 梁一

(1.贵阳医学院附属医院肝胆外科；2.贵阳医学院营养与食品卫生教研室；3.贵阳医学院附属医院临床营养科，贵州 贵阳 550004)



·实验研究·

动物实验了解梗阻性黄疸不同时期肝脏氧化应激指标并抗氧化免疫营养治疗梗阻性黄疸患者疗效观察

刘飞1杨大刚1△孙诚谊1王惠群2刘影3李福堂1梁一3

(1.贵阳医学院附属医院肝胆外科；2.贵阳医学院营养与食品卫生教研室；
3.贵阳医学院附属医院临床营养科，贵州 贵阳 550004)

目的 建立梗阻性大鼠模型，了解梗阻性黄疸不同时期肝脏氧化应激指标的变化。研究抗氧化免疫营养治疗对有营养风险的梗阻性黄疸病人其肝功能及营养状态的影响，为临床抗氧化免疫营养治疗提供理论依据。方法 (1)选取健康大鼠54只随机分为正常组、假手术组与胆总管结扎组，建立梗阻性黄疸大鼠模型。于术后5、12、19 d 三个时相点检测SOD、MDA在大鼠肝脏组织中的含量。(2)选取30例有营养风险(NRS2002评分>3分)的中重度梗阻性黄疸病人，随机分对照组和干预组。对照组给予规范的肠外与肠内营养支持，干预组在规范营养支持的基础上添加抗氧化剂(维生素C)及免疫营养素(谷氨酰胺)，于入院第7天检测生化指标，比较两组各指标的差异。结果 胆总管结扎组术后各时相点的SOD含量均低于正常组及假手术组，差异有统计学意义(P<0.05)，MDA含量均高于正常组及假手木组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗7 d后，干预组病人的ALT、AST与JBIL，恢复优于对照组，差异有统计学意义(P<0.05); PA水平高于对照组差异有统计学意义(P<0.05)，ALB水平高于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 梗阻性黄疸病人处于氧化应激状态，抗氧化免疫营养治疗有利于肝功能和营养状态的恢复。

梗阻性黄疸； 抗氧化； 免疫营养； 氧化应激

梗阻性黄疸病人多数都伴有明显的肝脏功能及结构的损伤。有学者[1]认为自由基及其引起的氧化应激贯穿各种肝脏病变的始终，是引起肝脏病变的主要机制之一。VC、VE和谷胱甘肽等是研究较多的抗氧化剂，而在传统营养基础上添加免疫营养素谷氨酰胺可促进病人肝功能的恢复，改善其营养状态[2]。因此，我们对大鼠进行梗阻性黄疸造模,研究其是否存在氧化应激，同时研究抗氧化剂和免疫营养素对有营养风险的梗阻性黄疸病人的肝功能及营养状态的影响，为这部分病人使用抗氧化剂提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 基础研究部分 (1)实验动物分组：实验动物采用SD大鼠(由贵阳医学院动物中心提供)。适应性喂养1周后，选择体质量为250～300 g的大鼠54只。随机分为正常组、假手术组和胆总管结扎组，建立梗阻性黄疸大鼠模型，其中每组各分为结扎术后5、12、19 d三个时相点，每个时相点6只动物。(2)实验方法：正常组不作任何操作。假手术组分离胆总管但不结扎。胆总管结扎组胆总管双重结扎，完成梗阻性黄疸造模。使用ELISA法检测在不同时相点肝脏组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和丙二醛(malndialdehyde，MDA)的含量。

1.2 临床研究部分 (1)一般资料：选取2013年1月至2014年3月于贵阳医学院附属医院就诊的30例胆红素> 17 lumol/L且NRS2002评分>3分的梗阻性黄疸病人，随机分为对照组(18例)和干预组(12例)。每位病人均经临床明确诊断，有明确的病因、病史、症状、体征及相关影像资料及实验室指标。两组病人年龄、性别、所患良恶性疾病、治疗各生化指标均差异无统计学意义(P>0.05)。(2)治疗措施：两组病人均在入院后2～3 d解除胆道梗阻。对照组每日予以规范的肠外+肠内营养支持。干预组在规范营养支持的基础上每日添加丙氨酰一谷氨酰胺1.5～2.0 mL/kg，维生素C 200 mg。两组患者治疗期间均予以常规护肝治疗。

1.3 指标检测 于入院第7天空腹抽取外周静脉血，检测谷丙转氨酶( alanine aminotransferase ,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、总胆红素(totai bilirubin，TBIL)、血清白蛋白(serum albumin，ALB)及前白蛋白(prealbumin，PA)的含量。

2 结 果

2.1 各组大鼠3个时相点氧化应激指标的变化 总胆管结扎组大鼠术后5、12、19 d肝脏组织中SOD的含量均低于正常组及假手术组差异有统计学意义(P<0.05)，MDA的含量均高于正常组及假手术组差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

组别时相点SOD/(IU/L)MDA/(nmol/L)5 12.95±1.01 3.37±0.23正常组12 13.37±1.18 3.29±1.0319 12.47±1.57 3.37±0.225 13.11±0.72 3.35±0.32假手术组12 13.00±0.45 3.48±0.1419 12.51±1.25 3.39±0.185 11.74±0.76*△ 3.72±0.25*△胆总管结扎组12 11.34±0.62*△ 4.02±0.19*△19 10.00±1.34*△ 3.73±0.19*△

注：与正常组比较，*P<0.05;与假手术组比较，△P<0.05。

2.2 两组病人生化指标的比较 入选病人治疗前各生化指标无差异，但在治疗7 d后，干预组病人的ALT、AST与IBfL恢复优于对照组差异有统计学意义(P<0.05); PA水平高于对照组差异有统计学意义(P<0.05)，ALB水平高于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)。

组别ALT/(U/L)AST/(U/L)TBIL/(μmol/L)ALB/(g/L)PA/(mg/L) 对照组89.2±52.658.9±30.6287.5±88.6735.1±3.8101.5±43.2 干预组59.3±48.4*40.1±31.8*226.1±88.78*36.6±4.2144.9±47.6*

注：与对照组比较，*P<0.05。

3 讨 论

肝细胞线粒体含量丰富，极易产生大量的氧自由基，而过量的氧自由基容易导致氧化应激。研究[l-3]表明氧自由基引起的氧化应激是肝脏病变的基础并贯穿各种肝脏病变的始终，是引起肝脏病变的主要机制之一。本研究显示：胆总管结扎组大鼠与正常组和假手术组相比，肝脏组织中MDA水平明显升高但SOD水平明显降低，表明此时梗阻性黄疸大鼠体内自由基生成与清除的动态平衡被打破，处于氧化应激状态。而这种失衡状态在体内持续越久组织细胞抗氧化防御保护功能越弱，肝损伤程度越重[4]。

谷氨酰胺在人体正常生理代谢与疾病的氧化应激中发挥的作用也越来越受到关注[5]。Abiles等[6]的研究证明了补充谷氨酰胺可以提高处于疾病氧化应激状况下患者的抗氧化能力，减少多余自由基造成的氧化损伤。韩刚等[7]的研究证明了谷氨酰胺能够改善梗阻性黄疸患者的免疫状态。本研究结果显示：给予梗阻性黄疸患者Vc和谷氨酰胺治疗后，肝功能指标ALT、AST、IBIL较对照组恢复地更快，营养指标PA亦升高，说明抗氧化免疫营养治疗对患者营养状态和肝功能恢复有一定的作用。但营养指标ALB虽然升高，但和对照组相比差异无统计学意义，考虑为ALB半衰期较长，本研究观测时间为7 d，导致未能准确观察其变化，有待更深入的研究。

本研究证实了梗阻性黄疸患者明确存在着氧化应激，初步证明给予患者抗氧化免疫营养治疗后，他们的营养状态和肝功能有一定的恢复，但还需扩大样本量进行更深入的研究。

[1] 刘亚锋．氧化应激与肝脏保护[J]．胃肠病学与肝胆病学杂志.2011，7(7)：594-597.

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[3] Muriel P.Role of free radicals in Iiver diseases[J].Hepat010gy,2009,3(4):526-536.

[4] 杨耀娴,张月成，党彤，等．肝病血清丙二醛及超氧化物歧化酶测定的临床意义[J]．胃肠病学与肝胆病学杂志，1998,7(4):361-363．

[5] 曹婧然，谢颖，李辉,等，谷氨酰胺在氧化应激疾病中的作用及其机制的研究[J]．临床误诊误治，2013，26(9):102-104.

[6] Abiles J,Moreno Torres R,Morata G,et al.Effects of supply with glutamine on antioxidant system and lipid peroxidation in patients with parenteral nutrition[J1.Nutr Hosp,2008,23(4):332-339.

[7] 韩刚，宫路路，韩喜春.谷氨酰胺对老年恶性梗阻性黄疸患者可溶性白细胞介素D受体的影响[J]．中国老年学杂志，2015，25(11):349-1350．

R-332;R575

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2016-09-23)

△通信作者，E-mail:ydg435888@126.com